全部評(píng)論(2條)
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- czy063 2018-03-25 00:00:00
- 樓上回答反了,臺(tái)酚藍(lán)是活性染色劑而不是活體染色劑。臺(tái)酚藍(lán)只能染死細(xì)胞,活細(xì)胞將之排斥。與臺(tái)酚藍(lán)對(duì)應(yīng)的是中性紅,中性紅是活體染色劑,可以使植物細(xì)胞液泡著色,而只有活細(xì)胞才可以被著色。
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- 潘一葦 2017-06-10 00:00:00
- 有一種染料,活細(xì)胞著色,死細(xì)胞不著色,是什么? 答:是臺(tái)盼藍(lán)。 用臺(tái)盼藍(lán)給細(xì)胞染色,死細(xì)胞被染成藍(lán)色,而活細(xì)胞不被染色。 原理是:活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透過性,染色體劑不能進(jìn)入細(xì)胞,而死細(xì)胞的細(xì)胞膜沒有選擇透過性,染色劑可以進(jìn)入細(xì)胞。
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? 什么是活細(xì)胞成像?
活細(xì)胞成像(live cell imaging)統(tǒng)稱為捕捉活的、活動(dòng)狀態(tài)的細(xì)胞圖像的技術(shù),這些細(xì)胞圖像可以是單個(gè)靜態(tài)圖像,也可以是延時(shí)系列圖像。相應(yīng)地,活細(xì)胞成像的應(yīng)用可以分為兩大類:
? 細(xì)胞在自然狀態(tài)下的圖像記錄。
? 實(shí)時(shí)觀察和記錄細(xì)胞、組織或整個(gè)生物體的動(dòng)態(tài)過程。
? 觀察分析活細(xì)胞時(shí)面臨的挑戰(zhàn)
? 在相對(duì)較短的時(shí)間內(nèi)采集大量信息。
? 要保持細(xì)胞保存在可調(diào)節(jié)培養(yǎng)環(huán)境氣體濃度和溫度(在很多情況下)的培養(yǎng)室中。
? 激發(fā)光源會(huì)損害活細(xì)胞。
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- 明美活細(xì)胞成像儀用于細(xì)胞挑選
在許多細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中,活細(xì)胞成像是一種理想的分析工具?,F(xiàn)有的活細(xì)胞成像主要依賴昂貴的、難以操作的大型設(shè)備。而明美新研發(fā)的一款活細(xì)胞成像儀,小巧輕便,適合放在超凈工作臺(tái)。
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來源:https://www.mshot.com/article/1363.html
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干涉顯微鏡能看到活細(xì)胞嗎?這一問題在生物學(xué)和細(xì)胞學(xué)研究中有著廣泛的關(guān)注。干涉顯微鏡作為一種先進(jìn)的光學(xué)成像技術(shù),其高分辨率和非侵入性特點(diǎn)使其在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和材料科學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。本文將探討干涉顯微鏡在觀察活細(xì)胞方面的能力,分析其工作原理、優(yōu)點(diǎn)與局限性,并討論該技術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)研究中的實(shí)際應(yīng)用。通過對(duì)這一問題的深度解析,讀者將對(duì)干涉顯微鏡在活細(xì)胞觀察中的應(yīng)用有更清晰的理解。
什么是干涉顯微鏡?
