黃曲霉毒素(aflatoxins)是一種由黃曲霉和寄生曲霉等真菌經(jīng)過聚酮途徑產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)通常包含一個雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰?fù)?，天然產(chǎn)生的黃曲霉毒素根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)不同分為B?、B?、G? 、G?四種。

食品遭受產(chǎn)毒真菌以及霉菌毒素污染的問題在世界范圍內(nèi)反復(fù)發(fā)生，被污染的農(nóng)作物作為飼料資源被畜禽食用后， 攜帶的霉菌毒素又可在肉、蛋、奶等食品中蓄積，通過食物鏈傳遞， 危害人類健康。

逗點生物采用最新自主研發(fā)的Copure?228多功能凈化柱，建立玉米粉中黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?檢測的LC-MS/MS檢測方法。該方法低、中、高三個水平的加標(biāo)回收率均在90-100 %之間，RSD小于5 %，操作簡便快捷，與國內(nèi)外的競品相比，具有回收率高和脫色凈化效果好的優(yōu)勢，能夠作為玉米粉中黃曲霉毒素檢測的參考方法。

本方法適用于谷物及其制品、豆類及其制品、堅果及籽類、油脂及其制品、調(diào)味品、嬰幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品中黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?的測定。

參照 《GB 5009.22-2016  食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》。

一、樣品前處理

1.1  樣品提取

（1）稱取 5 g試樣于50 mL離心管中，加入一定量同位素內(nèi)標(biāo)工作液振蕩混合后靜置30 min。

（2）加入20 mL乙腈-水溶液（84+16），渦旋混勻，置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20 min，在6000 r/min下離心10 min，取上清液備用。

1.2  樣品凈化

（1）向玻璃試管中加入10 mL樣品提取液。

（2）將Copure? 228多功能凈化柱（貨號：COAF228）橡膠頭從試管頂端插入試管中，并向下壓凈化柱至試管底端。

（3）將凈化柱上部凈化后的樣品提取液取出至樣品瓶或EP管中。

（4）取5 mL凈化提取液，氮氣吹干，用1 mL初始流動相復(fù)溶，渦旋 30s 溶解殘渣，過微孔濾膜，上機分析。

二、儀器條件

儀器設(shè)備：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀 SCIEX Triple Quad? 4500 

色譜柱：Waters C18   2.1x100mm 1.7um

流動相：A：0.1%甲酸水    B：乙腈

流動相梯度：初始80%A，20%A（0 min~2 min），20%A（2 min~3 min），

80%A（3 min~3.1min），80%A（3.1min~5min）

流速：0.3 mL/min

柱溫：室溫

進樣體積：10.0 μL

質(zhì)譜條件：

檢測方式：多離子反應(yīng)檢測（MRM）；

表1 離子源控制條件

表2 離子選擇參數(shù)

（注：*為定量離子）

三、實驗結(jié)果

表3  玉米粉中黃曲霉毒素加標(biāo)回收實驗結(jié)果

圖1 不同品牌多功能凈化柱處理加標(biāo)樣品后的脫色效果圖（①玉米粉加標(biāo)樣品-未凈化處理    ②Copure?228-凈化處理    ③ 國外A品牌-凈化處理     ④ 國內(nèi)B品牌-凈化處理）

Copure?228脫色效果明顯，其脫色能力與國外A品牌相當(dāng)，并顯著優(yōu)于國內(nèi)B品牌。

圖2 使用Copure?228凈化后的加標(biāo)樣品的EIC色譜圖

四、訂購信息

現(xiàn)行使用的2020年版藥典中，對于黃曲霉毒素的檢測有明確要求，現(xiàn)檢測品種由2015年藥典要求的19種中藥材增加到25種中藥材原料，及用這些原料制成的飲片、丸劑等成品藥，現(xiàn)有2020年版藥典中對于黃曲霉的檢測方法有三種，第一種是高效液相色譜法+光化學(xué)衍生法；第二種是高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；第三種是酶聯(lián)免疫法?，F(xiàn)在大部分藥檢所機構(gòu)及中藥企業(yè)實驗室基本采用第一種方法居多，不管是從檢測復(fù)雜程度、設(shè)備成本、耗材成本多方面考慮，第一法都有一定的優(yōu)勢。我們公司可以提供第一法的解決方案，并給國內(nèi)100+中藥企業(yè)提供過解決方案，如需要解決方案的可與我們溝通聯(lián)系。

現(xiàn)行藥典方法都是化驗室用來定量檢測的，從樣品前處理到得到結(jié)果，最快也需要3小時以上，而這是樣品已經(jīng)入庫，對于黃曲霉風(fēng)險比較高的樣品，例如酸棗仁、柏子仁、遠(yuǎn)志等中藥材，如果已經(jīng)入庫后，且黃曲霉超標(biāo)，該樣品將無法進入到生產(chǎn)環(huán)節(jié)，這樣對于企業(yè)的經(jīng)濟損失將是非常大的，那就急需要一種能現(xiàn)場快速檢測黃曲霉的設(shè)備，并且結(jié)果有保證的檢測方法。

中檢維康生物公司提供一套現(xiàn)場快速檢測中藥材黃曲霉的方案，基于膠體金免疫層析快速檢測技術(shù)（GICA）通過圖像分析技術(shù)定量快速檢測中藥材中黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素總量、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮，以及赭曲霉毒素A等真菌毒素的含量。

1.質(zhì)控樣品名稱

玉米粉中黃曲霉毒素B1和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）（天然毒素非添加）質(zhì)控樣品

