HPLC系統(tǒng)能否有效運(yùn)行取決于流動(dòng)相和樣品不受化學(xué)雜質(zhì)或固體懸浮液的影響。對(duì)于HPLC流動(dòng)相的處理和使用注意事項(xiàng)討論主要圍繞在流動(dòng)相的制備和使用中應(yīng)采取的措施。對(duì)于樣品過(guò)濾的重要性討論主要圍繞在進(jìn)樣時(shí)清潔樣品的好處。

        HPLC色譜柱是HPLC系統(tǒng)中的重要組成部分，使用時(shí)需要細(xì)心使用，用完后要維護(hù)避免下次使用發(fā)生問(wèn)題。經(jīng)常更換色譜柱是很昂貴的，因此為了節(jié)約成本，需要zui大程度地延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。同時(shí)也要細(xì)心維護(hù)色譜柱，以便每次獲得結(jié)果保持準(zhǔn)確性和一致性。

        由于經(jīng)常使用色譜柱，化學(xué)雜質(zhì)和固體懸浮液顆粒等會(huì)逐漸積累，色譜性能在使用過(guò)程中開(kāi)始下降。流動(dòng)相或樣品中存在的大顆粒雜質(zhì)開(kāi)始沉積在色譜柱的入口上，從而干擾流動(dòng)的均勻性。較小的顆粒會(huì)導(dǎo)致背壓增加，導(dǎo)致阻塞固定相中的流路。

        污染物有哪些？

        1、反相分離中高度保留的化合物，例如脂肪酸。

        2、不可逆地保留的化合物，如殘留的蛋白物質(zhì)，在樣品提取時(shí)并未完全去除。解決這個(gè)問(wèn)題可以在HPLC分析之前對(duì)樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行去蛋白化。

        3、顆粒雜質(zhì)，可能是樣品未過(guò)濾，系統(tǒng)組件（例如泵或進(jìn)樣器中的密封件）的磨損導(dǎo)致產(chǎn)生顆粒雜質(zhì)。又或者是進(jìn)樣時(shí)溶劑中本身還有顆粒物雜質(zhì)，沒(méi)有過(guò)濾導(dǎo)致顆粒物質(zhì)進(jìn)入系統(tǒng)。建議使用溶劑進(jìn)樣口過(guò)濾器，過(guò)濾掉微小顆粒物質(zhì)，避免進(jìn)入到HPLC系統(tǒng)中。

        恒譜生2μ,5μ,10μ,20μm液相色譜儀流動(dòng)相入口溶劑過(guò)濾器，保護(hù)泵、單向止回閥 、進(jìn)樣器 、色譜柱免受有害顆粒污染物的損壞；吸濾阻力較小，較大的圓柱形篩板表面積，幾乎沒(méi)有背壓；吸濾頭尺寸較小，可用于多種小瓶口的存儲(chǔ)池容器；不會(huì)將空氣引入系統(tǒng)，無(wú)氣泡進(jìn)入流動(dòng)相管路，儲(chǔ)液瓶溶劑抽取利用率可達(dá)99%以上，大大減少瓶底溶劑因無(wú)法凈真空吸取而造成的浪費(fèi)；設(shè)有多階管路接頭，兼容多種內(nèi)徑溶劑流動(dòng)相管路，不需要更換吸濾頭即可匹配不同規(guī)格的吸管；產(chǎn)品兼 容性高，適用于各種品牌的HPLC系統(tǒng)。

        4、柱內(nèi)殘留緩沖液，干燥后導(dǎo)致結(jié)晶沉淀。使用色譜柱后用HPLC級(jí)純水或緩沖溶液洗滌色譜柱可防止此類(lèi)鹽沉淀的形成。

        什么是保護(hù)柱？

        保護(hù)柱是安裝在進(jìn)樣器和分析柱之間的，截留導(dǎo)致色譜柱篩板堵塞、柱頭塌陷和柱效下降的化學(xué)物質(zhì)和顆粒物?；瘜W(xué)物質(zhì)和顆粒物會(huì)污染、堵塞色譜柱，給分析帶來(lái)不良影響等。這時(shí)通過(guò)在色譜柱前安裝分析保護(hù)柱可以防止其產(chǎn)生，能起保護(hù)色譜柱的作用。保護(hù)柱zui好與分析柱具有相同的填料，以消除分離的復(fù)雜性。保護(hù)柱的內(nèi)部ID應(yīng)與分析柱相當(dāng) ，以最小化背壓。保護(hù)柱需要定期更換，可根據(jù)例如背壓增加，峰展寬和峰保留時(shí)間的變化來(lái)決定更換的周期。

