GB31660.4-2019：牛奶中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羥孕酮殘留量測定

上海安譜實驗科技股份有限公司 2020-04-22 08:55:29 520  瀏覽

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  實驗背景

  
  

  醋酸甲地孕酮與醋酸甲羥孕酮均為人工合成的孕激素,在畜牧業(yè)中, 曾被用作動物生長促進劑。但這類藥物成分會殘留在動物組織中，長期或大量食用含有醋酸甲羥孕酮和醋酸甲地孕酮的食品, 會使人出現(xiàn)內分泌紊亂等一系列癥狀。

  安譜實驗根據2019年新國標GB31660.4-2019 《動物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羥孕酮殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法》，在牛奶基質中使用CNW Poly-Sery MCX小柱進行了實驗，發(fā)現(xiàn)此方法操作簡單，回收率高于85%，重現(xiàn)性好。

  接下來，小編帶大家走進安譜實驗室
  

  一起來學習具體檢測方案吧~

  
  

  一、樣品前處理牛奶基質：酶解

  取試樣2g，于50 mL離心管中，加內標外標工作液（樣品基質空白加40ul 100ppb內標，樣品基質加標加入40ul 100ppb內標+40ul 100ppb混合外標，使Z終檢測濃度為20ppb）加0.2mol/L乙酸銨緩沖液4 mL，渦旋混勻后加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶（貨號CFEQ-4-150001-0002）40μL，于37℃下避光水浴低速振蕩，酶解16h。

  
  

  樣品提取

  試樣經酶解后，加乙酸乙酯10 mL，于旋渦振蕩器上劇烈振蕩10 min， 4000 r/min離心5 min，取上清液至梨形瓶中。殘渣加乙酸乙酯10 mL重復提取1次，合并上清液，50℃旋轉蒸發(fā)至干。加乙腈10 mL、正己烷5ml使溶解，轉至50ml離心管中，低速渦旋10s，3000 r/min離心2 min，棄正己烷層，下層液于50℃旋轉蒸發(fā)至干，加30%甲醇水溶液3 mL，溶解，備用待上樣。

  
  二、小柱操作

  
  

  SBEQ-CA3279  CNW Poly-Sery MCX 混合型強陽離子交換 SPE 小柱 60mg， 3mL/50pcs活化：3mL甲醇平衡：3mL水上樣：待測液淋洗：3mL水，3mL50%甲醇水，淋洗后抽干洗脫：5mL甲醇濃縮：氮吹吹干，用0.2 mL乙腈（80%）-0.1%甲酸溶液溶解殘余物，渦旋混勻，過0.22 μm濾膜，供GX液相色譜-串聯(lián)質譜儀測定。

  
  

  三、LCMS/MS測定條件液相條件色譜柱：Athena C18（2.1*50mm，1.8um）柱溫：30℃進樣量：10ul流動相：

  時間	A: 0.1%甲酸水	B: 0.1%甲酸乙腈
  0min	80	20
  0.5min	80	20
  3min	10	90
  3.5min	80	20
  7min	80	20

  
  

  質譜參數(shù)離子源： ESI掃描方式：正離子模式檢測方式：MRM電離電壓：4000V離子源溫度：100℃霧化溫度：330℃

  
  

  定性定量離子醋酸甲地孕酮：385/267（定性定量）385/325（定性）甲羥孕酮乙酸酯（醋酸甲羥孕酮）：387/285（定性）387/327（定性定量）甲地孕酮乙酸酯-D3：388/270（定性定量）

  
  

  四、實驗譜圖1. 標品譜圖（20ppb）

  2. 牛奶基質空白譜圖

  3. 牛奶基質加標20ppb

  
  

  五、實驗數(shù)據

  基質	樣品 名稱	醋酸甲地孕酮 加標回收率	醋酸甲羥孕酮 加標回收
  牛奶	加標1	85%	99%
  	加標2	91%
  	平均值	88%

  注：本次實驗牛奶基質空白中未檢測到醋酸甲地孕酮，醋酸甲羥孕酮的含量為0.095ug/kg 。

  
  

  六、實驗耗材 本次實驗所用耗材如下，供大家參考：

  貨號	名稱	規(guī)格	品牌
  SBEQ-CA3279	CNW Poly-Sery MCX 混合型強陽離子交換 SPE 小柱	60mg， 3mL/50 pcs	CNW
  CDCT-C14861300	乙酸甲地孕酮（醋酸甲地孕酮） 標準品	純品型，有證書，0.1g	Dr
  CDCT-C14852015	甲羥孕酮乙酸酯（醋酸甲羥孕酮） 標準品	純品型，有證書，0.1g	Dr
  CDAA-S-590046D3-JA-1ml	甲地孕酮乙酸酯-D3（GB 31660.4-2019）	100mg/L于乙腈，1ml	ANPEL
  CAEQ-4-014048-4000	HPLC級乙酸乙酯	4L	CNW
  CFEQ-4-150001-0002	β-葡萄糖醛苷酸酶，>100，000units/ml，芳基硫酸酯酶<20，000units/mL	2mL	CNW
  SBEQ-CG1012	CNW G系列12位固相萃取真空裝置	玻璃缸（內）長*寬*高=16.2*7.5*15.5cm，12位	CNW
  SCAA-104	有機相尼龍針式濾器 （綠色）	13mm*0.22um， 100 只/ 罐	ANPEL
  QBAA-002012	2ml 無針注射器	100 只/ 包	ANPEL
  ABEQ-3300002-25	CNW 50ml 尖底離心管	25/袋	CNW
  ADEQ-2600111	3ml 塑料巴斯德吸管、160mm、未滅菌	500/ 箱	CNW
  VAAP-32009E-1232A-100	CNW 9mm 透明螺紋口自動進樣瓶( 帶刻度、書寫)	2ml，12*32mm， 9mm，100 只/ 盒	CNW