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小分子藥物研發(fā)中，篩選能有效結(jié)合目標(biāo)蛋白的分子是非常耗時耗（財）力的一個環(huán)節(jié)，但又是必須進行的工作。高失敗率源于結(jié)合情況的錯綜復(fù)雜，體外生化實驗的結(jié)合效果，往往不能很好的在細胞水平進行重現(xiàn)。這其中可能是因為分子在穿越細胞膜時，出現(xiàn)了被修飾；也可能是因為純化蛋白和真實細胞環(huán)境的蛋白構(gòu)象不同。例如，在生化水平顯示很好結(jié)合效果的分子，在細胞水平可能結(jié)合的是另一個蛋白。是不是很崩潰……

試想，如果有一個高通量解決方案讓你可以直接在細胞水平進行小分子結(jié)合相應(yīng)靶向蛋白的驗證，開不開心，意不意外？

這個方案就是Alpha?-CETSA?！

什么是CETSA?？

CETSA?是細胞熱遷移實驗（Cellular Thermal Shift Assay）的簡稱，是PELAGO公司2012年在歐洲注冊的ZL技術(shù)。該技術(shù)基于的原理是：每種蛋白質(zhì)都有自身的熱熔曲線（如下圖）。隨著溫度的升高，蛋白質(zhì)會發(fā)生降解（藍色曲線）；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)合小分子以后，該復(fù)合蛋白的熱熔曲線會右移（紅色虛線），即相同溫度下，未降解蛋白的量會提高。CETSA?實驗的樣品來源十分靈活，可以是細胞，也可以是活體給藥以后的組織樣本。

傳統(tǒng)的CETSA?對于天然構(gòu)象蛋白的檢測模式主要有Western-Blot和MS方法，這兩種方法都無法實現(xiàn)高通量的篩選。2019年7月，PELAGO公司正式和PerkinElmer公司達成戰(zhàn)略合作協(xié)議，推出高通量，高靈敏度的CETSA?HT檢測方案，即Alpha?-CETSA?

Alpha?-CETSA?的操作

1.樣品和化合物進行孵育。

2.進行熱休克操作（建議在PCR儀上進行該操作）。

3.加入合適的裂解液。

4.加入Alpha? CETSA?檢測試劑。

5.在具有Alpha?功能的酶標(biāo)儀上檢測。

Z新酶標(biāo)儀加載Alpha?功能

PerkinElmer公司的Victor NIVOZ新款酶標(biāo)儀加載了Alpha?功能，這是目前可以開展Alpha?CETSA?檢測細胞水平蛋白-分子相互作用的Z小的儀器。

目前，PerkinElmer和PELAGO一起推出的蛋白靶點試劑盒有Akt1，BCL-2，EGFR，MEK1和p38 MAKP，工具微珠2套，方便客戶靈活使用這項技術(shù)。更多的商品化試劑盒也會陸續(xù)推出。

復(fù)制鏈接，了解更多https://www.perkinelmer.com.cn/category/alpha-CETSA-kits

關(guān)于珀金埃爾默：

珀金埃爾默致力于為創(chuàng)建更健康的世界而持續(xù)創(chuàng)新。我們?yōu)樵\斷、生命科學(xué)、食品及應(yīng)用市場推出獨特的解決方案，助力科學(xué)家、研究人員和臨床醫(yī)生解決Z棘手的科學(xué)和YL難題。憑借深厚的市場了解和技術(shù)專長，我們助力客戶更早地獲得更準(zhǔn)確的洞見。在，我們擁有12500名專業(yè)技術(shù)人員，服務(wù)于150多個國家，時刻專注于幫助客戶打造更健康的家庭，改善人類生活質(zhì)量。2018年，珀金埃爾默年營收達到約28億美元，為標(biāo)準(zhǔn)普爾500指數(shù)中的一員，紐交所上市代號1-877-PKI-NYSE。

