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  打醬油BOS 2013-04-14 00:00:00

  目的 探討影響血液細(xì)胞分析儀測(cè)定血小板(PLT)的因素，排除假性和假性降低情況，及時(shí)準(zhǔn)確地為臨床提供可靠的診治依據(jù)。 方法 使用血液細(xì)胞分析儀（Sysmex Kx-21）及目視顯微鏡法同時(shí)對(duì)160余例血小板數(shù)與直方圖不符標(biāo)本進(jìn)行計(jì)數(shù)，對(duì)比分析。 結(jié)果 血小板聚集、小紅細(xì)胞數(shù)量、試劑的質(zhì)量、抗凝劑的種類及比例、標(biāo)本放置時(shí)間和反復(fù)混勻次數(shù)、血小板體積異常等均可影響血細(xì)胞分析儀準(zhǔn)確計(jì)數(shù)PLT。 結(jié)論 血液細(xì)胞分析儀并不能完全代替顯微鏡計(jì)數(shù)，對(duì)PLT計(jì)數(shù)與直方圖不符標(biāo)本，應(yīng)分析原因，用顯微鏡計(jì)數(shù)或重新采血。 血小板（PLT）檢測(cè)是研究止血與凝血障礙的重要指標(biāo)之一，也是其他血小板參數(shù)可靠性的基礎(chǔ)，其檢測(cè)結(jié)果的可靠性至關(guān)重要。血小板由于體積小，特別是容易發(fā)生粘附、聚集和變性破壞，故常難以準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。血液細(xì)胞分析儀的普及，大大提高了工作效率，但對(duì)血小板檢測(cè)，其結(jié)果往往不很穩(wěn)定。使用血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板的影響因素很多，現(xiàn)探討如下。　　1 材料與方法　　1.1 儀器 　　血液細(xì)胞分析儀（Sysmex Kx-21），為日本Sysmex公司產(chǎn)品?！　?.2 試劑 　　全部配套試劑和質(zhì)控液。　　1.3 檢測(cè)方法 　　對(duì)日常標(biāo)本進(jìn)行分析，并對(duì)其中160余例血小板數(shù)量與直方圖不符標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行目視顯微鏡計(jì)數(shù)?！　? 結(jié)果　　2.1 正常與異常圖形PLT鏡檢結(jié)果 　2.2 不同MCV值血細(xì)胞分析儀與鏡檢法PLT結(jié)果比較 在MCV＞70fl時(shí)，血細(xì)胞分析儀法與顯微鏡法相比，差異無(wú)顯著性。在MCV＜70fl時(shí)，血細(xì)胞分析儀法與顯微鏡法相比差異有顯著性。表2 不同MCV值血細(xì)胞分析儀與鏡檢法PLT結(jié)果的比較(略)　　3 討論 采血過(guò)程中因操作緩慢、穿刺不順、組織液混入，混勻不及時(shí)等均可促成血小板（PLT）聚集，導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。在PLT直方圖上提示有大顆粒存在，PLT聚集是影響PLT計(jì)數(shù)的主要原因。對(duì)此種情況進(jìn)行了顯微鏡鏡檢，并與正常圖形進(jìn)行對(duì)比，由表1可看出，此種異常圖形的出現(xiàn)，絕大部分是由PLT聚集所引起，結(jié)果極不可靠，須重新采血。 由于血小板（PLT）和紅細(xì)胞（RBC）是在同一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)中通過(guò)顆粒大小來(lái)加以鑒別的，大量小紅細(xì)胞的存在可引起PLT上限區(qū)域的改變。在平均紅細(xì)胞容積（MCV）大于70fl時(shí)，儀器一般無(wú)PLT上限區(qū)域干擾報(bào)警，血細(xì)胞分析儀法與顯微鏡法相比，差異無(wú)顯著性。在MCV小于70fl時(shí)，儀器往往提示上限區(qū)域有干擾，紅細(xì)胞直方圖上顯示有小紅細(xì)胞存在，如表2所示。研究發(fā)現(xiàn)，MCV值越小，小紅細(xì)胞數(shù)量越多，被記錄的PLT數(shù)就越多，血小板計(jì)數(shù)值就越高，儀器法與鏡檢法相比差異越顯著。此種現(xiàn)象可用流式細(xì)胞技術(shù)或二維激光散射技術(shù)避免［1］。實(shí)際工作中采用手工法亦可獲得可靠的血小板計(jì)數(shù)值。 血細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果，尤其是血小板（PLT）的結(jié)果，直接反映試劑的質(zhì)量。原則上強(qiáng)調(diào)使用與儀器檢測(cè)原理相匹配的試劑［2］。溶血?jiǎng)┦茄?xì)胞分析儀試劑中的主要試劑，能將紅細(xì)胞溶解，并能使白細(xì)胞的體積發(fā)生規(guī)律性變化。理論上講PLT計(jì)數(shù)時(shí)的脈沖大小只與稀釋液的性能和儀器的設(shè)置有關(guān)，與溶血?jiǎng)┑男阅軣o(wú)關(guān)。但實(shí)際工作發(fā)現(xiàn)，若溶血不完全，由于紅細(xì)胞碎片沖洗不徹底將引起PLT假性。此外，稀釋液的滲透壓、離子強(qiáng)度等亦可影響檢測(cè)結(jié)果。特別注意的事，試劑應(yīng)避免污染，否則，雜質(zhì)微粒會(huì)使本底，導(dǎo)致Z后計(jì)數(shù)結(jié)果偏高。　　抗凝劑的種類對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大，國(guó)際化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）推薦用EDTA二鉀抗凝。另外，血液和抗凝劑比例也會(huì)影響檢測(cè)質(zhì)量。血液比例過(guò)高時(shí)，由于抗凝劑相對(duì)不足，血漿中出現(xiàn)微血塊的可能性增加。微凝塊可能堵塞儀器影響檢測(cè)結(jié)果。如果血少，抗凝劑的濃度，血小板會(huì)腫脹、崩解、產(chǎn)生正常PLT大小的碎片，從而無(wú)法得出正確的結(jié)果［3］?！　↓R天蕊等［4］的研究表明，標(biāo)本放置時(shí)間太長(zhǎng)，易產(chǎn)生巨大血小板，這種巨大血小板分布于紅細(xì)胞直方圖的100～250fl處，引起血小板計(jì)數(shù)偏低，平均紅細(xì)胞容積偏高。此外，全血標(biāo)本需不斷混勻，2h內(nèi)完成測(cè)定?！　≡谡Ｇ闆r下，血細(xì)胞分析儀對(duì)血細(xì)胞體積的識(shí)別有明顯的體積界限：PLT2～30fl。根據(jù)Coulter原理，儀器只識(shí)別顆粒大小而不能識(shí)別顆粒的性質(zhì)。當(dāng)其體積異常超過(guò)該儀器設(shè)定的閾值，往往會(huì)造成誤判. 此外，在血小板（PLT）體積分布圖上，2～3fl粒子過(guò)高時(shí)，圖形左移甚至縮窄呈“尖峰”樣，此種情況除血小板體積偏小外，常有紅細(xì)胞碎片、冷凝球蛋白、紅細(xì)胞夾雜物等引起，一起致計(jì)數(shù)結(jié)果［5］。有報(bào)道認(rèn)為，白血病細(xì)胞、皮下脂肪滴污染及標(biāo)本的細(xì)菌污染等，亦能引起PLT測(cè)定值偏高，有待進(jìn)一步探討。由此可見(jiàn)，PLT計(jì)數(shù)是否準(zhǔn)確，應(yīng)結(jié)合直方圖進(jìn)行判斷，必要時(shí)進(jìn)行顯微鏡計(jì)數(shù)或重新采血。

