夏天無為罌粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens（Thunb.）Pers的干燥塊莖。春季或初夏出苗后采挖，除去莖、葉及須莖，洗凈，干燥。夏天無粉味苦、微辛，性溫。歸肝經(jīng)。主要功效為HX止痛，舒經(jīng)活絡(luò)，祛風(fēng)除濕。用于中風(fēng)偏癱，頭痛，跌撲損傷，風(fēng)濕痹痛，腰腿疼痛。

1、方法原理

參照《中華人民共和國藥典 2020版》中夏天無，原阿 片堿和鹽酸巴馬汀為目標(biāo)物，其中，原阿 片堿的檢測(cè)波長為289nm，鹽酸巴馬汀的檢測(cè)波長為345nm。以原阿 片堿和鹽酸巴馬汀標(biāo)準(zhǔn)溶液定性，處理后的樣品經(jīng)色譜柱分離，峰面積外標(biāo)法定量。

2、主要儀器和試劑

a.GX液相色譜儀：LC220，具變波長功能；

b.萬分之一天平；

c.蒸發(fā)回流裝置及實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器；

d.原阿 片堿和鹽酸巴馬汀標(biāo)準(zhǔn)品。

3、實(shí)驗(yàn)方法

3. 1 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈:三乙胺醋酸溶液（4mL三乙胺+15mL醋酸→500mL）=25:75；

色譜柱：C18反相柱，250mm*4.6mm*5μm；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10μL；

波長：0~10min：289nm，10~15min：345nm，15~16min：289nm。

3.2 對(duì)照品溶液制備

準(zhǔn)確稱取原阿 片堿對(duì)照品10mg于50mL容量瓶中，加1%鹽酸溶液5mL溶解，再加甲醇至刻度，搖勻。另準(zhǔn)確稱取鹽酸巴馬汀對(duì)照品10mg于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各5mL于同一25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得40ppm原阿 片堿和20ppm鹽酸巴馬汀標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3.3 供試品溶液制備

準(zhǔn)確稱取夏天無粉0.5g于具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入甲醇50mL，稱定重量。加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 儀器穩(wěn)定性

圖1 標(biāo)樣7針重復(fù)性測(cè)試

原阿 片堿7針重復(fù)性：RSD=0.86%

鹽酸巴馬汀7針重復(fù)性：RSD=0.47%

4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)照譜圖

圖2 混標(biāo)譜圖

4.3 樣品譜圖

圖3 樣品譜圖

圖4 雙樣雙針

原阿 片堿RD₁%=0.11%，RD₂%=0.05%

鹽酸巴馬汀RD₁%=0.28%，RD₂%=0.37%

4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖5 原阿 片堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖6 鹽酸巴馬汀標(biāo)準(zhǔn)曲線

4.5 計(jì)算

a) 雙樣雙針法（若與藥典算法有出入請(qǐng)以藥典為準(zhǔn)）：

b)  標(biāo)準(zhǔn)曲線法