細胞狀態(tài)的好壞對實驗結果有著直接影響，而這一點對于膜片鉗實驗顯得尤為突出。膜片鉗實驗在封接、破膜過程中，對細胞膜表面的狀態(tài)有著較高的要求，因此有時膜片鉗實驗的成功與否可以直接認為是成也細胞狀態(tài)，敗也細胞狀態(tài)。細胞培養(yǎng)技術作為生命科學實驗技術的基礎，實驗操作本身并沒有多么復雜的流程和難點，但是為什么好多實驗人員還會為細胞狀態(tài)不好而煩惱呢？其實，除了細胞系本身的一些培養(yǎng)特點以外，細胞培養(yǎng)過程中的一些操作流程也有著很多的注意事項和小技巧。

       Sophion為提高QPatch和Qube膜片鉗系統(tǒng)的實驗成功率，在細胞培養(yǎng)方面做了一系列的優(yōu)化，而這些小技巧同樣適用于手動膜片鉗系統(tǒng)細胞的培養(yǎng)。本文從細胞復蘇、傳代、消化、凍存以及其他操作過程中一些需要注意的微小細節(jié)出發(fā)，介紹了如何提升細胞培養(yǎng)狀態(tài)，幫助提高膜片鉗實驗的成功率。

細胞復蘇和培養(yǎng)

       在復蘇新的細胞株時，我們推薦在開始時先將凍存管中的細胞轉移到T75培養(yǎng)瓶進行培養(yǎng)。當然，如果已知復蘇的細胞株是生長緩慢的細胞時，也可以使用T25培養(yǎng)瓶。需要注意的是，在這一過程中一定要盡可能快的解凍細胞，一般是在37°C 水浴鍋中進行，嚴格遵循慢凍快融的原則。在復蘇過程中要做好無菌操作，盡可能避免觸碰凍存管蓋子接口，避免造成污染。在細胞長到80%時進行傳代。

細胞的消化

       細胞消化對制備膜片鉗細胞樣本而言尤為重要。消化不到位，細胞容易成團，無法制備出好的單細胞懸浮液，而消化太過，則會導致細胞膜表面的結構被破壞，這會嚴重影響后續(xù)細胞的封接、破膜。在細胞消化時，我們推薦在細胞生長到80%時，使用無鎂鈣離子的PBS沖洗兩次，然后加入消化酶，在培養(yǎng)瓶中加入的消化酶量Z好把細胞層完全覆蓋稍有多余，不宜在培養(yǎng)瓶中加入太多的消化酶，避免過度消化。加入消化酶后，Z好在37°C培養(yǎng)箱中進行消化，要隨時關注細胞的消化狀態(tài)，終止消化時要加入足夠的完全培養(yǎng)液，防止過度消化。

       消化酶的使用并不是唯一固定的，根據(jù)細胞的生長特性，每種細胞都有其更加適合的消化酶。例如，Trypsin的消化作用更強，消化速度更快，對一些細胞膜強壯且貼壁生長較緊密的細胞系消化效果非常好；Detachin消化作用較為柔和，消化速度較慢，且不容易破壞細胞膜表面，對一些比較嬌弱的細胞很友好。消化酶的選擇在實驗過程中十分重要的，更多細節(jié)的描述可以從下文的應用報告中獲得。

培養(yǎng)箱

       培養(yǎng)箱的管理是細胞培養(yǎng)過程中很容易被忽略的一環(huán)。溫度的穩(wěn)定性是維持細胞穩(wěn)定生長的關鍵。很多實驗室的細胞培養(yǎng)箱是公共使用的，操作人員眾多導致細胞培養(yǎng)箱門頻繁開關，這使得培養(yǎng)箱的內(nèi)部環(huán)境一直在發(fā)生變化，細胞生長的狀態(tài)受到了嚴重的影響。除此之外，頻繁的與外界環(huán)境接觸也容易導致細胞的污染。因此，我們建議有條件的實驗室，把實驗用細胞和傳代保種細胞分開進行培養(yǎng)，保持培養(yǎng)箱的潔凈，減少外界環(huán)境對細胞的影響。

細胞凍存

       大部分的細胞在培養(yǎng)一定的時間段后，會喪失它的一些表達特征，因此我們要對細胞即時進行凍存。細胞在凍存時一定要按該細胞凍存指南配置合適無菌的凍存液，其細胞的密度，體積都應當注意，細胞密度要合適，體積不易太多，包括凍存管的質(zhì)量也要進行確認，避免復蘇時凍存管炸裂?，F(xiàn)在大部實驗室使用凍存盒進行細胞凍存，要注意及時將凍存盒里的細胞轉移到液氮罐中。

       以上是，Sophion在細胞培養(yǎng)方面的一些小技巧，更詳細的內(nèi)容，例如傳代細胞密度等，大家可以閱讀下方的應用報告。針對一些特殊的穩(wěn)轉細胞的特殊處理培養(yǎng)方式，Sophion也做了大量的工作，有需要的小伙伴也可以通過官網(wǎng)或者發(fā)郵件獲得相關的資料。