全部評(píng)論(2條)
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- 三亞悅來(lái)旅館 2008-10-04 00:00:00
- 腺嘌呤（A）鳥(niǎo)嘌呤（G）胞嘧啶（C）胸腺嘧啶（T） 堿基的互補(bǔ)配對(duì)原理。
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- towerrt 2017-09-03 08:30:06
- 嘌呤堿：腺嘌呤（A）、鳥(niǎo)嘌呤（G） 嘧啶堿：胞嘧啶（C）、胸腺嘧啶（T） A-T配對(duì)之間兩個(gè)氫鍵 C-G配對(duì)之間三個(gè)氫鍵 【原理】 ABI PRISM 310型基因分析儀(即DNA測(cè)序儀)，采用毛細(xì)管電泳技術(shù)取代傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺平板電泳，應(yīng)用該公司ZL的四色熒光染料標(biāo)記的ddNTP(標(biāo)記終止物法)，因此通過(guò)單引物PCR測(cè)序反應(yīng)，生成的PCR產(chǎn)物則是相差1個(gè)堿基的3''''末端為4種不同熒光染料的單鏈DNA混合物，使得四種熒光染料的測(cè)序 PCR產(chǎn)物可在一根毛細(xì)管內(nèi)電泳，從而避免了泳道間遷移率差異的影響，大大提高了測(cè)序的精確度。由于分子大小不同，在毛細(xì)管電泳中的遷移率也不同，當(dāng)其通過(guò)毛細(xì)管讀數(shù)窗口段時(shí)，激光檢測(cè)器窗口中的CCD(charge-coupled device)攝影機(jī)檢測(cè)器就可對(duì)熒光分子逐個(gè)進(jìn)行檢測(cè)，激發(fā)的熒光經(jīng)光柵分光，以區(qū)分代表不同堿基信息的不同顏色的熒光，并在CCD攝影機(jī)上同步成像，分析軟件可自動(dòng)將不同熒光轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA序列，從而達(dá)到DNA測(cè)序的目的。分析結(jié)果能以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖或堿基排列順序等多種形式輸出。 它是一臺(tái)能自動(dòng)灌膠、自動(dòng)進(jìn)樣、自動(dòng)數(shù)據(jù)收集分析等全自動(dòng)電腦控制的測(cè)定DNA片段的堿基順序或大小和定量的精密儀器。PE公司還提供凝膠高分子聚合物，包括DNA測(cè)序膠(POP 6)和GeneScan膠(POP 4)。這些凝膠顆?？讖骄唬苊饬伺淠z條件不一致對(duì)測(cè)序精度的影響。它主要由毛細(xì)管電泳裝置、Macintosh電腦、彩色打印機(jī)和電泳等附件組成。電腦中則包括資料收集，分析和儀器運(yùn)行等軟件。它使用Z新的CCD攝影機(jī)檢測(cè)器，使DNA測(cè)序縮短至2.5h，PCR片段大小分析和定量分析為 10～40min。 由于該儀器具有DNA測(cè)序，PCR片段大小分析和定量分析等功能，因此可進(jìn)行DNA測(cè)序、雜合子分析、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)、微衛(wèi)星序列分析、長(zhǎng)片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析，臨床上可除進(jìn)行常規(guī)DNA測(cè)序外，還可進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析、基因突變檢測(cè)、HLA配型、法醫(yī)學(xué)上的親子和個(gè)體鑒定、微生物與病毒的分型與鑒定等。
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我們使用STED超高分辨率顯微鏡進(jìn)行測(cè)量，INO80和R環(huán)之間具有前所未有的精密共定位。
標(biāo)題圖像：INO80（藍(lán)色）和R環(huán)（黃色）的3D體表面模型
在我們的實(shí)驗(yàn)中，相比共聚焦成像（250?nm），STED能達(dá)到大約50?nm的分辨率，這使我們能夠有較高的確定性區(qū)分真假共定位事件。使用STED可以輕松觀察到INO80亞基和R環(huán)亞基之間的共定位，而通過(guò)共聚焦成像觀察到的INO80和R環(huán)之間的多個(gè)共定位事件，經(jīng)STED觀察是分離的不同亞基。
在所有分析的細(xì)胞中，我們發(fā)現(xiàn)相比非共定位R環(huán)，INO80共定位的R環(huán)明顯更加緊密、體積和長(zhǎng)度也更大。這些數(shù)據(jù)表明，INO80復(fù)合物與細(xì)胞核中最 大、最濃縮的R環(huán)域相關(guān)。
圖1：STED解析INO80和R環(huán)的相對(duì)位置。
閱讀完整文章：
Prendergast L., McClurg U.L., Hristova R., Berlinguer-Palmini R., Greener S., Veitch K., Hernandez I., Pasero P., Rico D., Higgins J.M.G., Gospodinov A. & Papamichos-Chronakis M.:
Resolution of R-loops by INO80 promotes DNA replication and maintains cancer cell proliferation and viability
Nature Communications volume 11, Article number: 4534 (2020)
https://doi.org/10.1038/s41467-020-18306-x
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