干涉顯微鏡是一種通過干涉效應(yīng)增強(qiáng)樣品對(duì)比度的顯微鏡。與傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡不同,干涉顯微鏡利用相干光源生成干涉圖樣,從而能更清晰地呈現(xiàn)細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其動(dòng)態(tài)過程。它能夠在不使用染料和標(biāo)記物的情況下,通過相位對(duì)比增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)細(xì)微結(jié)構(gòu)的可視化效果。這種技術(shù)特別適合觀察生物樣品,尤其是活細(xì)胞,因?yàn)樗粫?huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷。
干涉顯微鏡對(duì)活細(xì)胞的觀察能力
干涉顯微鏡的優(yōu)勢(shì)之一是能夠觀察到活細(xì)胞的微觀動(dòng)態(tài)變化,而無需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色或其他干擾性處理。這使得研究者可以更真實(shí)地捕捉到細(xì)胞在不同生理狀態(tài)下的行為。例如,通過干涉顯微鏡,科學(xué)家可以觀察到活細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器、細(xì)胞分裂、細(xì)胞遷移等過程,而這些在傳統(tǒng)顯微鏡下很難清晰呈現(xiàn)。
干涉顯微鏡的分辨率通常可以達(dá)到納米級(jí),能夠揭示細(xì)胞結(jié)構(gòu)的細(xì)微變化,進(jìn)一步提高了活細(xì)胞成像的精確性。這對(duì)于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究具有重要意義,尤其是在研究細(xì)胞疾病、細(xì)胞等領(lǐng)域時(shí)。
干涉顯微鏡的優(yōu)勢(shì)與局限性
干涉顯微鏡在活細(xì)胞觀察中的一個(gè)主要優(yōu)勢(shì)是其非侵入性。傳統(tǒng)的顯微鏡通常需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色處理,這可能會(huì)影響細(xì)胞的正常生理活動(dòng)。而干涉顯微鏡通過不接觸樣品的方式,能夠?qū)崟r(shí)觀察細(xì)胞內(nèi)的變化而不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成直接影響。因此,這項(xiàng)技術(shù)成為了觀察活細(xì)胞、追蹤細(xì)胞動(dòng)態(tài)過程的理想工具。
干涉顯微鏡也存在一定的局限性。由于其依賴于光波干涉的原理,這就要求顯微鏡系統(tǒng)的精度非常高,尤其是對(duì)光源的控制要求十分苛刻。干涉顯微鏡更適用于透明或半透明的樣品,對(duì)于不透明或高度復(fù)雜的樣本,其成像效果可能受到一定限制。干涉顯微鏡的操作和數(shù)據(jù)分析相對(duì)復(fù)雜,要求研究者具有一定的技術(shù)背景和經(jīng)驗(yàn)。
干涉顯微鏡在生物學(xué)研究中的應(yīng)用
干涉顯微鏡在生命科學(xué)中有著廣泛的應(yīng)用。例如,在癌癥研究中,研究者利用干涉顯微鏡觀察癌細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化,探索其與正常細(xì)胞的差異。在神經(jīng)科學(xué)中,干涉顯微鏡能夠幫助科學(xué)家實(shí)時(shí)觀察神經(jīng)元的活動(dòng)和突觸的變化,為研究大腦功能和疾病提供重要線索。該技術(shù)還被廣泛用于藥物篩選、細(xì)胞藥理學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)等領(lǐng)域。
結(jié)論
干涉顯微鏡在觀察活細(xì)胞方面具備巨大的潛力和優(yōu)勢(shì)。它不僅能提供高分辨率的細(xì)胞圖像,而且不會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生任何干擾或損傷。盡管在操作上有一定的技術(shù)難度和局限性,但隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和改進(jìn),干涉顯微鏡無疑將成為生命科學(xué)領(lǐng)域研究的核心工具之一。因此,干涉顯微鏡在活細(xì)胞觀察中的應(yīng)用前景廣闊,值得繼續(xù)深入探索與應(yīng)用。
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細(xì)胞生物學(xué)是生命科學(xué)的一門學(xué)科。顧名思義,它致力于研究生物。單憑這一事實(shí)就足以成為研究細(xì)胞自然生存狀態(tài)的理由。當(dāng)然,活細(xì)胞成像還有其他深層次的原因。在本篇文章中,我們列舉了用延時(shí)顯微鏡研究活細(xì)胞是有意義的五大很好的理由。
背景
活細(xì)胞成像允許在一定時(shí)間內(nèi)在顯微鏡下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)觀察。各種顯微鏡技術(shù)適用于活細(xì)胞成像:例如,可以采用無標(biāo)記的技術(shù),如相差,DIC,或干涉測(cè)量法,也可以依靠熒光顯微鏡,利用熒光標(biāo)記標(biāo)記和可視化細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)、分子或蛋白質(zhì)。當(dāng)然,活細(xì)胞成像也面臨挑戰(zhàn),在建立活細(xì)胞圖像實(shí)驗(yàn)時(shí)需要考慮某些要求。最重要的是,必須確保顯微鏡配備了一個(gè)stage top 培養(yǎng)箱,能夠提供理想的環(huán)境,使細(xì)胞在一段時(shí)間內(nèi)保持存活和健康。
