近年，高通量測(cè)序技術(shù)不斷發(fā)展，已經(jīng)成為生命科學(xué)研究以及臨床診斷中不可或缺的研究手段和診斷標(biāo)準(zhǔn)。隨之而來的是樣本量的不斷增加的問題，這給高通量測(cè)序建庫帶來更大挑戰(zhàn)，更高效、更穩(wěn)定、更便捷成為高通量測(cè)序建庫的新要求。在每天需要操作上百個(gè)樣本建庫的場(chǎng)景，自動(dòng)化建庫成為了更優(yōu)的選擇。自動(dòng)化建庫可以解放雙手，減少不同實(shí)驗(yàn)員操作引入的誤差。

翌圣生物為提升廣大高通量測(cè)序使用者的體驗(yàn)，一直積極在高通量測(cè)序技術(shù)領(lǐng)域深耕發(fā)展。本次翌圣生物聯(lián)合華大智造為大家?guī)砀咝Х€(wěn)定便捷的自動(dòng)化建庫體驗(yàn)。

翌圣生物主打的NGS文庫構(gòu)建產(chǎn)品均進(jìn)行了自動(dòng)化適配，在保證穩(wěn)定性與高產(chǎn)量的同時(shí)，擁抱自動(dòng)化設(shè)備帶來的高效與便捷。第一彈是介紹翌圣生物RNA建庫試劑盒與MGISP-960高通量自動(dòng)化樣本制備系統(tǒng)的自動(dòng)化適配方案。

在自動(dòng)化建庫的整個(gè)流程中，前期的試劑準(zhǔn)備仍然需要人工參與，耗時(shí)較長且易出錯(cuò)。為了解決這個(gè)問題，翌圣生物推出了預(yù)混版RNA建庫試劑盒Hieff NGS^® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit (Premixed version) （Cat#12310ES）。

圖1. 非預(yù)混版RNA建庫試劑盒（Cat#12308ES）與預(yù)混版RNA建庫試劑盒（Cat#12310ES）的試劑組成對(duì)比

原來所需的6種試劑在預(yù)混版中精簡為3種，在保證試劑效果與穩(wěn)定性的情況下，省略了前期試劑準(zhǔn)備需要的步驟，也減少了需要自動(dòng)化建庫設(shè)備分裝混勻的步驟，使流程所需的時(shí)間減少，同時(shí)也降低了混勻不均的風(fēng)險(xiǎn)。

我們對(duì)預(yù)混版RNA建庫試劑盒（Cat#12310）進(jìn)行了MGISP-960高通量自動(dòng)化樣本制備系統(tǒng)自動(dòng)化建庫的測(cè)試；前期mRNA捕獲使用的是Hieff NGS^® mRNA Isolation Master Kit (Cat#12603ES)，磁珠純化與分選使用的是Hieff NGS^® DNA  Selection Beads (Cat#12601ES)。

在MGISP-960平臺(tái)上使用翌圣生物RNA建庫試劑盒（Cat#12310）對(duì)Illumina和MGI測(cè)序平臺(tái)文庫進(jìn)行建庫，文庫產(chǎn)量可滿足后續(xù)測(cè)序需求。

圖2,3. MGISP-960自動(dòng)化平臺(tái)構(gòu)建lllumina和MGI測(cè)序平臺(tái)文庫與手工建庫比較的產(chǎn)出表現(xiàn)

在MGISP-960平臺(tái)上使用翌圣生物RNA建庫試劑盒（Cat#12310）對(duì)Illumina和MGI測(cè)序平臺(tái)文庫進(jìn)行建庫，文庫片段集中，峰型一致，大小相近。

圖4,5. MGISP-960平臺(tái)自動(dòng)化構(gòu)建Illumina和MGI測(cè)序平臺(tái)文庫峰型展示

在MGISP-960平臺(tái)上使用翌圣生物RNA建庫試劑盒（Cat#12310）對(duì)Illumina和MGI測(cè)序平臺(tái)文庫進(jìn)行建庫，在測(cè)序結(jié)果中表現(xiàn)基本一致。

1.在雙平臺(tái)測(cè)序結(jié)果中，自動(dòng)化文庫與手動(dòng)文庫基因覆蓋度基本一致，保持了較高水平。

圖6,7. MGISP-960平臺(tái)自動(dòng)化構(gòu)建Illumina和MGI測(cè)序平臺(tái)文庫與手動(dòng)建庫文庫基因覆蓋度比較

2.在雙平臺(tái)測(cè)序結(jié)果中，自動(dòng)化文庫與手動(dòng)文庫測(cè)序結(jié)果有較強(qiáng)的一致性。

圖8,9. MGISP-960平臺(tái)自動(dòng)化構(gòu)建Illumina和MGI測(cè)序平臺(tái)文庫與手動(dòng)建庫文庫測(cè)序結(jié)果相關(guān)性展示

3.在雙平臺(tái)測(cè)序結(jié)果中，自動(dòng)化文庫與手動(dòng)文庫結(jié)果中rRNA占比均小于1%，都有很高的mRNA捕獲效率；Antisense均大于98%，展現(xiàn)了較好的鏈特異性。

表1. MGISP-960平臺(tái)自動(dòng)化構(gòu)建Illumina測(cè)序平臺(tái)文庫與手動(dòng)建庫文庫測(cè)序結(jié)果部分指標(biāo)展示

表2. MGISP-960平臺(tái)自動(dòng)化構(gòu)建MGI測(cè)序平臺(tái)文庫與手動(dòng)構(gòu)建文庫測(cè)序結(jié)果部分指標(biāo)展示

使用MGISP-960平臺(tái)進(jìn)行自動(dòng)化建庫可以顯著減少建庫中需要人工操作的時(shí)間，同時(shí)整個(gè)流程的時(shí)間也大大縮短。

圖10. MGISP-960平臺(tái)自動(dòng)化建庫與手動(dòng)建庫所需時(shí)間比較

結(jié)果顯示，翌圣生物RNA建庫試劑盒與華大智造MGISP-960平臺(tái)完美適配，在節(jié)約時(shí)間以及人工成本的同時(shí)帶來穩(wěn)定的建庫體驗(yàn)。

翌圣生物攜手華大智造聯(lián)合推出翌圣-MGI聯(lián)合品牌MGISP-960高通量自動(dòng)化樣本制備系統(tǒng)。

華大智造MGISP-960高通量自動(dòng)化建庫平臺(tái)可同時(shí)對(duì)96例樣本進(jìn)行自動(dòng)化建庫，完美適用于高通量、交付型實(shí)驗(yàn)室，在大幅度解放實(shí)驗(yàn)室人力的同時(shí)，減少人工操作對(duì)實(shí)驗(yàn)造成的影響，提高文庫制備穩(wěn)定性。