        恒譜生建議您可以有效地利用、定期更換色譜保護(hù)柱，以延長(zhǎng)色譜柱的壽命。

疫苗檢測(cè)：

人生就像一段旅程，這段路程有時(shí)精彩， 有時(shí)荊棘，我們?cè)诰手芯`放自我，在荊棘中奮勇前進(jìn)。而在這段旅程中，保駕護(hù)航的疫苗不僅在傳染病領(lǐng)域提供了預(yù)防功能，新型疫苗在一些醫(yī)學(xué)疑難雜癥的預(yù)防和治 療領(lǐng)域有了新的突破。疫苗因其組成復(fù)雜，結(jié)構(gòu)龐大，工藝繁瑣，使得其檢測(cè)和分析更有挑戰(zhàn)。今天我們從疫苗中主成分檢測(cè)，工藝監(jiān)控和載體檢測(cè)三個(gè)角度分享一下疫苗檢測(cè)中的創(chuàng)新應(yīng)用。

HPLC方法檢測(cè)疫苗中的主成分

蛋白質(zhì)疫苗在預(yù)防肝炎，帶狀皰疹病毒，HPV感染，新冠病毒和其他病毒感染起到了非常重要的應(yīng)用，除了經(jīng)典的酶聯(lián)免疫的方法。液相色譜法因檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，越來(lái)越多應(yīng)用于蛋白總量的測(cè)定。核酸疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)中，HPLC技術(shù)的應(yīng)用也解決了一些檢測(cè)難題。

SEC方法檢測(cè)目標(biāo)蛋白總量

-BIOBASIC SEC 120 

BIOASIC SEC-120色譜柱檢測(cè)分子量比較小的用于豬的疫苗蛋白總含量測(cè)定，重復(fù)性良好。優(yōu)于酶聯(lián)免疫法偏差較大的結(jié)果。

SEC方法檢測(cè)人免疫球蛋白二聚體

-MAbPac SEC-1

SEC方法是檢測(cè)蛋白類(lèi)制劑中的聚體分析的經(jīng)典方法。5 μm的300?孔徑的MAbPac SEC-1色譜柱可以快速分析人血白蛋白的聚體和單體。

疫苗分子量，結(jié)構(gòu)和組成不同，我們有不同排阻范圍的柱子選擇，下面是我們可以用于疫苗檢測(cè)的一些SEC柱子信息，可以用于快速蛋白純度測(cè)定和含量測(cè)定。

RP方法檢測(cè)蛋白組成-MAbPac RP

蛋白類(lèi)疫苗需要檢測(cè)目標(biāo)蛋白的含量，對(duì)于抗體類(lèi)蛋白，可以采用親和色譜法快速定量，重組蛋白常用電泳法，免疫化學(xué)法等方法，很少使用反相色譜法進(jìn)行。因?yàn)橐呙绯煞直容^復(fù)雜，常規(guī)的硅膠基質(zhì)反相色譜柱，孔徑比較小，不耐堿洗等因素。新型的耐堿性聚合物基質(zhì)的MAbPac RP色譜柱，可以在檢測(cè)該重組疫苗蛋白，在0.1 mg/mL-2.5 mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性良好。用于蛋白疫苗定量檢測(cè)。

SEC方法檢測(cè)mRNA聚體

-BIOBASIC SEC 1000

尺寸排阻色譜法（SEC）是用于聚體分析的經(jīng)典方法，硅膠基質(zhì)的BIOBSIC SEC 1000可以將該2000 nt的聚體與單體分開(kāi)。

RP方法檢測(cè)mRNA雜質(zhì)-DNAPac RP

反相色譜法是在變性條件下分析mRNA的雜質(zhì)，DNAPac RP 1500?的孔徑，可以用于不同堿基對(duì)大小的mRNA的分離。

IEC方法檢測(cè)mRNA雜質(zhì)-DNAPac PA200

離子交換色譜法在非變性條件下分析mRNA雜質(zhì)，可以用于監(jiān)控mRNA工藝中雜質(zhì)的去除情況。也可以用于成品中mRNA完整性的檢測(cè)。

