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Nature Plants:瑞孚迪AlphaScreen如何為植物“保鮮”,延長(zhǎng)花期?

來(lái)源:珀金埃爾默醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品(上海)有限公司 更新時(shí)間:2024-12-24 20:45:12 閱讀量:142
導(dǎo)讀:Nature Plants:瑞孚迪AlphaScreen如何為植物“保鮮”,延長(zhǎng)花期?


在園藝和植物科學(xué)領(lǐng)域,延長(zhǎng)花卉的花期一直是研究的熱點(diǎn)和挑戰(zhàn)。近期,一項(xiàng)關(guān)于日本牽?;ɑㄆ谘娱L(zhǎng)的研究引起了廣泛關(guān)注。研究團(tuán)隊(duì)使用AlphaScreen技術(shù)建立了一個(gè)高通量篩選系統(tǒng),對(duì)一個(gè)包含9,600種化合物的文庫(kù)進(jìn)行了篩選,以尋找能夠抑制EPH1-DNA相互作用的化合物,通過(guò)篩選成功地發(fā)現(xiàn)了兩種抑制花瓣衰老的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子EPH1的DNA結(jié)合活性的化合物,從而顯著延長(zhǎng)了花卉的花期。



EPH1是一個(gè)NAM/ATAF1,2/CUC2(NAC)轉(zhuǎn)錄因子,是花瓣衰老過(guò)程中的關(guān)鍵調(diào)控因子,對(duì)花瓣衰老過(guò)程中的程序性細(xì)胞死亡(PCD)起著關(guān)鍵作用。


研究人員首先合成了帶有C末端AGIA標(biāo)簽的EPH1蛋白,并確定了EPH1與其靶標(biāo)DNA(VPE序列)的結(jié)合。通過(guò)AlphaScreen技術(shù),他們檢測(cè)到了EPH1與VPE DNA之間的強(qiáng)烈信號(hào),而與突變的VPE DNA(mVPE)的結(jié)合則產(chǎn)生了很低的信號(hào),表明該系統(tǒng)能夠有效地檢測(cè)EPH1與特定DNA序列的相互作用。


圖1:EPH1與DNA相互作用的高通量分析系統(tǒng)的建立以及EPH1抑制劑的篩選流程。使用AlphaScreen技術(shù),用于檢測(cè)使用AGIA標(biāo)記的EPH1蛋白與生物素標(biāo)記的其靶標(biāo)DNA之間的作用。


接著,研究人員利用這一系統(tǒng)對(duì)一個(gè)包含9,600種化合物的文庫(kù)進(jìn)行了篩選,以尋找能夠抑制EPH1-DNA相互作用的化合物。他們發(fā)現(xiàn)了Everlastin1和Everlastin2,這些化合物能夠抑制EPH1與DNA的結(jié)合,并顯著延遲花瓣的衰老。通過(guò)進(jìn)一步的分析,研究人員發(fā)現(xiàn)這些化合物通過(guò)抑制EPH1的二聚化來(lái)發(fā)揮作用,從而阻止了EPH1與DNA的結(jié)合。


圖2:第一輪篩選中得到的化合物結(jié)果:G1、G2和G3類似物的抑制EPH1-DNA相互作用活性的測(cè)試結(jié)果,化合物對(duì)花瓣衰老的影響,以及它們對(duì)花瓣蛋白含量的影響。


圖3:AlphaScreen技術(shù)檢測(cè)Everlastin1和Everlastin2對(duì)EPH1與DNA相互作用及對(duì)EPH1蛋白二聚化的影響的影響:EPH1全長(zhǎng)蛋白(EPH1-FL)與VPE DNA的相互作用的影響,EPH1 DNA結(jié)合域(EPH1-DBD)與VPE DNA的相互作用的影響。


通過(guò)RNA測(cè)序分析顯示,這些化合物的處理強(qiáng)烈抑制了與程序性細(xì)胞死亡和自噬相關(guān)的基因表達(dá)。這些結(jié)果表明,針對(duì)轉(zhuǎn)錄因子的化學(xué)方法可以調(diào)節(jié)花瓣衰老,為延長(zhǎng)觀賞植物的花期提供了新的化學(xué)策略。


圖4:Everlastin1和Everlastin2處理的花瓣的染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)和轉(zhuǎn)錄組分析:使用抗EPH1抗體進(jìn)行的ChIP-qPCR分析,以及Everlastin1處理對(duì)基因表達(dá)的影響。


研究人員通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)和生物測(cè)定,進(jìn)一步證實(shí)Everlastin1和Everlastin2處理能夠延遲花瓣衰老的進(jìn)程,驗(yàn)證了這些化合物在延遲花瓣衰老方面的效果,這一發(fā)現(xiàn)不僅為理解植物花瓣衰老的分子機(jī)制提供了新的見(jiàn)解,而且為開(kāi)發(fā)延長(zhǎng)觀賞植物花期的化學(xué)制劑提供了可能。


圖5:Everlastin1和Everlastin2對(duì)花瓣衰老的影響。圖中展示了這些化合物對(duì)花瓣可見(jiàn)衰老的時(shí)間進(jìn)程、蛋白含量、DNA降解以及花瓣面積的影響。


進(jìn)一步分析與應(yīng)用:研究還探討了這些化合物可能對(duì)其他轉(zhuǎn)錄因子(如NAC TFs)的影響,并提出了進(jìn)一步研究這些基因以增強(qiáng)對(duì)花瓣衰老分子機(jī)制的理解。此外,研究團(tuán)隊(duì)還考慮了這些化合物可能對(duì)其他轉(zhuǎn)錄因子和/或過(guò)程的影響及其在農(nóng)業(yè)和園藝領(lǐng)域?qū)嶋H應(yīng)用中的潛力,如通過(guò)噴灑或浸泡處理來(lái)延長(zhǎng)盆栽或切花的花期。