圖1.A:活細(xì)胞成像過程中需要考慮和控制的環(huán)境參數(shù)
圖1.B:倒置顯微鏡的臺(tái)頂培養(yǎng)箱示意圖
參數(shù)和環(huán)境條件是此類實(shí)驗(yàn)的重要部分,我們將在以后的公眾號(hào)中討論。如果您有興趣,可以在本篇文章中查看更多相關(guān)內(nèi)容。在此我們已經(jīng)介紹了基本知識(shí),接下來我們將繼續(xù)深入探討為什么您應(yīng)該使用活細(xì)胞成像來研究您的細(xì)胞:
1.避免固定過程中的人工制品
細(xì)胞通常在顯微鏡觀察前固定(如免疫熒光),以保存在逼真的狀態(tài)。多年來,許多不同的化學(xué)和物理程序已被優(yōu)化和建立,以保持原始樣品的質(zhì)量。然而,固定過程會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損害(當(dāng)然在這個(gè)過程之后,它們會(huì)死亡),并不可逆轉(zhuǎn)地改變其組織、結(jié)構(gòu)和形態(tài)(細(xì)胞器收縮、蛋白質(zhì)定位錯(cuò)誤等)。然而,活細(xì)胞成像可以讓我們研究活細(xì)胞。這意味著他們應(yīng)該展示他們的自然形態(tài),這仍然會(huì)受到熒光標(biāo)簽、激光等的影響,但這就像環(huán)境條件一樣,是一個(gè)不同的狀況。
2.觀察和分析動(dòng)態(tài)過程
活細(xì)胞成像使我們能夠觀察整個(gè)細(xì)胞群、單個(gè)細(xì)胞甚至亞細(xì)胞水平的動(dòng)態(tài)事件。當(dāng)固定細(xì)胞將其鎖定在特定時(shí)間點(diǎn)的特定(行為或結(jié)構(gòu))狀態(tài)時(shí),對(duì)活細(xì)胞的顯微鏡觀察可以洞察整個(gè)動(dòng)態(tài)過程?;诠δ苄约?xì)胞的檢測(cè),如損傷和遷移(圖2)或趨化實(shí)驗(yàn)是活細(xì)胞成像應(yīng)用的很好的例子。這些分析使得研究細(xì)胞對(duì)化學(xué)(趨化性)或機(jī)械(傷口愈合)刺激的反應(yīng)成為可能。
圖2:使用ibidi Stage Top孵育系統(tǒng)的活細(xì)胞成像顯示了傷口愈合和遷移試驗(yàn)中MCF7細(xì)胞的間隙閉合。相差;10倍物鏡。
3.實(shí)時(shí)跟蹤細(xì)胞變化
活細(xì)胞顯微鏡是實(shí)時(shí)了解細(xì)胞隨時(shí)空變化的一種有價(jià)值的方法,而不是依賴于固定細(xì)胞的端點(diǎn)的分析結(jié)果。通過使用延時(shí)視頻顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行更長時(shí)間的跟蹤,可以捕捉到結(jié)構(gòu)重排的動(dòng)態(tài)(如圖3,感受趨化刺激后細(xì)胞骨架的極化), 或使用固定細(xì)胞可能會(huì)錯(cuò)過的瞬時(shí)細(xì)胞性活動(dòng)(如,有絲分裂期間的染色體分離)。
圖3:應(yīng)用趨化梯度后,表達(dá)LifeAct的原代樹突狀小鼠細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)的活細(xì)胞成像
4. 研究單分子動(dòng)力學(xué)、定位和相互作用
先進(jìn)熒光標(biāo)記和成像技術(shù)的發(fā)展,如光脫色熒光恢復(fù)技術(shù)(FRAP)、熒光壽命成像顯微技術(shù)(FLIM)和熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(FRET),使活細(xì)胞成像過程中單分子定位、動(dòng)力學(xué)和相互作用的觀察和分析成為可能。
FRAP可以測(cè)量活細(xì)胞內(nèi)熒光標(biāo)記分子和蛋白質(zhì)的遷移率。FLIM通過測(cè)量附著的熒光團(tuán)的壽命來提供有關(guān)細(xì)胞分子分布及其環(huán)境的信息。
利用FRET,人們可以通過檢測(cè)兩個(gè)分子在納米級(jí)相互接近時(shí)所附熒光團(tuán)的相互作用來測(cè)量活細(xì)胞中兩個(gè)分子的直接相互作用。
5. 從單個(gè)實(shí)驗(yàn)中獲取更多信息
總的來說,如果您進(jìn)行活細(xì)胞成像,您可以從單個(gè)實(shí)驗(yàn)中獲得比從固定細(xì)胞成像更多的信息。這是因?yàn)榛罴?xì)胞成像使人們能夠跟蹤分子動(dòng)力學(xué)和動(dòng)力學(xué),并提供了您感興趣的一個(gè)更大、更全面的細(xì)胞過程圖像。
對(duì)固定樣本的分析通常只提供某個(gè)細(xì)胞性活動(dòng)的快照,而跟蹤整個(gè)動(dòng)態(tài)過程使人們能夠從單個(gè)實(shí)驗(yàn)中測(cè)量更多參數(shù),并得出更多不同的結(jié)論。
如您有興趣了解更多關(guān)于活細(xì)胞成像的知識(shí),請(qǐng)關(guān)注我們公眾號(hào)活細(xì)胞成像應(yīng)用相關(guān)內(nèi)容。也可以向我們索要相關(guān)資料。
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