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ELISA結(jié)果高背景、非特異性、顯色淡、白板該怎么辦？！別著急，請(qǐng)看→

來源：吉爾森實(shí)驗(yàn)儀器（上海）有限公司 更新時(shí)間：2025-06-20 15:30:16 閱讀量：357
導(dǎo)讀：一些ELISA小技巧！

一支移液器，匠心傳家寶；告別腱鞘炎，精準(zhǔn)永流傳。

在生物實(shí)驗(yàn)室當(dāng)中，

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法）

是非常常見的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)操作！


它的用途包括：

檢測(cè)蛋白質(zhì)相互作用

（檢測(cè)目標(biāo)蛋白與抗體或配體的結(jié)合。）

細(xì)胞因子/炎癥因子的定量

（如IL-6、TNF-α等等。）

信號(hào)通路研究

（磷酸化蛋白或激酶活性的檢測(cè)。）


此外，ELISA技術(shù)還廣泛應(yīng)用于

臨床診斷、食品安全、農(nóng)業(yè)監(jiān)測(cè)及環(huán)境檢測(cè)等領(lǐng)域。


那么ELISA是如何做到的！

請(qǐng)繼續(xù)看↓


01、ELISA原理

1、ELISA簡(jiǎn)介


ELISA是一種利用抗原抗體的特異性反應(yīng)，結(jié)合酶對(duì)底物的催化作用，來檢測(cè)目標(biāo)物質(zhì)的含量的實(shí)驗(yàn)方法。

在免疫學(xué)和分子生物學(xué)中被廣泛的使用。

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2、ELISA過程原理

實(shí)

驗(yàn)

的

過

程

1、固定抗體：
      將捕獲抗體固定于微孔板底部。形成固相化結(jié)合界面，為后續(xù)目標(biāo)抗原的特異性捕獲提供結(jié)合位點(diǎn)。

2、樣本孵育與抗原結(jié)合：
      加入含待測(cè)抗原樣本，使目標(biāo)抗原與固相捕獲抗體特異性結(jié)合，形成“抗體-抗原”復(fù)合物。

3、洗滌去除游離組分：
      通過重復(fù)洗滌，移除未結(jié)合的雜質(zhì)，保留固相載體上的抗原-抗體復(fù)合物，降低實(shí)驗(yàn)失誤的風(fēng)險(xiǎn)。

4、加入檢測(cè)抗體:

檢測(cè)抗體也具有與抗原結(jié)會(huì)的能力，通常這種抗體與酶(例如辣根過氧化物酶)結(jié)合。

5、二次洗滌去除非結(jié)合物：

徹底洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，防止殘留酶在后續(xù)步驟中催化底物產(chǎn)生假陽(yáng)性信號(hào)。

6、酶-底物顯色反應(yīng)：

加入酶特異性底物，在避光條件下孵育。

酶催化底物產(chǎn)生顏色變化，顏色深度與抗原濃度成正比。

7、測(cè)定結(jié)果：

通過比色計(jì)或光譜儀測(cè)是顏色的強(qiáng)度來測(cè)定結(jié)果，從而確定樣品中抗原的含量，實(shí)現(xiàn)定量分析。

Gilson  Pipetman

總結(jié)

ELISA是一種常用的生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，其基本原理是利用捕獲抗體和檢測(cè)抗體的結(jié)合，像三明治一樣夾持目標(biāo)抗原。

隨后通過酸色反應(yīng)的方式對(duì)目標(biāo)抗原進(jìn)行檢測(cè)和定量，這種技術(shù)特別靈敏，極其微量的物質(zhì)都逃不過它的"法眼"。

ELISA為科研人員提供了一種有效且可靠的測(cè)定方法，是研究和診斷各種疾病好幫手。

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02、出現(xiàn)奇怪的結(jié)果怎么辦！

1、ELISA 高背景/非特異性染色

問題:終止后，整板結(jié)果顯現(xiàn)均一的黃色或淡黃色、或標(biāo)曲有線性但背景過高。

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2、出現(xiàn)白板

問題:顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無(wú)顏色，陽(yáng)性對(duì)照不顯色

