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- 乖乖小豬5188 2017-11-27 09:21:38
- 前向角散射，即FSC與細(xì)胞直徑平分正相關(guān)（大小），所以我們平時(shí)上機(jī)的時(shí)候，有時(shí)用FSC做閾值，排除碎片及其它顆粒，避免干擾。 側(cè)向角散射，即SSC是指與激光束正交90度方向的散射信號(hào)，它對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更敏感，可以提供細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)及顆粒性質(zhì)的信息 FL2-A ，F(xiàn)L2-W 中A和W的含義 FL2-H1024，F(xiàn)L2-H256 中H的含義，1024和256又代表什么呢。 名詞“道數(shù)”是怎么定義的？ w好像代表脈沖寬度，但是脈沖寬度反映的是細(xì)胞什么特性呢？ H-脈沖高度反映細(xì)胞什么特性呢？ 好像你做的是細(xì)胞周期分析， 如果是，F(xiàn)L2－A代表的是熒光峰面積，反映了細(xì)胞DNA含量（前提是用Rnase處理去掉了RNA）； FL2－W代表的是熒光峰寬度，這個(gè)值可以區(qū)分單個(gè)細(xì)胞和雙聯(lián)體細(xì)胞； 下面的1024和256是定義數(shù)據(jù)文件大小的（記得培訓(xùn)時(shí)工程師這么說(shuō)的） －H好像沒有什么特殊含義 ，就是指這個(gè)通道了， 一般檢測(cè)那個(gè)通道的熒光就是選擇哪個(gè)－H，比如FSC－H，SSC－H，F(xiàn)L1－H等等 流式涉及的調(diào)節(jié)參數(shù)太多了，主要的有： 1.電壓 2.閾值 3.熒光補(bǔ)償 4.通道選擇：需要哪些通道、選擇面積/高度/寬度、線性/Log 5.停止條件選擇 太多太多了 FL2-A代表FL2 AREA，F(xiàn)L2-H即FL2 HEIGHT，通過(guò)這兩個(gè)參數(shù)，可以將粘連體排除出去，因?yàn)檎尺B體跟多倍體有相同的FL2-A，但是FL2-H遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于正常細(xì)胞。 正確的設(shè)置是將FL2-A設(shè)置在200附近。當(dāng)然，不設(shè)在200也可以，但是那樣會(huì)對(duì)日后的分析造成困難。200道是對(duì)周期分析Z佳的參數(shù)。 FSC是前向角散射，一般代表細(xì)胞的體積，值越大代表細(xì)胞越大。 SSC是側(cè)向角散射，一般代表細(xì)胞的顆粒度，值越大代表細(xì)胞的顆粒度越大，顆粒度指細(xì)胞表面的皺折度，細(xì)胞內(nèi)亞細(xì)胞器、顆粒的數(shù)目等。
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