HPLC方法檢測(cè)疫苗生產(chǎn)中的工藝組分

疫苗生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)引入各類(lèi)潛在風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)，在生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)引進(jìn)一些滅活劑，裂解劑，凍干保護(hù)劑等制劑，為了增加免疫持久性，調(diào)節(jié)親和力會(huì)加入一些佐劑，賦型劑，防腐劑等組分。特色液相色譜柱在CAD檢測(cè)器下可以快速進(jìn)行這類(lèi)組分的檢測(cè)。

RP方法檢測(cè)戊二醛-Acclaim 120 C18

戊二醛具有甲醇含量低，無(wú)致畸變，無(wú)積毒的特點(diǎn)，越來(lái)越被廣泛用于滅活。DNPH衍生后的戊二醛可以產(chǎn)生兩個(gè)衍生產(chǎn)物，兩個(gè)產(chǎn)物都可以在Acclaim 120 C18柱上得到很好的分離，在戊二醛在0.4 μg/mL-10.0 μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性良好。

陰離子交換反相方法檢測(cè)去氧膽酸

-Acclaim Surfactant

去氧膽酸是一種裂解劑，可以裂解病毒顆粒后經(jīng)過(guò)純化去除部分病毒成分，有效降低不良反應(yīng)。Acclaim Surfactant Plus色譜柱采用陰離子交換和RP雙重保留機(jī)理，可以在CAD檢測(cè)器下分離和定量不同的去氧膽酸。

陰離子交換反相色譜法快速檢測(cè)吐溫80

-Retain AX 

吐溫80也可以用于裂解病毒顆粒，分光光度法因其萃取時(shí)間較長(zhǎng)，導(dǎo)致分析時(shí)間比較長(zhǎng)，使用Hypersep Retain AX色譜柱可以避免復(fù)雜的樣品前處理，直接定量生物制劑中的吐溫80含量。

陰離子交換，RP色譜法分析PEG組成

-Accliam Surfactant Plus

對(duì)聚乙二醇（PEG）評(píng)估時(shí)，希望在色譜上對(duì)其進(jìn)行盡可能的分離，以獲得指紋譜圖，進(jìn)行更好的質(zhì)量控制。Acclaim? Surfactant Plus是一款表面活性劑專(zhuān)用柱，尤其適合分析聚合物類(lèi)的輔料，在對(duì)不同聚合度的PEG分析 時(shí)，都能夠獲得優(yōu)秀的峰型和分離度。

HILIC分析蔗糖-Hypersil APS-2

蔗糖，乳糖添加在活性物質(zhì)濃度較低的疫苗中，減少冷凍干燥時(shí)被升華的氣流帶走并且使凍干后的產(chǎn)品能形成較理想的團(tuán)塊。Hypersil APS-2在分析蔗糖，乳糖時(shí)，峰對(duì)稱(chēng)度好，定量準(zhǔn)確。

RP分析膽固醇、DPPC、Lyso-PC和皂苷分析-Hypersil Gold PFP

HPLC方法檢測(cè)疫苗載體

RP分析納米脂質(zhì)體組成-Acclaim 300 C18

RP分析納米脂質(zhì)體組成-Accucore C30

納米脂質(zhì)體是一種非常有前景的藥物載體，可以有效保護(hù)mRNA等藥物運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞中，脂質(zhì)體的組成和比例會(huì)影響藥物的包裹率和穩(wěn)定性，300?的Acclaim C18色譜柱和80?的Accucore C30色譜柱可以將納米脂質(zhì)體中的幾種組分分開(kāi)。

IEC分析AAV包裹率-ProPac3R SAX 

AAV用于藥物載體中，其包裹率通常通過(guò)超速離心的方法測(cè)定，但是檢測(cè)時(shí)間比較長(zhǎng)，儀器成本也比較高。新型的，單分散的3um的強(qiáng)陰離子交換柱ProPac 3R SAX可以將不同亞型的包裹的AAV與空殼的AAV分開(kāi)，并且可以得到雜質(zhì)峰。

疫苗接種是預(yù)防控制傳染病最有效的手段，新冠疫情中多種不同技術(shù)路徑的疫苗均用于防疫中，其中核酸疫苗帶來(lái)重要變革。相信新的檢測(cè)手段和方法會(huì)在疫苗領(lǐng)域有更廣泛的應(yīng)用。