1.背景介紹
細胞異質(zhì)性廣泛存在,制約干細胞療法在再生醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)療領(lǐng)域更大應(yīng)用。單細胞分離與收集技術(shù)是解決異質(zhì)性問題的關(guān)鍵一環(huán),探索無損傷、高效高通量單細胞分離與收集技術(shù),愈發(fā)受到科學(xué)家們重視。
圖1 單細胞分離示意
傳統(tǒng)的流式細胞分選技術(shù)需要進行熒光標記預(yù)處理,耗時效率低下且影響細胞功能。常見的微流控分選技術(shù)如液滴微流控,將單個細胞包裹后置于液滴內(nèi),但根據(jù)泊松分布,單細胞捕獲效率不高,且包裹后微液滴位置不固定,無法實時觀測。
來自中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)的研發(fā)團隊基于將實時細胞識別和微流體沖擊打印結(jié)合的原理,設(shè)計一套單細胞分離系統(tǒng),實現(xiàn)無標記、高效率、實時識別、高通量地分離單細胞。
此套單細胞分離系統(tǒng)由信號控制模塊、圖像處理模塊和打印模塊三大部分構(gòu)成,詳見圖2所示。
圖2 中國科大研發(fā)的單細胞分離系統(tǒng)構(gòu)成原理
壓力泵作用下,細胞懸液從微通道入口輸送到出口,千眼狼高速攝像機搭載倒置顯微鏡,對焦微通道中間觀測平面,以2620幀/秒速度捕獲細胞灰度圖像,并實時對圖像進行背景提取、高斯去噪、閾值分割處理后,識別并優(yōu)化二維細胞位置,然后發(fā)送觸發(fā)信號至信號控制模塊,觸發(fā)壓電致動器沖擊打印室上的柔性薄膜,使包含已識別細胞的液滴從噴嘴噴射到基底上。
圖3 高速攝像機拍攝的微流體沖擊打印過程
微流體沖擊打印過程中,受流體動力學(xué)反應(yīng)影響,細胞在液滴噴射過程中可能會出現(xiàn)橫向移動、前向移動,影響可靠性,需要用高速攝像機在5×物鏡下捕獲細胞運動的瞬態(tài)圖像,如圖4、圖5所示,以探尋決定細胞噴射及印刷效率的因素。
圖4 高速攝像機拍攝的微流體沖擊打印過程
圖5 高速攝像機拍攝的微流體沖擊打印過程
3.研究結(jié)論
該技術(shù)將在新興的生物組織打印、腫瘤分型、藥物篩選、化學(xué)結(jié)晶、基因分析等多個生化領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用前景。觀測儀器高速攝像機在單細胞分離階段對細胞運動瞬態(tài)圖像捕獲以及及微流體沖擊過程中的流體動力學(xué)反應(yīng)機理研究上發(fā)揮著重要作用。(文章摘自:Yiming Wang, Xiaojie Wang, Tingrui Pana , Baoqing Li, Jiaru Chua,《Label-Free Single-Cell Isolation Enabled by Microfluidic Impact Printing and Real-Time Cellular Recognition》)。
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