CHO（中國倉鼠卵巢）細胞是生物制藥領域廣泛使用的宿主細胞系，憑借其穩(wěn)定表達外源蛋白、良好的轉(zhuǎn)染效率以及接近哺乳動物細胞的蛋白質(zhì)翻譯后修飾能力等優(yōu)勢，在單克隆抗體、重組蛋白藥物等多種生物制品的生產(chǎn)中發(fā)揮著關鍵作用。然而，在生物制品的生產(chǎn)過程中，即使采用嚴格的純化工藝，仍可能存在CHO殘留DNA，這些殘留DNA可能引發(fā)潛在的安全風險，如致瘤性、傳染性以及免疫源性等問題，因此對CHO殘留DNA的檢測和片段分析成為確保生物制品安全性及質(zhì)量可控性的重要環(huán)節(jié)。

世界衛(wèi)生組織（WHO）和各國藥物注冊監(jiān)管機構均對生物制品中外源宿主DNA殘留制定了相應的監(jiān)測和控制要求。美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）現(xiàn)行指導方針推薦成品中殘留DNA不高于10 ng/劑，對于生物制品宿主細胞DNA殘留DNA量上限為100 pg/劑。歐洲藥典通則規(guī)定生物制品殘留DNA度大多為不超過10 ng/劑。中國藥典2020年版三部也明確規(guī)定，以細胞基質(zhì)生產(chǎn)的生物制劑外源宿主細胞DNA殘留量不能超過100 pg/劑。

除需對DNA的殘留量進行嚴格控制外，殘留DNA片段大小分布同樣是確定其相關風險因素的重要指標。研究表明，一個功能基因至少在 200 bp 以上，因此大于 200 bp 的DNA片段有可能具有一定的致病性，而且殘留DNA片段越大，生物制品的風險等級越高。美國 FDA 在《Chemistry, Manufacturing, and Control (CMC) Information for Human Gene Therapy Investigational New Drug Applications (INDs)》行業(yè)指南中建議將非致瘤性連續(xù)細胞的殘留DNA量限制在 10 ng/劑以下，DNA 大小限制在約200 bp以下。

翌圣生物自主研發(fā)的CHO殘留DNA檢測和片段分析產(chǎn)品，為生物制品生產(chǎn)企業(yè)提供了高效、準確的CHO殘留DNA質(zhì)控解決方案。該產(chǎn)品采用先進的熒光探針 qPCR法原理，經(jīng)過精心設計和驗證，能夠滿足生物制藥行業(yè)對CHO殘留DNA檢測和片段分析的嚴格要求。

1、CHO殘留檢測試劑盒線性范圍為：3fg/μL~300pg/μL；CHO片段分析試劑盒（88 bp、115 bp、229 bp、505 bp）線性范圍均為30fg/μL~300pg/μL。

圖1.CHO擴增曲線線性圖譜（左）和88 bp片段擴增曲線線性圖譜（右）

2、用背景溶液（高蛋白、高核酸、高鹽、高低PH）對樣本提取，對于不同背景溶液的DNA樣本回收率均在70%~130%之間。

表1.CHO殘留DNA檢測試劑盒模擬樣本加標回收

3、CHO宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒(3G)的定量限為0.3fg/uL；CHO殘留DNA片段分析試劑盒的四個片段的定量限均為3fg/μL。

圖2.CHO殘留DNA 0.3fg/μL 檢測結果（左）和CHO殘留DNA片段分析88 bp片段3fg/μL檢測結果（右）

翌圣生物科技（上海）股份有限公司成立于2014年，是一家聚焦生命科學產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事核苷酸、蛋白、細胞和類器官四大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術企業(yè)。公司兼?zhèn)浜诵募夹g自主研發(fā)和規(guī)模化生產(chǎn)能力，核心產(chǎn)品數(shù)量達數(shù)千種，覆蓋分子克隆、qPCR、NGS、體外轉(zhuǎn)錄、抗體、蛋白純化及分析、細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、報告基因檢測和類器官等多種系列，廣泛應用于生命科學研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領域。