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值此金秋，第40個(gè)教師節(jié)如期而至，祝各行各業(yè)的“老師們”節(jié)日快樂。提到實(shí)驗(yàn)室級(jí)別預(yù)裝柱的柱型，今天也考考各位老師，您見過哪幾種？能認(rèn)出哪幾種？

一些資深用戶可能還用過下面這幾種：

以上展示了部分常見的預(yù)裝柱類型。預(yù)裝柱的出現(xiàn)節(jié)約了實(shí)驗(yàn)人員自行裝柱的時(shí)間，同時(shí)保證了裝填和分離效果。填料根據(jù)自身特點(diǎn)和應(yīng)用需求被裝填到不同柱型中以發(fā)揮功能，例如凝膠過濾填料會(huì)被裝填到較長(zhǎng)的柱中，親和類填料會(huì)被裝填到較矮的柱中，粒徑小且運(yùn)行壓力較大的填料會(huì)被裝填到耐高壓的PEEK柱、玻璃柱或鋼柱中。

圖④為HiPrep系列預(yù)裝柱，該系列預(yù)裝柱體積較大，可實(shí)現(xiàn)更大體積樣品的純化，柱體積有20 mL、53 mL、120 mL。

代表產(chǎn)品：HiPrep desalting脫鹽柱53 mL，HiPrep S-300凝膠過濾柱120 mL。

圖⑧是ST系列預(yù)裝柱，ST是steel的縮寫，即不銹鋼材質(zhì)預(yù)裝柱，該柱型裝填的是反向?qū)游龅奶盍?。Precision columns 3.2/300系列凝膠過濾預(yù)裝柱用于微量組分的高分辨率分離。RoboColumn系列預(yù)裝柱用于移液工作站等機(jī)器進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)條件的篩選或者動(dòng)態(tài)結(jié)合載量的研究。

HiTrap系列預(yù)裝柱發(fā)布于1991年，老款HiTrap預(yù)裝柱為M6接口，2004年對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行升級(jí)改造，層析柱上下兩端均改為更細(xì)的1/16" (valco) 接口，1/16"接口可以更好的適配純化系統(tǒng)，并且提高了層析柱和?KTA層析系統(tǒng)連接時(shí)的密封性。層析柱表面印有產(chǎn)品名稱，背面印有批次號(hào)和效期。為用戶提供更佳的使用體驗(yàn)。

HiTrap柱殼材質(zhì)是聚丙烯 (PP) ，柱床高度2.5 cm，耐受壓力0.5 Mpa，柱體積為1 mL或者5 mL，層析柱內(nèi)上下兩端濾膜材質(zhì)是聚乙烯 (PE) ，具體參數(shù)如圖5所示：

HiTrap預(yù)裝柱種類繁多，覆蓋了親和層析、離子交換層析、疏水層析、多模式層析、樣品脫鹽及緩沖液置換。HiTrap預(yù)裝柱可以搭配層析系統(tǒng)、蠕動(dòng)泵，注射器來操作。HiTrap柱型適合做樣品的純化制備、結(jié)合測(cè)試以及層析實(shí)驗(yàn)條件的初步摸索。同時(shí)也提供HiTrap層析柱的組合套裝，方便客戶進(jìn)行層析結(jié)果的比較和篩選。

HiTrap系列為紙盒包裝，打開包裝盒后，包含對(duì)應(yīng)數(shù)量的層析柱，足夠數(shù)量的末端堵頭，魯爾接頭（一盒一個(gè)）。

新柱子使用前需要先將底端的密封塑料片直接掰斷，切記不要來回?cái)Q，擰容易導(dǎo)致出口端變形而造成出口堵塞，操作如圖8所示：

柱子頂端的黑色堵頭旋轉(zhuǎn)即可取下，此時(shí)層析柱就可以連入層析系統(tǒng)或者進(jìn)行手動(dòng)操作。

HiTrap在Cyitva工廠的裝填過程是用專門的設(shè)備將頂端柱頭壓入柱管內(nèi)，并不是手工裝填的，因此它不能被打開和重新裝填。我們也不單獨(dú)出售HiTrap的空柱和對(duì)應(yīng)的濾膜。小編試過把HiTrap暴力拆開，重新裝填的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)頂端適配器很難再次完全卡緊，很容易漏液，另外填料裝填效果很差。

HiTrap柱可以進(jìn)行串聯(lián)使用，需要注意串聯(lián)后的壓力問題（尤其是裝填了小粒徑填料的HiTrap柱，盡量減少過多的串聯(lián)），防止因超壓而造成頂端那根HiTrap柱子嚴(yán)重受損。

對(duì)注射器沒有特殊要求，市售的注射器均可。流速和液滴數(shù)的對(duì)應(yīng)關(guān)系如下圖所示：

HiTrap無法進(jìn)行重力操作，只能搭配層析系統(tǒng)、蠕動(dòng)泵、注射器來使用。

HiTrap不適合搭配高壓液相系統(tǒng)，另外盡量避免使用金屬接頭進(jìn)行連接，金屬接頭有可能會(huì)破壞柱子接頭的螺紋（特別是層析柱的內(nèi)螺紋）。

先保證儀器空白運(yùn)行時(shí)壓力沒有問題。檢查層析柱下端出口的孔是否有堵塞的跡象。如果新柱子下端封口處是扭斷的，或者柱出口連接到接頭或閥門時(shí)過度用力，導(dǎo)致孔被擠壓的變小，造成相同流速下壓力更高。此時(shí)需要對(duì)柱下端出口小孔進(jìn)行疏通，另外連入層析系統(tǒng)時(shí)不要把層析柱擰的過緊。

沒有具體測(cè)定過HiTrap色譜柱的外水體積，但大致是色譜柱體積的1/3（HiTrap 1mL為0.33mL，HiTrap 5mL為1.67mL）。

根據(jù)填料的性質(zhì)，選擇合適的緩沖液沖柱子，將氣泡沖出去即可。

只要層析柱不堵塞或污染，則可以重復(fù)使用。使用次數(shù)根據(jù)樣品的純化度、添加樣品量、清洗情況而不同（舉例：如果用0.5M氫氧化鈉清洗GST的柱子，會(huì)造成GST柱子后續(xù)完全不能使用。鏈霉親和素的填料用pH=1.5的酸性buffer進(jìn)行洗脫也會(huì)造成不可逆的損傷）。使用次數(shù)可根據(jù)純化蛋白質(zhì)的產(chǎn)量降低、純度降低、色譜柱的壓力上升等情況來判斷。

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