通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)獲得的抗體藥物，由于N-連接型糖鏈的不均一性會(huì)對(duì)藥效產(chǎn)生影響，所以需要再生產(chǎn)工藝中進(jìn)行有效控制。作為抗體藥物生產(chǎn)細(xì)胞系之一的CHO細(xì)胞，在無(wú)血清培養(yǎng)基中不能生物合成粗細(xì)胞生長(zhǎng)因子多胺。因此我們調(diào)查了在抗體生成中多胺對(duì)N-連接型糖鏈的影響。

其結(jié)果是，添加多胺生物合成抑制劑α-二氟甲基鳥(niǎo)氨酸（DFMO）可減弱細(xì)胞增殖，并使抗體產(chǎn)量減少30%。而另一方面，由于多胺缺失引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，會(huì)導(dǎo)致β-1, 4-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1 (B4GAT1) 的mRNA量增加，使半乳糖基化的IgG量突增。另外，還從外部向細(xì)胞內(nèi)多胺枯竭的細(xì)胞添加了多胺，其結(jié)果是抗體產(chǎn)生和半乳糖基化的恢復(fù)受到抑制。由此可以看出，添加多胺對(duì)抗體穩(wěn)定生產(chǎn)有用，以及抗體質(zhì)量控制的可能性。

在這篇論文中，作者使用TSKgel FcR-ⅢA-NPR親和色譜柱分析了抗體的半乳糖基化程度。

文獻(xiàn)鏈接：

https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2023.10.008

使用FcR-ⅢA-NPR親和色譜柱研究了各種抗體藥物、Fc、Fab和ADC的結(jié)合糖鏈結(jié)構(gòu)（長(zhǎng)度）對(duì)保留時(shí)間的影響。含有不均一糖鏈的抗體顯示了多個(gè)分離峰。而含有均一糖鏈的抗體則顯示了單個(gè)洗脫峰。另外，在Cys偶聯(lián)ADC中，觀察到于原抗體相同數(shù)量或更多的洗脫峰，但在Lys偶聯(lián)ADC中欸有觀察到明確的洗脫峰分離。

圖2  使用FcγRIIIa親和色譜柱的分析方法

使用該親和色譜柱進(jìn)行分析，反映出了ADCC活性，不僅可以應(yīng)用于完整抗體，還可用來(lái)對(duì)較難進(jìn)行細(xì)胞依賴性測(cè)定的Fc片段的評(píng)價(jià)。此外，還展示了控制抗體、ADC、Fc片段中的ADCC活性的聚糖重構(gòu)策略。

研究人員在制備純化用于分析的抗體量時(shí)，還使用了制備柱TSKgel FcR-ⅢA-5PW。

https://doi.org/10.1021/acsomega.3c02374