了解更多有關(guān)珀金埃爾默的信息，請訪問www.perkinelmer.com.cn

校準(zhǔn)實驗室在客戶現(xiàn)場開展計量校準(zhǔn)時，計量人員一般就當(dāng)成在自家實驗室一樣，進行計量活動，有一些可能跟固定場所不太相同或者干擾因素未能考慮進去，導(dǎo)致在重復(fù)性上出現(xiàn)較大問題，有些實驗室在外部評審時也被評審老師提出現(xiàn)場校準(zhǔn)不能提供充分的滿足規(guī)程規(guī)范要求的現(xiàn)場計量的證據(jù)，而被開了不符合。故非固定場所的計量校準(zhǔn)，設(shè)備要求還是蠻苛刻的，應(yīng)該引起重視。

實驗室如果需要開展非固定場所校準(zhǔn)，那么他申請的能力一定要考慮這方面的描述。有些實驗室僅能在實驗室完成校準(zhǔn)，但是給客戶出具報告還是寫了現(xiàn)場地點，出現(xiàn)不真實情況。

故如果申請非固定場所校準(zhǔn)，實驗室必須能夠便于攜帶設(shè)備包括輔助設(shè)備，且設(shè)備符合實際預(yù)期要求，經(jīng)過計量溯源和計量確認驗證通過。

有些實驗室配備現(xiàn)場計量設(shè)備準(zhǔn)確度根本不符合規(guī)范要求的允差，但是實驗室還說這個設(shè)備我們在實驗室用標(biāo)準(zhǔn)器比對過，基本沒有誤差，故很準(zhǔn)確，不用考慮設(shè)備的允差是否超過規(guī)范要求。這種解釋還是比較任性和荒謬的。

首先非固定場所標(biāo)準(zhǔn)器設(shè)備必須滿足校準(zhǔn)方法要求，條款明確說明。校準(zhǔn)實驗室為在非固定場所實施校準(zhǔn)所配備的測量設(shè)備不符合校準(zhǔn)方法規(guī)定時，不應(yīng)實施相關(guān)校準(zhǔn)。

如果滿足了，現(xiàn)場校準(zhǔn)給出的不確定度可能并不會像在固定場所給出的不確定度那么小，這個也是比較現(xiàn)實可想而知的，一般情況下而言。

另外對校準(zhǔn)結(jié)果有直接影響的測量設(shè)備不應(yīng)由客戶提供，客戶僅可提供必要的工作條件（如場地、環(huán)境設(shè)施、電源等）和輔助工具。 實驗室哪些設(shè)備是必須自己攜帶，哪些設(shè)備是可以使用客戶的。這里也要注意，一些設(shè)備校準(zhǔn)，可能對外部供電或者環(huán)境振動或者溫濕度波動度有要求，故校準(zhǔn)實驗室計量人員應(yīng)該注重這方面，如何去符合規(guī)范規(guī)程的要求進行現(xiàn)場計量。一般客戶工廠都會有自己的計量室，在那里可能有環(huán)境溫濕度以及條件較為好的設(shè)施設(shè)備提供，計量人員可以問詢客戶，到客戶計量科室進行現(xiàn)場計量。

校準(zhǔn)實驗室應(yīng)在非固定場所實施校準(zhǔn)所用設(shè)備的使用和管理要求，包括其包裝、運輸、存儲、安裝、驗證、使用、故障處理等。

上述條款是對非固定場所所使用的設(shè)備要求，主要是設(shè)備運輸儲存，安裝，最重要的就是設(shè)備前后輸運確認。一般采用穩(wěn)定性好的設(shè)備進行驗證。比如實驗室外出攜帶標(biāo)準(zhǔn)器功率計，那么實驗室可能拿出一個穩(wěn)定性較好的負載在運輸前后記錄負載相關(guān)的電壓或電流數(shù)據(jù)，再設(shè)備帶回來時候進行前后比對，確認設(shè)備運輸前后無變化，這里主要是指設(shè)備功能無問題，設(shè)備設(shè)置的參量比如小數(shù)點位數(shù)或濾波是否開啟等有無變化。