以下是植物ACC合成酶(ACS)ELISA試劑盒的實驗使用說明：

　　BS-7993  植物ACC合成酶(ACS)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。預(yù)先包被植物ACC合成酶(ACS)抗體的微孔板中依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)溫育洗滌后，TMB底物在過氧化物酶催化下顯色(藍(lán)色→黃色)，顏色深淺與ACS含量呈正相關(guān)，通過450nm波長測定OD值計算濃度。

　　二、樣本處理

　　血清?：無熱原試管采集，避免細(xì)胞刺激，1000×g離心10分鐘分離;

　　血漿?：EDTA/檸檬酸鹽/肝素抗凝，3000×g離心30分鐘取上清;

　　細(xì)胞上清液?：3000×g離心10分鐘去除顆粒;

　　組織勻漿?：生理鹽水搗碎后離心取上清;

　　保存?：分裝凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

　　三、試劑盒組成

　　組分 規(guī)格 數(shù)量

　　30倍濃縮洗滌液 20ml 1瓶

　　酶標(biāo)試劑 6ml 1瓶

　　酶標(biāo)包被板 12孔×8條 1板

　　標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml 1瓶

　　顯色劑A/B液 各6ml 各1瓶

　　終止液 6ml 1瓶

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說明書梯度稀釋原倍標(biāo)準(zhǔn)品;

　　加樣?：

　　空白孔：不加樣品

　　標(biāo)準(zhǔn)孔：50μl標(biāo)準(zhǔn)品

　　樣本孔：40μl稀釋液+10μl樣本(5倍稀釋);

　　溫育?：37℃孵育30分鐘，封板膜覆蓋;

　　洗滌?：棄液后加滿洗滌液，靜置30秒重復(fù)5次，拍干;

　　顯色?：每孔加顯色劑A/B液各50μl，37℃避光顯色10分鐘;

　　終止?：每孔加50μl終止液;

　　檢測?：5分鐘內(nèi)于450nm讀取OD值。

　　五、注意事項

　　試劑盒保存于2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘;

　　濃縮洗滌液結(jié)晶需水浴加熱溶解;

　　結(jié)果計算時需乘以稀釋倍數(shù)(如5倍);

　　不同批號組分不可混用(洗滌液/終止液除外)。

　　六、自備器材

　　酶標(biāo)儀(450nm)

　　移液器(0.5-1000μL范圍)

　　37℃恒溫箱。

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