Biacore卓越的靈敏度和廣泛的樣品檢測類型,使其不僅能檢測大分子藥物的效價,本文將為您總結(jié):使用Biacore進行血樣、牛奶等體系中,小分子(藥物、毒素)、蛋白/多肽(疾病標(biāo)志物類)、核酸、細(xì)菌(致病菌)的定性和定量,涵蓋食品安全、治療藥物監(jiān)測、疾病篩查、遺傳性疾病檢測、轉(zhuǎn)基因檢測等各研究領(lǐng)域。
01
小分子篇
① 血樣中氯霉素檢測
治療藥物監(jiān)測通過測定病人治療用藥的血濃度或其他體液濃度,輔助制定個體精確給藥方案,從而達到有效而安全治療的目的。2022年海軍軍醫(yī)大學(xué)研究團隊發(fā)表了Development of a surface plasmon resonance biosensor for accurate and sensitive quantitation of small molecules in blood samples[1]的研究論文,使用Biacore開發(fā)了血樣中氯霉素的SPR biosensor檢測方法,其檢測結(jié)果與UPLC-UV一致,且檢測范圍0.1-50 ng/mL,Z低檢出限0.099±0.023 ng/m,均低于UPLC-UV方法,具有更高的靈敏度,日內(nèi)和日間精密度均滿足分析要求。
圖1:使用Biacore檢測血樣中氯霉素含量
② 食品農(nóng)殘檢測-三唑磷
農(nóng)藥殘留是食品安全的重要指標(biāo),浙江大學(xué)研究團隊發(fā)表的文章中,使用Biacore開發(fā)了有機磷農(nóng)殘檢測的生物傳感技術(shù)[2],檢測限降低至0.1 ppb,同時樣品前處理簡單。相關(guān)信息請點擊(? Biacore在食品安全領(lǐng)域應(yīng)用之農(nóng)藥殘留檢測方法開發(fā))。
③ 食品抗生素檢測-四環(huán)素
四環(huán)素類抗生素由于其廣譜性和價格低廉被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),同時也被應(yīng)用于養(yǎng)蜂中,預(yù)防和治療多種感染性疾病。蜂產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素的殘留是重要的檢測指標(biāo),中國海洋大學(xué)的研究團隊,基于核酸適配體,利用Biacore開發(fā)了蜂蜜中四環(huán)素的SPR aptasensor檢測方法[3]。為了提高核酸適配體芯片的靈敏度,文中使用DNA納米結(jié)構(gòu)技術(shù),抗四環(huán)素適配體 (Apt76) 構(gòu)建在四面體納米結(jié)構(gòu)的頂部,以提供比單鏈Apt76 (ss-Apt76) 更好的四環(huán)素接近性,此基于四面體的SPR受體傳感器對真實蜂蜜樣品的LOD值為0.0069 μg/kg,回收率為80.20%-114.3%,對四環(huán)素具有較高的特異性。
圖2:基于Biacore芯片的四面體-SPR aptasensor
④ 分子印跡聚合物 (MIPs) 檢測“瘦肉精”
分子印跡聚合物 (MIPs) 是一種具有特異性識別和選擇性吸附的聚合物,可以特異性地結(jié)合待測分子,相較于抗體、核酸適配體,在水相、有機相中有更好的穩(wěn)定性。中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所研究團隊利用裸金芯片制備MIP/GNPs/rGO-SPR chip,使用Biacore X100建立了ractopamine(“瘦肉精”)快速檢測方法。此方法對ractopamine及類似物具有特異性,檢測線性范圍為20~1000 ng/mL,Z低檢出限為5 ng/mL。
圖3:MIP/GNPs/rGO-SPR chip檢測示意圖
⑤ 食品真菌毒素檢測
赭曲霉毒素A (Ochratoxin A, OTA) 是一種綠酚類真菌毒素,廣泛存在于植物性食品中。北京化工大學(xué)與中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所發(fā)表的研究論文中,利用OTA特異的核酸適配體,使用Biacore開發(fā)了OTA的SPR檢測方法,OTA的檢出范圍為0.094-100 ng/mL(線性范圍為0.094-10 ng/mL),Z低檢出限為0.005 ng/mL。檢測真實樣品葡萄酒和花生油中OTA時,加樣回收率為86.9%-116.5%,變異系數(shù)為0.2%-6.9%,具有良好的分析性能,檢出限遠(yuǎn)低于Z大殘留限,重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好。
圖4:OTA SPR biosensor方法檢測范圍寬,LOD低
02
蛋白/多肽篇
① 血栓篩查:血漿中D-dimer檢測
