人GABA轉(zhuǎn)運(yùn)體1(GAT1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書

　　BS-9752人GABA轉(zhuǎn)運(yùn)體1(GAT1)ELISA試劑盒

　　一、檢測原理

　　本試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)技術(shù)。
預(yù)先包被抗人GAT1抗體的微孔板中，依次加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)溫育洗滌后，通過TMB底物顯色反應(yīng)，顏色深淺與樣本中GAT1濃度呈正相關(guān)。
在450nm波長下測定吸光度(OD值)并計(jì)算濃度。

　　二、試劑盒組成

　　預(yù)包被抗體的微孔板(96孔)

　　標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5，濃度梯度：0、0.5、1、2、4、8μmol/L)

　　HRP標(biāo)記的檢測抗體

　　20×洗滌緩沖液

　　TMB底物溶液

　　終止液(溶液)

　　樣本稀釋液

　　封板膜

　　三、自備物品

　　酶標(biāo)儀(450nm波長)

　　高精度移液器及槍頭(0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL)

　　37℃恒溫箱

　　洗瓶或自動洗板機(jī)

　　蒸餾水

　　吸水紙

　　四、樣本收集與處理

　　1. 血清樣本

　　使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集血液，避免溶血。

　　室溫靜置30分鐘，3000×g離心10分鐘，取上清液。

　　保存：短期(≤24小時(shí))4℃;長期需分裝凍存于-20℃(避免反復(fù)凍融)。

　　2. 血漿樣本

　　使用EDTA/肝素抗凝管采集，立即混勻。

　　3000×g離心30分鐘，取上清液。

　　保存同血清樣本。

　　3. 細(xì)胞上清液

　　3000×g離心10分鐘，去除顆粒物。

　　取上清液檢測。

　　4. 組織勻漿

　　組織塊加入生理鹽水(1:9 w/v)機(jī)械勻漿。

　　3000×g離心10分鐘，取上清液。

　　五、操作步驟

　　1. 試劑準(zhǔn)備

　　洗滌液：20×濃縮液按1:19用蒸餾水稀釋(如10mL濃縮液+190mL蒸餾水)。

　　標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：按說明書稀釋S1-S5標(biāo)準(zhǔn)品。

　　2. 加樣與溫育

　　設(shè)空白孔(S0)、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔，每孔加稀釋樣本100μL。

　　加入HRP標(biāo)記檢測抗體50μL/孔(標(biāo)準(zhǔn)品孔除外)。

　　37℃避光溫育30分鐘。

　　3. 洗滌

　　手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩干，重復(fù)5次。

　　自動洗板：每孔注入350μL洗滌液，浸泡1分鐘，洗板5次。

　　4. 顯色與終止

　　每孔加TMB底物90μL，37℃避光顯色15分鐘。

　　每孔加終止液50μL終止反應(yīng)(藍(lán)色變黃色)。

　　5. 測定

　　30分鐘內(nèi)于450nm波長測定OD值。

　　六、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　樣本OD值代入曲線方程計(jì)算濃度，乘以稀釋倍數(shù)(如樣本稀釋5倍，結(jié)果×5)。

　　七、注意事項(xiàng)

　　試劑盒保存于2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。

　　濃縮洗滌液結(jié)晶屬正?，F(xiàn)象，水浴加熱溶解后使用。

　　避免樣本溶血、反復(fù)凍融。

　　嚴(yán)格控制溫育時(shí)間、洗滌次數(shù)及加樣順序。

　　顯色液變藍(lán)后立即終止反應(yīng)。

　　八、性能指標(biāo)

　　靈敏度：≤0.1μmol/L

　　檢測范圍：0.5-8μmol/L

　　精密度：批內(nèi)變異系數(shù)≤10%，批間≤15%

　　特異性：不與GAT2、GAT3等交叉反應(yīng)

　　九、有效期

　　6個(gè)月(2-8℃密封保存)

　　注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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