求BrdU法測細(xì)胞周期的詳細(xì)步驟及資料來源，急@

丶弦月o 2010-03-06 19:14:52 520 瀏覽

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安靜的趴著885 2010-03-07 00:00:00

細(xì)胞增殖的檢驗方法：BrdU標(biāo)記法 1、細(xì)胞以1.5×105 /ml細(xì)胞數(shù)接種于直徑35ml培養(yǎng)皿中（內(nèi)放置一蓋玻片），培養(yǎng)1天，用含0.4％FCS培養(yǎng)液同步化3天，使絕大多數(shù)細(xì)胞處于G0 期。 2、終止細(xì)胞培養(yǎng)前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。 3、棄培養(yǎng)液，玻片用PBS洗滌3次。 4、甲醇/醋酸固定10min。 5、經(jīng)固定的玻片空氣干燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min滅活內(nèi)源性氧化酶。 6、5％正常兔血清封閉。 7、甲酰胺100℃，5min變性核酸。 8、冰浴冷卻后PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。 9、按ABC法進(jìn)行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機(jī)計數(shù)10個高倍視野中細(xì)胞總數(shù)及BrdU陽性細(xì)胞數(shù)，計算標(biāo)記指數(shù)（LI）。

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楊沐雨12 2010-03-08 00:00:00

我覺得 EDU 和 MTT 都要簡單些、速度還快，推薦 MTT: （1）單細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板；103-104細(xì)胞/孔，每孔培養(yǎng)基總量200微升（96孔培養(yǎng)板每孔容積370微升），37℃、5％ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間（根據(jù)實驗?zāi)康臎Q定培養(yǎng)時間）（2）加入2毫克／毫升的MTT液（50微升／孔）；繼續(xù)培養(yǎng)3小時。（3）吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液后，加入DMSO液（150微升／孔），將培養(yǎng)板置于微孔板扳蕩器上振蕩10分鐘，使結(jié)晶物溶解。（4）酶標(biāo)儀檢測各孔OD值（檢測波長570納米）。記錄結(jié)果，繪制這個是EDU，http://www.bioon.com.cn/news/showarticle.asp?newsid=14929&typename= 再給你推薦個連接，基本的生化實驗都有了，可以看看很不錯http://wenku.baidu.com/view/5d29973143323968011c92da.html

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