顯微鏡使用過程中，當(dāng)物鏡需要100倍的時候。光線通過不同密度的介質(zhì)物體時，部分光線會發(fā)生折射而散失，進(jìn)入鏡筒的光線少，視野較暗，物體觀察不清。

       這是因為顯微鏡放大倍數(shù)較高，而透鏡很小，所以通光亮??；這些都是我們自己需要去觀察和了解的。所以要在透鏡與玻片之間滴加和玻璃折射率相仿的香柏油或者折射率相近的介質(zhì)，則使進(jìn)入鏡筒的光線增多，視野亮度增強，物象清晰。

熒光共聚焦和光片活體鈣離子成像

球狀體是易用、高性價比的3D細(xì)胞培養(yǎng)物，可用于基礎(chǔ)和應(yīng)用研究。它們可以彌補2D和體內(nèi)實驗的差距，并用于高通量篩選。然而，很難通過顯微鏡對這些圓形、非粘連細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行活細(xì)胞觀察急性藥物反應(yīng)，這便妨礙了對細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間信號快速變化的研究。為解決這一問題，我們使用透明和軟明膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)穩(wěn)定微灌注腔內(nèi)的球狀體。

通過這種方法，我們可以使用倒置TCS SP8 DLS共聚焦顯微鏡在進(jìn)行急性灌注時對鈣離子變化進(jìn)行活細(xì)胞共聚焦顯微成像。使用促味劑或ATP刺激味覺/舌乳頭（BRAIN Biotech AG）永生化細(xì)胞球狀體。同心球狀體區(qū)域的反應(yīng)分析顯示，相比核心區(qū)域的細(xì)胞，邊緣位置的細(xì)胞顯示出更大、更快的瞬變。這些區(qū)域差異在使用光片顯微鏡開展的類似實驗中得到確認(rèn)。實驗采用TCS SP8 DLS完成，可以使我們在不損失時空分辨率的情況下，在大約100 μm的深度進(jìn)行成像。

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Molitor E., Nürnberg E., Ertongur-Fauth T., Scholz P., Riedel K., Hafner M., Rudolf R. & Cesetti T.:

Analysis of Calcium Signaling in Live Human Tongue Cell 3D-Cultures upon Tastant Perfusion

Cell Calcium 87 (May 2020): 102164, DOI: 10.1016/j.ceca.2020.102164. 

https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0143416020300063