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  wangpeiaili100 2010-04-29 00:00:00

  DNA提取的實驗步驟： 1．取新鮮動物肝，除去結(jié)締組織，用0.14mol／LNaCl－0.15mol／L EDTA溶液洗去血液。在冰浴中切成小塊，稱取10g，加入兩倍體積0.14mol／LNaCl－0.15mol／L EDTA溶液，于研缽中研磨至勻漿，以3000r／min的轉(zhuǎn)速離心10min。 •2．在上述沉淀物中加入0.14mol／LNaCl－0.15mol／L EDTA溶液，使總體積為20mL，然后在60℃下，滴加20％SDS溶液1mL，邊加邊攪拌，再搖動10min，使核酸與蛋白質(zhì)分離。 •3. 邊攪拌邊加固體氯化鈉2g，使其Z終濃度達到l.4mol／L，再搖10min。 •4．加等體積的氯仿一異戊醇，輕混，靜置，離心管內(nèi)的物質(zhì)分為三層，上層為含DNA的水相層，下層為氯仿一異成醇混合物，中間層為變性蛋白凝膠。吸出上清液，倒入另一離心管。 •5．加1/2體積的氯仿一異戊醇混合液，振搖20min，以3000r／min的轉(zhuǎn)速離心10min。 •6．吸出上清液，加入2倍體積95％乙醇溶液（預(yù)冷），產(chǎn)生沉淀。 ·①用玻棒攪拌，DNA的絲狀物即纏在玻棒上，用80％乙醇溶液洗滌一次。 ·②再以4000r／min的轉(zhuǎn)速離心溶液10min，棄去上清液，沉淀用80％乙醇溶液再離心洗滌一次。 •7．將沉淀置于吸水紙上，除盡乙醇，室溫自然干燥后，加入1ml 蒸餾水，使DNA充分溶解，待用。 核酸提取過程中的注意事項： （1）避免過酸過堿或高溫環(huán)境，合適的T：0－4℃， pH4-9； （2）防止機械力的切割作用，避免劇烈振蕩； （3）防止核酸酶的降解作用，可加入YZ劑－EDTA，檸檬酸鈉； （4）整個操作步驟應(yīng)盡量簡化，縮短實驗過程，減少核酸變性、降解、機械切割的機會。 得到的是DNA粗提取液。

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