在腸道微生態(tài)、環(huán)境沉積物及污泥體系中,大量關(guān)鍵功能微生物屬于嚴(yán)格厭氧或兼性厭氧類型。這些微生物在碳循環(huán)、代謝調(diào)控及微生態(tài)平衡中發(fā)揮核心作用,但其分離與培養(yǎng)長(zhǎng)期面臨技術(shù)瓶頸。
一方面,許多厭氧菌對(duì)氧氣極為敏感,短時(shí)間暴露即可導(dǎo)致活性下降甚至失活;另一方面,在混合樣本中它們往往豐度較低、生長(zhǎng)緩慢,傳統(tǒng)擴(kuò)培方式難以穩(wěn)定獲得純培養(yǎng)。因此,如何在維持無氧環(huán)境的前提下,實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞級(jí)精準(zhǔn)分選與后續(xù)培養(yǎng)驗(yàn)證,成為厭氧菌研究的關(guān)鍵技術(shù)需求。
圍繞這一問題,基于PRECI SCS 可視化單細(xì)胞分選儀與HoneyArray微陣列分選芯片的組合平臺(tái),構(gòu)建了一套適用于嚴(yán)格厭氧菌的單細(xì)胞分選培養(yǎng)方案。
原文鏈接:PRECI SCS 可視化單細(xì)胞分選儀
原文鏈接:長(zhǎng)光辰英單細(xì)胞分選儀系列耗材——精準(zhǔn)分選 · 活性保障 · 全流程解決方案
在實(shí)際驗(yàn)證中,以嚴(yán)格厭氧菌Bifidobacterium longumNCC 2705為模型菌株,在厭氧條件下完成樣本處理、單細(xì)胞分選及培養(yǎng)。通過顯微確認(rèn)目標(biāo)細(xì)胞后,采用LIFT技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞定點(diǎn)轉(zhuǎn)移,并直接銜接厭氧培養(yǎng)體系。結(jié)果顯示,單細(xì)胞分選得率接近100%,培養(yǎng)成功率達(dá)到90%,經(jīng)16S rDNA驗(yàn)證確認(rèn)獲得目標(biāo)菌株。
嚴(yán)苛厭氧菌單細(xì)胞分選、培養(yǎng)
嚴(yán)苛厭氧菌單細(xì)胞分選培養(yǎng)后的16S rDNA擴(kuò)增和測(cè)序驗(yàn)證
該結(jié)果表明,在嚴(yán)格無氧條件下實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞級(jí)分選與擴(kuò)培是穩(wěn)定可行的。
在厭氧菌研究中,分選過程是否會(huì)影響細(xì)胞活性,是決定培養(yǎng)成功率的關(guān)鍵因素。
PRECI SCS 采用激光誘導(dǎo)向前轉(zhuǎn)移(LIFT)技術(shù),在顯微視野下實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞定點(diǎn)轉(zhuǎn)移。分選激光作用于芯片薄膜層,通過瞬時(shí)能量驅(qū)動(dòng)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)移,與目標(biāo)細(xì)胞本身不直接接觸,從物理層面降低分選過程中對(duì)單細(xì)胞的損傷風(fēng)險(xiǎn)。
配套的HoneyArray 微陣列分選芯片通過有序微單元結(jié)構(gòu)維持細(xì)胞處于液態(tài)環(huán)境,有助于保持厭氧菌的生理狀態(tài),并提高后續(xù)培養(yǎng)成功率。
這種“可視確認(rèn)+ 無接觸轉(zhuǎn)移 + 液態(tài)維持”的組合模式,使厭氧單細(xì)胞分選在保證精準(zhǔn)性的同時(shí),更好地兼顧細(xì)胞活性與后續(xù)擴(kuò)培需求。
長(zhǎng)光辰英厭氧單細(xì)胞前處理和分選平臺(tái)
厭氧微生物的研究?jī)r(jià)值日益凸顯,但其分離與培養(yǎng)始終是制約功能解析的重要環(huán)節(jié)。通過PRECI SCS 可視化單細(xì)胞分選儀與HoneyArray微陣列分選芯片的組合,并結(jié)合成熟的厭氧操作平臺(tái)搭建經(jīng)驗(yàn),研究者能夠在嚴(yán)格無氧條件下完成單細(xì)胞級(jí)精準(zhǔn)分選與活體擴(kuò)培,為腸道微生物、環(huán)境功能菌及難培養(yǎng)微生物研究提供穩(wěn)定可靠的技術(shù)支持。
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