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大鼠(MIF)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明書如下:
1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中(MIF)的含量?。
2. 實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠(MIF)水平。用純化的大鼠(MIF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品及HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色,TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成的黃色。顏色的深淺與樣品中的(MIF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度?。
3. 試劑盒組成
封板膜:2片
說明書:1份
密封袋:1個(gè)
標(biāo)準(zhǔn)品:2700ng/L,0.5ml×1瓶
酶標(biāo)包被板:1×48或1×96
樣品稀釋液:3ml×1瓶或6ml×1瓶
顯色劑A液:3ml×1瓶或6ml×1瓶
顯色劑B液:3ml×1瓶或6ml×1瓶
終止液:3ml×1瓶或6ml×1瓶
濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶或(20ml×30倍)×1瓶?。
4. 樣本處理及要求
血清?:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),收集上清?。
血漿?:使用EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后離心,收集上清?。
尿液?:無(wú)菌管收集,離心后取上清?。
細(xì)胞培養(yǎng)上清?:檢測(cè)分泌性成分時(shí),直接收集上清;檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)成分時(shí),需反復(fù)凍融細(xì)胞懸液后離心?。
組織標(biāo)本?:切割后稱重,加入PBS勻漿,離心后取上清?。
5. 實(shí)驗(yàn)步驟
將標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)本依次加入包被微孔板中,溫育并洗滌?。
加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,溫育并洗滌?。
加入底物TMB顯色,反應(yīng)終止后測(cè)定吸光度(OD值)?。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度?。
6. 注意事項(xiàng)
試劑盒需在-20℃保存,開封后酶標(biāo)板需密封保存?。
標(biāo)本采集后應(yīng)盡快檢測(cè),避免反復(fù)凍融?。
實(shí)驗(yàn)操作需在相同環(huán)境條件下進(jìn)行,以減少誤差?。
7. 結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值計(jì)算濃度,再乘以稀釋倍數(shù)?。
以上為實(shí)驗(yàn)使用說明書的詳細(xì)內(nèi)容,供參考?。
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