反相GX液相色譜法分析甲苯和聯(lián)苯 一目的要求 1． 理解反相GX液相色譜法的基本原理及影響組分保留值的因素 2． 學(xué)習(xí)用反相GX液相色譜法分析混合芳烴 3． 掌握HPLC 分析的定性定量方法 4． 理解流動(dòng)相組成對(duì)樣品組分保留時(shí)間的影響 二方法原理 用非極性的十八烷基鍵合固定相，多以甲醇-水或乙睛-水作為流動(dòng)相（極性流動(dòng)相），用以分離非極性或極性小的化合物，該方法是目前Z常用的反相液相色譜法 化學(xué)鍵合固定相是在薄殼型或全多孔硅膠微粒上，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)把有機(jī)分子鍵合到無(wú)機(jī)擔(dān)體表面其優(yōu)點(diǎn)是固定相表面更加均勻一致，能靈活的改變吸附劑表面性質(zhì)，提高選擇性，增強(qiáng)穩(wěn)定性，延長(zhǎng)柱的壽命反相鍵合相的保留機(jī)制是疏水效應(yīng)起主導(dǎo)作用，所以樣品組分的疏水性差異是分離的基礎(chǔ)對(duì)非離子型化合物，分子極性愈大，保留值愈??；對(duì)非極性化合物，分析表面積愈大，保留值愈大；在同系物中鏈愈長(zhǎng)苯環(huán)愈多，保留值愈大流動(dòng)相也影響被測(cè)組分的保留值，流動(dòng)相的表面張力愈小，保留值愈小在常用的溶劑中，以水的表面張力Zda，因此流動(dòng)相中水的含量減小，流動(dòng)相的表面張力下降，組分的保留值減小 本實(shí)驗(yàn)分離甲苯聯(lián)苯2 種芳烴的混合物，由于苯環(huán)個(gè)數(shù)或分子的表面積有顯著差別，因此在反相GX液相色譜中得到很好的分離用保留時(shí)間定性，根據(jù)峰面積標(biāo)準(zhǔn)工作曲線定量 三儀器與試劑 1．儀器： GX液相色譜儀，檢測(cè)器為二極 管陣列檢測(cè)器 10uL HPLC 微量進(jìn)樣注射器超聲波清洗器及玻璃器皿 2．試劑：甲苯聯(lián)苯甲醇等試劑均為A.R.級(jí)二次蒸餾水 標(biāo)準(zhǔn)混合儲(chǔ)備液：1.00mg/mL 甲苯聯(lián)苯的甲醇溶液 3．色譜條件： 色譜柱：Shimadzu VO-ODS（4.6×150mm）C18 分析柱 流動(dòng)相：A 液：水；B 液：甲醇用前用超聲波脫氣 UV-檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm 進(jìn)樣體積：10uL;流動(dòng)相流速：1.0mL/min 樣品：甲苯聯(lián)苯的混合甲醇溶液 四試驗(yàn)步驟 1．開啟色譜儀，先開啟泵在線脫氣機(jī)柱溫箱檢測(cè)器，再開啟系統(tǒng)控制器，Z后開啟電腦 2．雙擊CLASS-VP 軟件，雙擊PDA 檢測(cè)器，打開文件，設(shè)立新方法，設(shè)置流動(dòng)相A 液和B 液的比例為1：9，流動(dòng)相流量為1.0mL/min,柱溫為40，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，使其正常運(yùn)行 3．標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：分別移取0.1mL,0.3 mL, 0.5mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容各溶液的濃度分別為：0.010mg/mL, 0.030 mg/mL, 0.0500 mg/mL 4．標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制：分別注入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0uL,記錄色譜圖以峰面積對(duì)各組分的進(jìn)樣量繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 5．試樣的測(cè)定：注入樣品溶液10.0uL,記錄色譜圖，由工作曲線計(jì)算未知樣品中甲苯和聯(lián)苯的含量 6．改變流動(dòng)相的配比（1：9；0：10），觀察色譜峰保留時(shí)間的變化 7．改變柱溫（40，30），觀察色譜峰保留時(shí)間的變化 8．實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用甲醇沖洗色譜儀液路系統(tǒng)和注射器，然后按照與開機(jī)相反的順序關(guān)機(jī) 五結(jié)果處理 1.以峰面積對(duì)各組分的含量繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 2.根據(jù)保留時(shí)間進(jìn)行定性；對(duì)試樣各組分依據(jù)峰面積由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線求得各組分的含量 3.計(jì)算不同流動(dòng)相配比和柱溫條件下，兩峰的分離度 六注意事項(xiàng) 1.正確使用微量進(jìn)樣注射器，并保持其潔凈抽取試樣時(shí)，注射器內(nèi)部不得存留氣泡，針頭殘存液體要用濾紙吸干 2.吸取不同試液時(shí)，先用甲醇沖洗干凈，再用要抽取的試液抽洗3 次后，方能抽取進(jìn)樣使用完畢，須用甲醇抽洗干凈后存放 LC-600A 液相色譜儀 （食品行業(yè)-液相分析）LC600A LC600A液相色譜儀 KJT-300(500)氮?dú)淇找惑w機(jī) KJA-2L(5L)空氣發(fā)生器