 

在這項(xiàng)研究中,瑞孚迪()公司的先進(jìn)技術(shù)和儀器發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。


瑞孚迪的高通量篩選系統(tǒng)



利用Envision多功能酶標(biāo)儀搭配AlphaScreen技術(shù)檢測(cè)。

Flexdrop納升級(jí)分液器用于384孔AlphaPlate液體分配。


研究團(tuán)隊(duì)利用瑞孚迪的高通量篩選系統(tǒng),對(duì)9,600種合成的化合物進(jìn)行了篩選,尋找到了目標(biāo)化合物。瑞孚迪高通量篩選系統(tǒng)的高效性和精確性為研究提供了強(qiáng)有力的支持,確保了篩選過(guò)程的準(zhǔn)確性和可靠性。通過(guò)這一系統(tǒng),研究團(tuán)隊(duì)成功地識(shí)別出了能夠顯著延遲花瓣衰老的化合物,為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。


關(guān)于Envision多功能酶標(biāo)儀



更快的速度、通量和靈敏度


EnVision多模式微孔板檢測(cè)儀具有更快的速度、更高通量和所有檢測(cè)技術(shù)中的上佳靈敏度。作為高通量篩選的金標(biāo)準(zhǔn),EnVision微孔板檢測(cè)儀以更高靈敏度和通量,始終如一地為您提供強(qiáng)大的檢測(cè)性能和穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)。


集多項(xiàng)成熟技術(shù)于一身


標(biāo)準(zhǔn)EnVision系統(tǒng)可檢測(cè)所有傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù):

吸光度

熒光強(qiáng)度

化學(xué)發(fā)光,包括輝光型化學(xué)發(fā)光、閃光性化學(xué)發(fā)光和雙報(bào)告基因化學(xué)發(fā)光

時(shí)間分辨熒光(TRF)和TR-FRET,包括我們的DELFIA、LANCE和LANCE Ultra技術(shù),以及HTRF?和LanthaScreen?

熒光偏振


提高性能、容量和通量


我們的 AlphaScreen和AlphaLISA激光檢測(cè)

技術(shù),包括 AlphaPlex

超靈敏化學(xué)發(fā)光

TRF激光檢測(cè)模塊

四光柵模塊

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關(guān)于AlphaScreen技術(shù)



在確認(rèn)化合物活性時(shí),AlphaScreen技術(shù)在這項(xiàng)研究中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。這一技術(shù)能夠精確檢測(cè)化合物對(duì)EPH1與DNA相互作用的影響,確保篩選結(jié)果的準(zhǔn)確性。AlphaScreen技術(shù)是一種基于微珠的非放射性檢測(cè)方法,它具有多種優(yōu)勢(shì),在蛋白質(zhì)相互作用檢測(cè)領(lǐng)域中比其他技術(shù)更為有效和方便:


高靈敏度:AlphaScreen技術(shù)利用供體和受體珠子之間的近距離相互作用產(chǎn)生信號(hào),這種相互作用可以在非常低的濃度下檢測(cè)到,因此具有很高的靈敏度。

高通量:可以在微孔板格式中進(jìn)行,因此適合自動(dòng)化和高通量篩選,這對(duì)于藥物發(fā)現(xiàn)和化合物庫(kù)篩選尤為便利高效。

寬動(dòng)態(tài)范圍:檢測(cè)從皮摩爾到微摩爾范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)濃度,這使得它能夠適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)條件和樣品濃度。

高數(shù)據(jù)質(zhì)量:利用時(shí)間分辨檢測(cè)來(lái)區(qū)分特異性信號(hào)和背景信號(hào),這有助于提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。

適用性廣泛:可檢測(cè)多種類型的分子相互作用,包括蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-小分子等,樣本包括細(xì)胞裂解物、血清、血漿、體液等生物學(xué)粗提取,而不會(huì)影響測(cè)讀效果,這使得它在生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究及藥物研發(fā)領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用。

高度靈活性:可以與各種生物分子標(biāo)簽兼容,如生物素、鏈霉親和素、抗體等,這增加了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的靈活性。

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關(guān)于FlexDrop納升級(jí)分液系統(tǒng)



在文中提到的高通量篩選中,使用了瑞孚迪公司的FlexDrop儀器來(lái)分配試劑,將蛋白、抗體及微珠等精確地分配到384孔AlphaPlate中,以進(jìn)行高通量篩選。


FlexDrop的使用大大提高了篩選過(guò)程的自動(dòng)化程度,確保了試劑分配的精確性和重復(fù)性,這對(duì)于高通量篩選實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。研究人員能夠高效地測(cè)試大量候選化合物,以尋找潛在的EPH1-DNA相互作用抑制劑。


FlexDrop特點(diǎn)及應(yīng)用:


96源孔+獨(dú)立控制的8正壓通道

精準(zhǔn)分液,每個(gè)脈沖產(chǎn)生一個(gè)8-50 nL微滴

內(nèi)置微滴檢測(cè)系統(tǒng),每個(gè)微滴計(jì)數(shù)和監(jiān)測(cè)

死體積<1 uL,減少試劑浪費(fèi)


FlexDrop在多領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用:


基因組學(xué)及蛋白組學(xué),藥物篩選,試劑開(kāi)發(fā),NGS文庫(kù)制備,PCR體系構(gòu)建,化合物分配,細(xì)胞分液,高通量篩選,免疫分析,昂貴試劑的加液…

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參考文獻(xiàn)


1、Kenichi Shibuya,et al.A chemical approach to extend flower longevity of Japanese morning glory via inhibition of master senescence regulator EPHEMERAL1。Nature Plants。10 , 1377–1388,(2024).

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