D-dimer是纖溶酶在纖維蛋白分解過程中產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)片段,是診斷血栓性疾病的成熟生物標(biāo)志物。海軍軍醫(yī)大學(xué)近期發(fā)表的文章中,基于D-dimer抗體,使用Biacore建立了一種高靈敏度、快速的D-dimer免疫分析方法,并成功地應(yīng)用于人血漿中D-dimer的定量[6]。此方法檢測限為8.3 ng/mL,檢測范圍為31.25-4000 ng/mL。檢測時間20 min。通過比較29例健康個體和血栓患者樣本,分別使用SPR和經(jīng)典乳膠增強免疫比濁法測定D-dimer血漿濃度,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種方法具有良好的一致性。
圖5:血樣中D-dimer檢測方法
② 混合適配體:一步篩查NT-proBNP和TNF-α
基于SPR的疾病篩查方法應(yīng)用廣泛,為了進一步提高檢測速度和檢測效率,慶北大學(xué)研究團隊制備了SPR-混合適配體芯片,使用Biacore同時檢測急性心肌梗死 (AMI) 生物標(biāo)志物n端腦鈉肽前體 (NT-proBNP) 和腫瘤壞死因子α (TNF-α) [7]。文章首先將NT-proBNP、TNF-α適配體以1:1混合偶聯(lián)在裸金芯片上,接著NT-proBNP、TNF-α混合物流過芯片表面,再使用夾心法,分別進樣NT-proBNP、TNF-α抗體或進混合抗體,單個通道即可檢測兩種生物標(biāo)志物。此方法在緩沖液中NT-proBNP和TNF-α的動態(tài)范圍分別為0.05-0.5 nM和0.1-5 pM, NT-proBNP的檢測和定量限分別為0.03和0.19 nM, TNF-α的檢測和定量限分別為0.06和0.21 pM?;旌线m配體芯片Z終被用于直接測量健康對照和AMI患者未稀釋血清樣本中的NT proBNP和TNF-α濃度。
圖6:單個表面上同時檢測NT-proBNP和TNF-α蛋白流程示意圖
③ 非小細(xì)胞肺癌生物標(biāo)志物檢測
神經(jīng)元特異性烯醇化酶 (NSE) 和原胃泌素釋放肽 (ProGRP31-98) 被公認(rèn)是臨床檢測非小細(xì)胞肺癌的可靠的生物標(biāo)志物。長治醫(yī)學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)系與長治學(xué)院化學(xué)系聯(lián)合開發(fā)了基于適配體的表面等離子共振法,對NSE和ProGRP31-98在不同樣本來源中的含量進行了直接檢測[8]。相關(guān)信息請點擊(? 臨床疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物分析,用Biacore就對了)
03
核酸篇
Biacore加核酸探針,如何巧妙地檢測轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品?中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所基因安全評價與應(yīng)用團隊借助Biacore,開發(fā)了針對核酸靶標(biāo)的特異性、高靈敏、可再生的生物傳感技術(shù),為轉(zhuǎn)基因檢測提供新的高效手段,并且利用多通道設(shè)備,一次進樣即可對三個目標(biāo)基因進行檢測,真正實現(xiàn)了多重檢測的目的[9]。相關(guān)信息請點擊(? 生物芯片傳感技術(shù)如何助力搭建高質(zhì)量核酸篩選平臺)。
04
細(xì)菌篇
除了毒素,食品中的致病菌也是重要檢測項,而Biacore能涵蓋小分子、大分子到細(xì)胞等各類型生物樣品。O157:H7大腸桿菌是Z常見的腸出血性大腸桿菌,浙江大學(xué)研究團隊利用Biacore建立了一種使用凝集素作為配體,檢測O157:H7大腸桿菌的方法[10],對O157:H7大腸桿菌的檢出限為3*103cfu /mL。通過檢測真實樣品,證明SPR-lectin biosensor靈敏度高、可信、有效。
圖7:SPR-lectin biosensor檢測大腸桿菌
Biacore作為分子互作的“金標(biāo)準(zhǔn)”,被應(yīng)用在與分子互作相關(guān)的各個領(lǐng)域,是中國藥典認(rèn)可的“復(fù)雜樣品中特定蛋白濃度的測定”方法,因其高靈敏、快速、高通量,也被廣泛應(yīng)用到其他分子檢測方法的開發(fā)中。Biacore還有哪些動力學(xué)/親和力檢測外的創(chuàng)新應(yīng)用?期待與廣大用戶共同發(fā)現(xiàn)!
參考文獻
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