當(dāng)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)經(jīng)費(fèi)較為緊缺或暫時(shí)沒(méi)有耗材使用時(shí),部分耗材經(jīng)嚴(yán)格清洗、滅菌后也可重復(fù)使用作為暫時(shí)代替的應(yīng)急手段,其主要適用于對(duì)成本敏感、非嚴(yán)格無(wú)菌要求或特定實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景(如原代細(xì)胞粗分離、初步培養(yǎng)),對(duì)于精度要求高的實(shí)驗(yàn),建議暫時(shí)擱置,避免數(shù)據(jù)上誤差和細(xì)胞、試劑的污染。
玻璃制品(最常用)
適用場(chǎng)景:常規(guī)細(xì)胞傳代、非原代細(xì)胞培養(yǎng)(如永生細(xì)胞系)。
處理步驟:
去殘?jiān)菏褂煤罅⒓吹箺壟囵B(yǎng)基,用清水沖洗殘留細(xì)胞(避免干燥后難以清除)。
浸泡與刷洗:浸泡于中性洗滌劑(如專用玻璃清洗劑)或稀鹽酸(0.1M,去除蛋白殘留)中2-4小時(shí),用軟毛刷輕柔刷洗內(nèi)壁,避免刮傷表面。
徹底沖洗:用自來(lái)水沖洗5-10次,再用蒸餾水/去離子水沖洗3次,倒置瀝干。
滅菌:高壓蒸汽滅菌(121℃,20分鐘)或干熱滅菌(160℃,2小時(shí)),滅菌后干燥保存。
注意:
玻璃表面若有劃痕或破損,易殘留細(xì)胞或污染物,需淘汰。 - 原代細(xì)胞、干細(xì)胞等敏感細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),建議使用一次性TC處理耗材(玻璃表面親水性低于塑料,可能影響貼壁)。
優(yōu)勢(shì):耐高溫、化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng),適合反復(fù)滅菌。
處理要點(diǎn):
使用后立即浸泡于清水中(避免液體干涸堵塞管口),用含洗滌劑的軟毛刷清洗內(nèi)壁,必要時(shí)用超聲清洗機(jī)輔助去垢。
滅菌前需烘干或?yàn)r干,可采用牛皮紙包裹后高壓滅菌,或放入金屬筒中干熱滅菌。
金屬器械
適用場(chǎng)景:組織塊處理(如原代細(xì)胞分離)、胚胎操作等。
處理步驟:
1、初步清潔:用75%酒精擦拭表面,去除組織碎屑。
2、深度滅菌:
高壓蒸汽滅菌(適合耐濕熱器械,如不銹鋼制品)。
干熱滅菌(180℃,1小時(shí),適合精密器械)或灼燒滅菌(火焰快速灼燒,僅用于局部處理,需注意避免器械變形)。
注意:
避免使用生銹或鍍層脫落的器械,防止金屬離子污染細(xì)胞。
精密器械(如顯微鑷)建議單獨(dú)包裝滅菌,避免碰撞損傷。
用途:組織消化后過(guò)篩制備單細(xì)胞懸液。
處理方法:
用PBS沖洗殘留組織,浸泡于0.1% SDS溶液中30分鐘,清水沖洗后超聲處理(去除蛋白殘留)。
高壓滅菌后晾干,存放于干燥盒中。
塑料耗材(有限重復(fù)使用)
可重復(fù)的類型:
離心管(50mL/15mL,無(wú)TC處理的普通型):用于細(xì)胞離心、試劑分裝,非貼壁操作。
試劑槽、移液槽:用于配置培養(yǎng)基或緩沖液,需確保無(wú)細(xì)胞黏附殘留。 禁止重復(fù)使用:TC處理的貼壁培養(yǎng)板/瓶(表面涂層易磨損,影響細(xì)胞黏附)、低吸附耗材(涂層破壞后失去防黏功能)。
塑料耗材重復(fù)滅菌次數(shù)有限(通常3次以內(nèi)),高溫高壓后易變形、老化,釋放化學(xué)物質(zhì)(如增塑劑),可能干擾細(xì)胞狀態(tài)。
處理:用后立即清洗表面細(xì)胞殘?jiān)?5%酒精浸泡30分鐘,或高壓滅菌(注意硅膠耐溫上限,避免過(guò)度高溫)。
適用:僅用于非敏感細(xì)胞的傳代(如HeLa細(xì)胞),避免用于原代細(xì)胞或基因編輯細(xì)胞。
其他可重復(fù)耗材
用途:特殊培養(yǎng)體系(如氣液界面培養(yǎng)、共培養(yǎng)支架)。
處理:鹽酸浸泡去除金屬氧化層,清水沖洗后高壓滅菌,干燥保存。
2、玻璃注射器(帶金屬針頭)
適用:細(xì)胞注射、微滴操作等,需確保針頭無(wú)堵塞,玻璃活塞潤(rùn)滑良好。
滅菌:拆卸后分別清洗,高壓滅菌或干熱滅菌。
不可重復(fù)使用的耗材(必須一次性)
| 類型 | 原因 |
| TC 處理培養(yǎng)板 / 瓶 | 表面親水性涂層易被洗滌劑破壞,重復(fù)使用導(dǎo)致細(xì)胞貼壁異常。 |
移液器吸頭(普通 / 濾芯) | 塑料材質(zhì)易殘留核酸、蛋白或化學(xué)試劑,且滅菌后可能變形,影響移液精度。 |
| 細(xì)胞培養(yǎng)皿(帶透氣膜) | 透氣膜結(jié)構(gòu)復(fù)雜,清洗后無(wú)法保證無(wú)菌性和透氣性。 |
| 凍存管 | 內(nèi)壁可能有防黏涂層,且凍存過(guò)程中可能殘留細(xì)胞保護(hù)劑(如 DMSO),難以徹底清除。 |
重復(fù)使用的核心原則
避免用于關(guān)鍵實(shí)驗(yàn):原代細(xì)胞培養(yǎng)、基因編輯細(xì)胞、干細(xì)胞分化等對(duì)污染高度敏感的場(chǎng)景,必須使用一次性耗材。
標(biāo)記重復(fù)次數(shù):在耗材上標(biāo)注“已使用X次”,塑料耗材建議3次以內(nèi),玻璃制品5次以內(nèi)(視磨損情況)。
無(wú)殘留檢測(cè):清洗后用蛋白檢測(cè)試劑(如BCA法)驗(yàn)證表面無(wú)蛋白殘留,或通過(guò)空白培養(yǎng)(接種培養(yǎng)基后孵育24小時(shí),觀察是否渾濁)排查污染。
滅菌記錄:建立耗材滅菌臺(tái)賬,記錄每次滅菌時(shí)間、條件和使用人。
重復(fù)使用可降低成本(尤其大規(guī)模培養(yǎng)),但需投入額外的清洗、滅菌時(shí)間和人力,需評(píng)估綜合效益。
可重復(fù)使用的耗材以玻璃制品和金屬器械為主,塑料耗材僅在非貼壁、低敏感場(chǎng)景有限重復(fù)。以上重復(fù)耗材或多或少會(huì)對(duì)細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生一些誤差或者污染,僅為經(jīng)費(fèi)非常緊缺的實(shí)驗(yàn)室或短期內(nèi)無(wú)法提供相應(yīng)耗材的應(yīng)急手段,對(duì)于科研精度要求高的實(shí)驗(yàn),優(yōu)先使用一次性耗材以避免污染風(fēng)險(xiǎn)和數(shù)據(jù)偏差。
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