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- SmieKerI 2013-12-14 00:00:00
- 細(xì)菌的培養(yǎng)方法 根據(jù)培養(yǎng)細(xì)菌的目的和培養(yǎng)物的特性培養(yǎng)方法分為一般培養(yǎng)法，二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法三種. 1. 一般培養(yǎng)法 將已接種過的培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)18-24小時(shí)，需氧菌和兼性厭氧菌即可于培養(yǎng)基上生長(zhǎng).少數(shù)生長(zhǎng)緩慢的細(xì)菌，需培養(yǎng)3-7天直至一個(gè)月才能生長(zhǎng).為使培養(yǎng)箱內(nèi)保持一定濕度，可在其內(nèi)放置一杯水.培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)的培養(yǎng)基，接種后應(yīng)將試管口塞棉塞后用石臘凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂. 2. 二氧化碳培養(yǎng)法 某些細(xì)菌，如牛流產(chǎn)布氏桿菌和胎兒弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空氣中才能生長(zhǎng)，尤其是初代分離培養(yǎng)要求更為嚴(yán)格.將已接種的培養(yǎng)基置于二氧化碳環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)的方法即二氧化碳培養(yǎng)法，常用方法有以下幾種: (1) 二氧化碳培養(yǎng)箱 可將已接種的培養(yǎng)基直接放入箱內(nèi)孵育，即可獲得二氧化碳環(huán)境. (2) 燭缸法 將已接種的培養(yǎng)基，置于容量為2 000ml的磨口標(biāo)本缸或干燥器內(nèi).缸蓋或缸口處均需涂以凡士林，然后點(diǎn)燃蠟燭直立置入缸中，密封缸蓋.待燃自行熄滅時(shí)，容器內(nèi)約含5-10%的CO2 容器置37℃培養(yǎng). (3) 重碳酸鈉-鹽酸法 每升容積的容器內(nèi)，重碳酸鈉與鹽酸按0.4g與3.5ml的比例，分別將兩種藥各置一器皿內(nèi)(如平皿內(nèi))，連同器皿置于標(biāo)本缸或干燥器內(nèi)，蓋嚴(yán)后使容器傾斜，兩種藥品接觸后即可產(chǎn)生二氧化碳. 3. 厭氧培養(yǎng)法 目前常用的厭氧培養(yǎng)方法有厭氧罐法，氣袋法及厭氧箱三種. (1) 厭氧罐法 是目前應(yīng)用較廣泛的一種方法，共分為以下幾種. 抽氣換氣法:該法適用于一般實(shí)驗(yàn)室，其特點(diǎn)是較經(jīng)濟(jì)并可迅速建立厭氧環(huán)境.標(biāo)本接種后，將平板放入?yún)捬豕?，擰緊蓋子，用真空泵抽出罐中空氣，使壓力真空表至-79.98KPa，停止抽氣，充入高純氮?dú)馐箟毫φ婵毡碇羔樆?位，連續(xù)反復(fù)3次，Z后在罐內(nèi)-79.98KPa的情況下，充入70%的N2 ，20%H2 ，10%CO2 (有人改用20%CO2 及80%H2 ，亦可獲得好結(jié)果).罐中需放入冷催化劑鈀粒，可催化罐中殘余的O2 和H2 化合成水.同時(shí)罐中應(yīng)放有美藍(lán)指示管，美藍(lán)在有氧的環(huán)境下呈藍(lán)色，無氧時(shí)為紅色.臨用前首先將美藍(lán)煮沸使變成無色，放入罐中先呈淺藍(lán)色，待罐中無氧環(huán)境形成，美藍(lán)即可持續(xù)無色. 氣體發(fā)生袋法:氣體發(fā)生袋系由錫箔密封包裝，其中含有兩種藥片，一種為含枸椽酸和重碳酸氫鈉的藥片，另一種是含有硼氫化鈉的藥片.前者遇水放出二氧化碳，后者可釋放氫.使用時(shí)在袋的右上角剪一小口，灌進(jìn)10ml蒸餾水，立即放入含有鈀粒，指示劑及平板培養(yǎng)基的厭氧罐中，擰緊蓋子經(jīng)2-3分鐘后，可感到蓋子微熱并有少量水蒸氣出現(xiàn).密封后1小時(shí)左右罐中的O2 的含量可低于<1%. (2) 氣袋法 此種方法不需要特殊設(shè)備，操作簡(jiǎn)單，使用方便，不但實(shí)驗(yàn)室中可用，而且外出采樣，現(xiàn)場(chǎng)接種也可用.原理與氣體發(fā)生袋完全相同，只是采用塑料袋代替了厭氧罐，氣袋為一透明而密閉的塑料袋，內(nèi)裝有氣體發(fā)生安瓿，指示劑安瓿，含有催化劑的帶孔塑料管各一支.其操作方法為首先將接種的平板培養(yǎng)基放入袋中，用彈簧夾夾緊袋口，然后用手指壓碎氣體安瓿，20分鐘后再壓碎指示劑安瓿，如果指示劑不變藍(lán)色，說明袋內(nèi)達(dá)到厭氧狀態(tài)，即可放入37℃進(jìn)行培養(yǎng). (3) 厭氧培養(yǎng)箱 使用之前須仔細(xì)檢查厭氧裝備有無漏氣等問題，以及催化劑，指示劑質(zhì)量等.使用時(shí)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，保證箱內(nèi)氣體比例合理.
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