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3、顏色顯色淡

問題:包括標(biāo)曲、樣本在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。

實(shí)

驗(yàn)

心

得

ELISA不僅需要細(xì)心規(guī)范的操作，還依賴于優(yōu)質(zhì)的試劑和良好精準(zhǔn)的儀器。

大部分的ELISA失敗源于操作失誤，其中移液偏差占主導(dǎo)（如移液不夠精準(zhǔn)，反復(fù)多次的機(jī)械移液更容易出現(xiàn)失誤）。

因此一把好用且精準(zhǔn)的移液器將直接影響ELISA結(jié)果的可靠性。

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03、Gilson為ELISA保駕護(hù)航


在ELISA實(shí)驗(yàn)中，移液操作的精準(zhǔn)性和重復(fù)性直接影響結(jié)果的可靠性和數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

Gilson作為全球液體處理技術(shù)的領(lǐng)導(dǎo)者，憑借超過50年的專業(yè)經(jīng)驗(yàn)，為您提供全線移液解決方案，助力ELISA實(shí)驗(yàn)高效、精準(zhǔn)完成！

1、精準(zhǔn)可靠，數(shù)據(jù)無(wú)憂

PIPETMAN? L多通道移液器具備齒軌架裝置， 設(shè)計(jì)精妙的活塞驅(qū)動(dòng)設(shè)計(jì)，保證各通道的均 一性，實(shí)現(xiàn)樣品的精準(zhǔn)分配。

1、8/12通道同步移液：一次操作完成整排加樣，避免單孔誤差。

2、0.5-1200μL黃金量程：完美覆蓋ELISA包被（100μL）、樣本添加（50-100μL）、酶標(biāo)抗體（100μL）等關(guān)鍵步驟。

      3、每通道活塞可單獨(dú)拆卸，便于維護(hù)和清潔。通道數(shù)字標(biāo)識(shí)，確保同一方向移液。

      4、套筒下端具凸環(huán)設(shè)計(jì)，減少摩擦及裝吸頭的用力，吸嘴適配性強(qiáng)。

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2、高效便捷，提升實(shí)驗(yàn)效率

PLATEMASTER?移液工作站

在ELISA實(shí)驗(yàn)中，移液操作的精準(zhǔn)性和效率直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性和可靠性。

Gilson的PLATEMASTER?移液工作站為您提供了一種快速、簡(jiǎn)單且高度可靠的解決方案，助您輕松應(yīng)對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)中的各種挑戰(zhàn)。

1、高通量

10 秒內(nèi)可裝填一塊 96 孔微孔板，384 孔微孔板的裝填僅需4步，在1分鐘內(nèi)完成。

可實(shí)現(xiàn)快速均勻地分配包被抗體或洗滌緩沖液。

2、操作簡(jiǎn)單、體積小且移液精準(zhǔn)

安裝便捷，尺寸300*450*400（單位mm），占用空間小。

無(wú)需編程、無(wú)需培訓(xùn)、無(wú)需插電，操作簡(jiǎn)單直觀的同時(shí)，保證精準(zhǔn)移取血清樣本、酶標(biāo)抗體等。

三步完成96孔微孔板的裝填 ：

  1. 裝載 Gilson 鉆石吸嘴。

  2. 吸取溶液。

  3. 將溶液轉(zhuǎn)移到所需的微孔板中。

3、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

當(dāng)使用 96 孔微孔板進(jìn)行酶促反應(yīng)或細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí)，實(shí)驗(yàn)進(jìn)程可以在同一時(shí)間開始或停止。

實(shí)現(xiàn)同步完成96孔或384孔板的終止液添加，確保數(shù)據(jù)一致性。

減少人為操作失誤的可能性，保證微孔板中每個(gè)孔移液的重復(fù)性。


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