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【顯微課堂】熒光壽命成像與熒光共振能量轉(zhuǎn)移

來源：徠卡顯微系統(tǒng)(上海)貿(mào)易有限公司 更新時間：2024-01-19 09:16:15 閱讀量：652
導(dǎo)讀：【顯微課堂】熒光壽命成像與熒光共振能量轉(zhuǎn)移

體內(nèi)生化定量

熒光壽命是熒光團在發(fā)射熒光光子返回基態(tài)之前保持其激發(fā)態(tài)的平均時間長度。這取決于熒光團的分子組成和納米環(huán)境。


FLIM將壽命測量與成像相結(jié)合：對每個圖像像素以測得的熒光壽命進行顏色編碼，產(chǎn)生額外的圖像反差。因此，F(xiàn)LIM可以提供關(guān)于熒光分子空間分布的信息和有關(guān)其生化狀態(tài)或納米環(huán)境的信息。FLIM的典型應(yīng)用是FLIM-FRET。FRET是研究分子相互作用的成熟技術(shù)。它能用來研究蛋白質(zhì)結(jié)合并在埃的尺度上估算分子間的距離。



FRET—原理


熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）描述了存儲在激發(fā)的熒光分子（供體）中的能量向其附近的非激發(fā)的熒光分子（受體）的非輻射轉(zhuǎn)移。FRET的發(fā)生必須滿足三個條件：

  • 供體發(fā)射光譜與受體激發(fā)光譜的重疊（圖1）

  • 在納米(10–9 m)級上分子必須非常接近（圖2–4）

  • 分子必須具有適當?shù)南鄬Ψ轿?/span>

圖1

圖2

圖3

圖4


影響


由于與r-6密切相關(guān)（圖4），F(xiàn)RET發(fā)生在與生化反應(yīng)高度相關(guān)的空間尺度上，例如蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-DNA相互作用。FRET可以通過靈敏的熒光讀數(shù)來探測分子間的相互作用。這能讓研究人員在體外和體內(nèi)研究分子相互作用。通過合適的熒光標記將兩個相關(guān)的相互作用方連接起來，可以分析雙分子相互作用。FRET還允許構(gòu)建生物探針，通過強烈的構(gòu)象變化導(dǎo)致的分子內(nèi)FRET來報告第二信使的濃度或離子強度。


FRET無疑已發(fā)展成為細胞生物學(xué)、生物物理學(xué)和生物醫(yī)學(xué)成像中廣泛使用的工具。



使用活細胞記錄FLIM圖像


如前所述，F(xiàn)RET效率根據(jù)發(fā)生FRET供體的壽命τquench與未發(fā)生FRET的壽命τ的比率計算得出：

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的歷史Z早可追溯到19世紀，作為德國著名的光學(xué)制造企業(yè)，徠卡顯微成像系統(tǒng)擁有170余年顯微鏡生產(chǎn)歷史，逐步發(fā)展成為顯微成像系統(tǒng)行業(yè)的領(lǐng)先的廠商之一。徠卡顯微成像系統(tǒng)一貫注重產(chǎn)品研發(fā)和Z新技術(shù)應(yīng)用，并保證產(chǎn)品質(zhì)量一直走在顯微鏡制造行業(yè)的前列。


始終與科學(xué)界保持密切聯(lián)系，不斷推出為客戶度身定制的顯微解決方案。徠卡顯微成像系統(tǒng)主要分為三個業(yè)務(wù)部門：生命科學(xué)與研究顯微、工業(yè)顯微與手術(shù)顯微部門。徠卡在歐洲、亞洲與北美有7大產(chǎn)品研發(fā)中心與6大生產(chǎn)基地，在二十多個國家設(shè)有銷售及服務(wù)分支機構(gòu)，總部位于德國維茲拉(Wetzlar)。

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徠卡顯微系統(tǒng)(Leica Microsystems)是德國著名的光學(xué)制造企業(yè)。具有175年顯微鏡制造歷史，現(xiàn)主要生產(chǎn)顯微鏡, 用戶遍布世界各地。早期的“Leitz”顯微鏡和照相機深受用戶愛戴, 到1990年徠卡全部產(chǎn)品統(tǒng)一改為“Leica”商標。徠卡公司是集顯微鏡、圖像采集產(chǎn)品、圖像分析軟件三位一體的顯微鏡生產(chǎn)企業(yè)。

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