重組Ⅲ型膠原蛋白是通過生物工程技術將人體膠原蛋白的mRNA逆轉錄成cDNA并嫁接至載體上，再利用轉錄酶表達成原始蛋白，經(jīng)過高密度發(fā)酵、分離、復性、純化、酶切工藝生產(chǎn)的一種高分子生物蛋白。

試問誰不想擁有“嬰兒肌”呢？大家看到細膩的皮膚都會感慨一句：這滿滿的膠原蛋白！

Ⅲ型膠原蛋白主要存在于嬰兒皮膚或血管內(nèi)膜、腸道中，與皮膚損傷修復和修復質(zhì)量密切相關，因此該類醫(yī)藥 用品對改善皮膚質(zhì)量、促進皮膚創(chuàng)傷修復具有重要作用。

重組Ⅲ型膠原蛋白的有效含量直接決定了基于其研發(fā)的醫(yī)藥用品的效果。本方案給出了利用凱氏定氮法測定重組Ⅲ型膠原蛋白敷料貼、凝膠敷料、液體敷料的蛋白質(zhì)含量的方法。

凱氏定氮儀測定重組Ⅲ型膠原蛋白敷料貼、

凝膠敷料、液體敷料的蛋白質(zhì)含量

儀器與試劑

1、儀器

K1160全自動凱氏定氮儀，SH520自動消解儀，分析天平 。

K1160全自動凱氏定氮儀

2、試劑  

硫酸(分析純)，20g/L硼酸溶液，溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑，400g/L氫氧化鈉溶液，混合催化劑(3gK2SO4、0.2gCuSO4)，0.1mol/L硫酸標準滴定液

實驗方法

1、樣品制備

凝膠敷料、液體敷料：用5ml針管抽取樣品，利用減重稱量法稱取烘干后混合均勻的樣品3.0g(精確至0.1mg)加入消化管，再加入混合催化劑3.2g，沿消化管壁加入濃硫酸10mL。

敷料貼：將敷料貼中的液體組分擠出，收集于試管中，后操作方法與凝膠敷料、液體敷料相同。

2、消解

將加完樣品和試劑的消化管放置于消解儀上，蓋好排廢罩，設定消解儀參數(shù)如下表所示：

3、測試

消解完成后，待消化管冷卻至室溫后取下備用。檢查定氮儀各試劑是否充足，同時做儀器空白，待儀器空白穩(wěn)定后，可將消解好的樣品上機測試。定氮儀參數(shù)設置如下表所示：

結果與討論

1、實驗結果

實驗選取的重組Ⅲ型膠原蛋白敷料貼、液體敷料、凝膠敷料經(jīng)消解、蒸餾、滴定，得到實驗結果如下表所示：

2、結論

本次測試的重組Ⅲ型膠原蛋白液體敷料、凝膠敷料、敷料貼的蛋白質(zhì)含量及RSD值如上表所示，三種樣品的RSD分別為0.78%、0.20%、0.12%，結果平行性良好。

注意事項

對于液體或水分含量較多的凝膠樣品，直接升溫至420℃消解會造成樣品的暴沸，導致樣品損失和安全隱患。因此，應先設置較低溫度(200℃左右)趕出水分，再逐步升溫至420℃消解。