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上一篇《給大家推薦一種細(xì)胞計數(shù)儀性能檢測的方法》中,我們發(fā)現(xiàn)全自動細(xì)胞計數(shù)儀檢測細(xì)胞樣品的重復(fù)性和梯度稀釋的結(jié)果準(zhǔn)確性上,都比半自動插板式細(xì)胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢。
那么大家可能會問:
“導(dǎo)致這樣的性能差異原因是什么呢?另外,目前市場上都自詡所賣的細(xì)胞計數(shù)儀是全自動的,那我們?nèi)绾螀^(qū)分哪個是‘真’,哪個又是‘假’的呢?”
要回答這2個問題,首先我們需要對圖像法細(xì)胞計數(shù)的過程做下回顧。下面是圖像法臺盼藍(lán)染色細(xì)胞計數(shù)和活率分析的基本流程。
01
細(xì)胞吹打混懸后定量吸取樣品
02
等體積吸取臺盼藍(lán)吹打染色
03
染色好的細(xì)胞加到血球計數(shù)板或細(xì)胞計數(shù)板上
04
顯微鏡下手動或自動統(tǒng)計死活細(xì)胞數(shù),然后計算活細(xì)胞密度和活率
05
清洗血球計數(shù)板或更換新的細(xì)胞計數(shù)板
傳統(tǒng)顯微鏡下手工細(xì)胞計數(shù),以上5步操作都要操作人員來完成。這種方法因?yàn)槿藶椴僮鲙淼恼`差,導(dǎo)致結(jié)果差異有時會很大,甚至超出通??梢越邮艿摹?0%偏差范圍。并且隨著樣品數(shù)越多,操作人員會逐漸造成眼疲勞,無法繼續(xù)進(jìn)行有效并準(zhǔn)確地計數(shù)。
手工顯微鏡法細(xì)胞計數(shù)的照片和計算方法
插板式半自動細(xì)胞計數(shù)儀的出現(xiàn),省去了操作人員肉眼統(tǒng)計和分析死活細(xì)胞數(shù)的步驟,儀器操作只需要將樣品混勻、定量染色和上樣分析(有時要手動對焦),測試結(jié)束后更換新的細(xì)胞計數(shù)板做下一個樣品。
用于半自動細(xì)胞計數(shù)儀的各類細(xì)胞計數(shù)板移液槍加樣的照片
半自動細(xì)胞計數(shù)儀的缺點(diǎn)在于:由于每塊細(xì)胞計數(shù)板的檢測樣品數(shù)量有限,所以檢測新的樣品需要更換新的板子。但板子批次間存在差異,樣品和臺盼藍(lán)體積需要手動定量,取樣量少代表性差(從30-50mL樣品中一般就只吸取20uL樣品),染色后的細(xì)胞樣品通過移液槍加樣有時還產(chǎn)生氣泡而報廢,用后廢棄的細(xì)胞計數(shù)板會產(chǎn)生二次污染物,這些目前都還沒有好的處理方法。
那有沒可能細(xì)胞的混勻和染色,以及細(xì)胞的計數(shù)和分析過程全部實(shí)現(xiàn)自動化,同時不用手動更換新的細(xì)胞計數(shù)板而自動做下一個樣品呢?答案是使用全自動細(xì)胞計數(shù)和活率分析儀。
全自動細(xì)胞計數(shù)儀相比半自動插板式細(xì)胞計數(shù)儀的優(yōu)勢點(diǎn)小結(jié):
全自動吹打混懸和臺盼藍(lán)染色
動態(tài)百圖分析
高通量和不間斷檢測
綜上所述,全自動細(xì)胞計數(shù)儀在細(xì)胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來的誤差,同時百圖分析拍攝的細(xì)胞數(shù)多,結(jié)果代表性更好。所以,在細(xì)胞計數(shù)方面重復(fù)性和準(zhǔn)確性上相比半自動插板式細(xì)胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢。
同時,全自動細(xì)胞計數(shù)儀的高通量和不間斷檢測功能,又滿足實(shí)驗(yàn)室樣品量大,不同老師共用該儀器的檢測需求。并且每個樣品測試結(jié)束后,儀器會自動進(jìn)行管路清洗,儀器本身還帶有自動過夜清洗功能,使得儀器一直處于待機(jī)狀態(tài)。所以,在操作便捷性上,全自動細(xì)胞計數(shù)儀也勝過半自動插板式細(xì)胞計數(shù)儀。
以上這些特點(diǎn)可以用于區(qū)分我們使用的細(xì)胞計數(shù)儀是“全自動”還是“半自動”,同時也是為何全自動細(xì)胞計數(shù)儀性能上要優(yōu)于半自動的地方。希望大家可以通過這些方法來分辨“真”、“假”全自動細(xì)胞計數(shù)儀。
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