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問(wèn)答社區(qū)

利用大腸桿菌表達(dá)蛋白質(zhì)所使用的表達(dá)載體需具備哪些特點(diǎn)

uohvzpgjr 2017-10-24 08:37:46 572  瀏覽
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參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

  • asd704616717a 2017-10-25 00:00:00
    構(gòu)建表達(dá)載體首先取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)坷龑?shí)驗(yàn)否要求蛋白表達(dá)必須溶性蛋白載體面標(biāo)簽決定純化決定實(shí)驗(yàn)本等等系列需求 拿帶標(biāo)簽載體例帶標(biāo)簽增加蛋白質(zhì)溶性純化帶便般都采用標(biāo)簽般都目蛋白N端需要考慮讀碼框問(wèn)題定要與前面讀碼框保持致 利用酶切連接連入目載體應(yīng)該都知道或者用gateway系統(tǒng)非便我經(jīng)用gateway載體構(gòu)建起速度呼呼 基本些吧主要考慮選擇標(biāo)簽讀碼框別錯(cuò) 問(wèn)題直接發(fā)信給我

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構(gòu)建表達(dá)載體想降本增效?看這一篇就夠了

想要開(kāi)發(fā)有穩(wěn)定生產(chǎn)能力的細(xì)胞株,除了在細(xì)胞開(kāi)發(fā)中對(duì)于細(xì)胞表達(dá)能力的評(píng)估篩選以外,前期的表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程也非常重要。使用納升移液技術(shù)可以顯著提高細(xì)胞株過(guò)程基因合成,表達(dá)載體構(gòu)建以及轉(zhuǎn)染篩選等實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)效率,降低實(shí)驗(yàn)成本。


聲波移液展示Echo?移液系統(tǒng)依靠專 利技術(shù)(U.S. Patent 6938995)和創(chuàng)新方法改變移液操作在整個(gè)生命科學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用。它采用動(dòng)態(tài)液體分析(Dynamic Fluid Analysis?, DFA)技術(shù)和聲波移液(Acoustic Droplet Ejection,ADE)技術(shù),讓研究人員能夠移取多種不同類型的液體,完成微量小體積(2.5/25nL)的移液工作。全流程無(wú)需槍頭耗材,無(wú)交叉風(fēng)險(xiǎn)。


納升移液技術(shù)讓細(xì)胞株構(gòu)建

更快、更準(zhǔn)、更經(jīng)濟(jì)


更快

—— Echo快速任意孔到任意孔移液,極速基因組裝

在質(zhì)粒構(gòu)建前期,需要非常多的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn),如基因組裝中將不同的DNA片段混合,在檢測(cè)反應(yīng)中將不同的樣本組合,在NGS文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程中將多個(gè)文庫(kù)pooling到一起,在CRISPr基因編輯中構(gòu)建sgRNA文庫(kù)等等,這些實(shí)驗(yàn)都需要進(jìn)行快速、靈活的加樣移液,就算使用高通量的移液工作站,往往也要好幾小時(shí)才能完成。納升移液技術(shù)Echo的任意孔到任意孔的快速移液特點(diǎn)則讓此類應(yīng)用簡(jiǎn)單、快速化,每次轉(zhuǎn)移花費(fèi)更少時(shí)間更短。這為基因組裝節(jié)省了高達(dá)82%的時(shí)間。


從母板任意孔轉(zhuǎn)移任意體積樣品到目標(biāo)板任意孔中,實(shí)現(xiàn)快速挑選、樣品混合和組合。


有效縮短實(shí)驗(yàn)周期


更準(zhǔn)

—— Echo加樣精 準(zhǔn),提高克隆效率

利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進(jìn)行篩選,需要對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行鑒定, 而qPCR也是常用的鑒定方法之一。使用Echo納升移液技術(shù)進(jìn)行微量化克隆篩選鑒定,可以以更少的實(shí)際成本精 準(zhǔn)完成實(shí)驗(yàn)。使用Echo完成 qPCR的反應(yīng)體系構(gòu)建,通過(guò)減少每個(gè)組件的體積,并使用不使用tips的Echo,將反應(yīng)體積縮小10倍,從10 μL減少到1 μL,成本降低了8倍。


精 準(zhǔn)減小實(shí)驗(yàn)體積


更經(jīng)濟(jì)

—— Echo微量化,縮小反應(yīng)體系,讓新技術(shù)更經(jīng)濟(jì)

系統(tǒng)化的設(shè)計(jì)必然會(huì)帶來(lái)更大的樣本量,從而導(dǎo)致更高的費(fèi)用, Echo采用聲波的能量進(jìn)行無(wú)接觸式移液,且每滴液滴僅為2.5nL或25nL,因此可以直接省去吸頭耗材的消耗,也可以將檢測(cè)反應(yīng)體系降低4-100倍,使成本急劇下降。


有效縮減試劑成本


Gibson and Golden Gate Assembly實(shí)驗(yàn):不同反應(yīng)體積的成本效益和組裝效率比較


產(chǎn)品信息

“僅用于科研,不用于臨床診斷”



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