產(chǎn)品編號：TMQC0035a    規(guī)格：100g

產(chǎn)品編號：TMQC0035 規(guī)格：50g

2.質(zhì)控樣品描述

天然玉米粉中黃曲霉毒素B1（AFB1）和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）分析質(zhì)控樣品，固體粉末，鋁箔袋真空封裝，分為50g/100g二種包裝。

本質(zhì)控樣品選用自然玉米，基質(zhì)中黃曲霉毒素B1和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）為天然生長，經(jīng)除雜、粉碎、過篩、混勻、包裝、均勻性考察、穩(wěn)定性考察、定制等制備而成。

樣品-20°C保存，有效期至2020年3月31日。

使用前請將樣品充分混勻，樣品一旦開封請盡快使用，避免樣品相關(guān)特性發(fā)生變化。

3.用途

  本質(zhì)控樣品主要用于內(nèi)部質(zhì)量控制、方法證實/確認(rèn)，人員考核和分析過程的質(zhì)量控制等。

4.驗收要求

  收到樣品后，應(yīng)于當(dāng)日認(rèn)真檢查樣品狀態(tài)，如果發(fā)生樣品內(nèi)包裝破損，標(biāo)識污損、樣品泄露等異常情況，請勿開封樣品，立即與聯(lián)系人聯(lián)系，經(jīng)聯(lián)系人確認(rèn)同意更換樣品后，請采購方按照保存條件妥善保存樣品，并于48小時內(nèi)將原樣品原包裝寄回。如收到樣品當(dāng)日未反饋樣品異常情況，過后發(fā)現(xiàn)，由采購方自負(fù)。

5.指定值及標(biāo)準(zhǔn)差

6.均勻性和穩(wěn)定性檢驗

根據(jù)《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理》規(guī)定進行樣品均勻性和穩(wěn)定性研究檢測。結(jié)果顯示，樣品是均勻的。避光、冷凍保存，12個月內(nèi)質(zhì)控樣品穩(wěn)定性良好。

7.溯源性

本質(zhì)控樣品，使用滿足計量學(xué)特性要求的容量器具和定值方法，在檢測中使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)繪制工作曲線，以確保質(zhì)控樣品量值溯源性。

8.正確使用說明

本質(zhì)控樣品Z小稱樣量不低于10g，質(zhì)控樣品從冰箱取出后，待恢復(fù)至室溫再開袋使用；每次使用完迅速將鋁箔袋口密封后，適宜的溫度下保存。

9.運輸和貯存

冰袋加保溫盒的包裝形式運輸，未開封時短期可常溫  保存，推薦冷凍保存。

10.安全警示

使用時請戴口罩、手套在生物安全柜或通風(fēng)櫥中操作。用過的器皿應(yīng)放入5%次氯酸鈉溶液脫毒處理。本質(zhì)控樣品實驗室使用，不可食用。

研制單位：北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司

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（來源:北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）

一、質(zhì)控樣品名稱

花生粕粉中黃曲霉毒素總量定量分析質(zhì)控樣品

二、質(zhì)控樣品描述

花生粕粉中黃曲霉毒素總量定量分析質(zhì)控樣品，固體粉末，鋁箔袋真空封裝，每袋50 g。

本質(zhì)控樣品選用自然花生，壓榨提煉油脂后得到花生粕，經(jīng)除雜、粉碎、過篩、混勻、包裝、均勻性考察、穩(wěn)定性考察、定值等制備而成。

樣品-20 °C保存，有效期至2020年7月30日。使用前請將樣品充分混勻，樣品一旦開封請盡快使用，避免樣品相關(guān)特性發(fā)生變化。

三、用途

本質(zhì)控樣品主要用于內(nèi)部質(zhì)量控制、方法證實/確認(rèn)，人員考核和分析過程的質(zhì)量控制等。

四、驗收要求

收到樣品后，應(yīng)于當(dāng)日認(rèn)真檢查樣品狀態(tài)，如果發(fā)生樣品內(nèi)包裝破損，標(biāo)識污損、樣品泄露等異常情況，請勿開封樣品，立即與聯(lián)系人聯(lián)系，經(jīng)聯(lián)系人確認(rèn)同意更換樣品后，請采購方按照保存條件妥善保存樣品，并于48小時內(nèi)將原樣品原包裝寄回。如收到樣品當(dāng)日未反饋樣品異常情況，過后發(fā)現(xiàn)，由采購方自負(fù)。

五、指定值及標(biāo)準(zhǔn)差

六、均勻性和穩(wěn)定性檢驗

    根據(jù)《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的通用原則及統(tǒng)計學(xué)原理》規(guī)定進行樣品均勻性和穩(wěn)定性研究檢測。結(jié)果顯示，樣品是均勻的。避光、冷凍保存，12個月內(nèi)質(zhì)控樣品穩(wěn)定性良好。

七、溯源性

本質(zhì)控樣品，使用滿足計量學(xué)特性要求的容量器具和定值方法，在檢測中使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)繪制工作曲線，以確保質(zhì)控樣品量值溯源性。

八、正確使用說明

本質(zhì)控樣品Z小稱樣量不低于10 g，質(zhì)控樣品從冰箱取出后，待恢復(fù)至室溫再開袋使用；每次使用完迅速將鋁箔袋口密封后，適宜的溫度下保存。

九、運輸和貯存

冰袋加保溫盒的包裝形式運輸，未開封時短期可常溫保存，推薦冷凍保存。

十、安全警示

使用時請戴口罩、手套在生物安全柜或通風(fēng)櫥中操作。用過的器皿應(yīng)放入5%次氯酸鈉溶液脫毒處理。本質(zhì)控樣品實驗室使用，不可食用和飼用。

（來源：北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）