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  我是LHNan 2013-04-16 00:00:00

  血細(xì)胞分析儀是醫(yī)院臨床檢驗(yàn)應(yīng)用非常廣泛的儀器之一，隨著近幾年計(jì)算機(jī)技術(shù)的日新月異的發(fā)展，血細(xì)胞分析的技術(shù)也從三分群轉(zhuǎn)向五分群，從二維空間進(jìn)而轉(zhuǎn)向三維空間，而且我們也注意到現(xiàn)代血細(xì)胞分析儀的五分類技術(shù)許多采用了和當(dāng)今非常先進(jìn)的流式細(xì)胞儀相同的技術(shù)，如散射光檢測(cè)技術(shù)、鞘流技術(shù)、激光技術(shù)等等。本文ZD就五分群血細(xì)胞分析儀器的檢測(cè)方法及其應(yīng)用加以闡述。 體積、電導(dǎo)、激光散射法（VCS） 這是Beckman－Coulter公司生產(chǎn)的血細(xì)胞分析儀所采用的經(jīng)典分析方法，它集三種物理學(xué)檢測(cè)技術(shù)于一體，在細(xì)胞處于自然原始的狀態(tài)下對(duì)其進(jìn)行多參數(shù)分析。該方法也稱為體積、電導(dǎo)、激光散射血細(xì)胞分析法。此技術(shù)采用在標(biāo)本中首先加入紅細(xì)胞溶血?jiǎng)┤芙獾艏t細(xì)胞，然后加入穩(wěn)定劑來(lái)中和紅細(xì)胞溶解劑的作用，使白細(xì)胞表面、胞漿和細(xì)胞體積保持穩(wěn)定不變。然后應(yīng)用鞘流技術(shù)將細(xì)胞推進(jìn)到流動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)池（Flowcell）中，接受儀器VCS三種技術(shù)的檢測(cè)。 V代表體積（Volume）測(cè)量法，是采用經(jīng)典的庫(kù)爾特ZL技術(shù)，用低頻電流準(zhǔn)確分析細(xì)胞體積。體積是區(qū)分白細(xì)胞亞群的一個(gè)重要的參數(shù)，它可有效區(qū)分體積大小差異顯著的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。 C代表高頻電導(dǎo)性（Conductivity），采用高頻電磁探針原理測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)間的差異，也是該公司的ZL技術(shù)。細(xì)胞膜對(duì)高頻電流具有傳導(dǎo)性，當(dāng)電流通過(guò)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞核的化學(xué)組份可使電流的傳導(dǎo)性產(chǎn)生變化，其變化量可以反映出細(xì)胞內(nèi)含物的信息。該參數(shù)可用來(lái)區(qū)分體積相近而內(nèi)部性質(zhì)不同的細(xì)胞群體，如淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，由于它們的細(xì)胞核特性不同而在傳導(dǎo)性參數(shù)上有所區(qū)別。 S代表激光散射（Scatter）測(cè)量技術(shù)，采用氦氖激光源發(fā)出的單色激光掃描每個(gè)細(xì)胞，收集細(xì)胞在10°～70°角度內(nèi)出現(xiàn)的散射光 (MALS）信號(hào)。該激光束可穿透細(xì)胞，探測(cè)細(xì)胞內(nèi)核分葉狀況和胞漿中的顆粒情況，提供有關(guān)細(xì)胞顆粒性的信息，可以區(qū)分出顆粒特性不同的細(xì)胞群體。例如細(xì)胞內(nèi)顆粒粗的要比顆粒細(xì)的散射光更強(qiáng)，因此可以用于區(qū)分粒細(xì)胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜堿性三種細(xì)胞。

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