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  huitoushian510 2014-03-13 00:00:00

  MS培養(yǎng)基的配制包括以下步驟。 培養(yǎng)基母液的配制和保存 MS培養(yǎng)基含有近30種營養(yǎng)成分，為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對這幾十種成分進行稱量，可將培養(yǎng)基中的各種成分，按原量的20倍或200倍分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。這樣每次使用時，取其總量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL），加水稀釋，制成培養(yǎng)液?，F(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需的各類物質(zhì)的量列出，供配制時使用。 大量元素(母液Ⅰ) mg／L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素(母液Ⅱ) KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460 ZnSO4·7H2O 1 720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 鐵鹽(母液Ⅲ) FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460 有機成分(母液Ⅳ) ⅣA 肌醇 20 000 ⅣB 煙酸 100 鹽酸吡哆醇(維生素B6) 100 鹽酸硫胺素(維生素B1) 100 甘氨酸 400 以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外，其余的均為200倍濃縮液。 上述幾種母液都要單獨配成1 L的貯備液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，Z后定容到1 L。 母液Ⅲ的配制方法是：將稱好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分別放到450 mL蒸餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙?，然后將兩種溶液混合，并將pH調(diào)至5.5，Z后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。 各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 MS培養(yǎng)基中還需要加入2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）、6-芐基嘌呤（6BA）等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液（0.1 mg/mL）。其配制方法是：分別稱取這3種物質(zhì)各10 mg，將2，4-D和NAA用少量（1 mL）無水乙醇預溶，將6BA用少量（1 mL）的物質(zhì)的量濃度為0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱，Z后分別定容至100 mL，即得質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的母液。 配制培養(yǎng)液 用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量：母液Ⅰ為50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2，4-D 5 mL、NAA 1 mL，與各種母液一起放入燒杯中。 配制培養(yǎng)液時應注意：①在使用提前配制的母液時，應在量取各種母液之前，輕輕搖動盛放母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應立即淘汰這種母液，重新進行配制；②用量筒或移液管量取培養(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒或移液管潤洗2次；③量取母液時，Z好將各種母液按將要量取的順序寫在紙上，量取1種，劃掉1種，以免出錯。 溶化瓊脂 用粗天平分別稱取瓊脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸餾水750 mL，用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，Z后加蒸餾水定容至1 000 mL，攪拌均勻。 調(diào)pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時用精密的pH試紙（5.4～7.0）測培養(yǎng)基的pH，一直到培養(yǎng)基的pH為5.8為止（培養(yǎng)基的pH必須嚴格控制在5.8）。

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