1.5.由于目前的色譜柱性能優(yōu)良,因此極不可能出現(xiàn)伸舌峰(伸舌峰的現(xiàn)象隨著現(xiàn)今柱填充技術(shù)的提高已相當(dāng)少見)。
伸舌峰一般是由柱過載或柱結(jié)構(gòu)塌陷導(dǎo)致的(發(fā)生伸舌峰的一個原因是色譜柱內(nèi)發(fā)生溝流或色譜柱結(jié)構(gòu)的坍塌)。
如果在制造商推薦的條件下使用色譜柱,這種情況則很少發(fā)生。
大多數(shù)硅膠柱在pH2-8的范圍內(nèi)可以保持穩(wěn)定。
pH低于2時,鍵合相會發(fā)生水解;pH高于8時,硅膠會溶解。
如果(如果您需要)在此pH范圍以外使用(操作)HPLC系統(tǒng),請確保選擇在選定條件下會保持穩(wěn)定的色譜柱。
圖5顯示了因柱過載(色譜柱發(fā)生溝流)導(dǎo)致的伸舌峰。
圖5a中顯示了正常的峰值形(峰形);在大約500次注射(進樣)后,觀察到伸舌峰(圖5b)。
使用這種方法便會出現(xiàn)這種變化,并且在每次運行的過程中會經(jīng)常出現(xiàn)(這種改變是該方法所特有,經(jīng)常在前一次分析結(jié)束后,下一次分析開始時突然發(fā)生)。
出現(xiàn)伸舌峰后,**有效的解決辦法就是更換色譜柱。
該柱為100x2.1mm(直徑(內(nèi)徑)),色譜柱填充5mC18顆粒(柱內(nèi)填充5μm 粒徑的C18填料) 。流動相A是10mM碳酸氫銨(pH9.0) ; B是甲醇(MeOH)。
該方法包括5%B等度洗脫段,接下來是80%B的沖洗(然后用80%B淋洗)。
這種特殊的色譜柱可專門用于高達100%的水流動相,且無封端。
當(dāng)流動相pH值升高時,封端可保護硅膠免于溶解。
在這種情況下,所使用的色譜柱流動相pH應(yīng)遠高于推薦的范圍,并且無需保護性封端。硅膠在pH為9時會逐漸溶解,直到柱床結(jié)構(gòu)不再穩(wěn)定,并且柱床會發(fā)生移動,
產(chǎn)生空隙(塌陷)或通道,而這又會導(dǎo)致圖5b伸舌峰的形成。
可以使用較低的流動相pH或采用在較高pH下能夠保持穩(wěn)定狀態(tài)的色譜柱,以避免這一問題(避免這一問題)。
圖5. 過載導(dǎo)致的伸舌峰。(a)正常的峰形;(b)伸舌峰。來源[2]。
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