活性氧（reactive oxygen species, ROS）是含有有氧細(xì)胞代謝產(chǎn)生的氧的化學(xué)活性分子。這些化學(xué)物質(zhì)參與各種細(xì)胞過程，例如信號傳導(dǎo)、穩(wěn)態(tài)和免疫防御。然而，在環(huán)境壓力下，細(xì)胞內(nèi)的 ROS 水平會急劇增加，并導(dǎo)致脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸的氧化損傷^[1]。這些改變會導(dǎo)致各種病理事件，例如男性不育、癌變和許多其他生理狀況^[2]。

熒光探針通常用于測量細(xì)胞內(nèi)的 ROS 水平，其中綠色熒光探針最受歡迎。然而，綠色熒光范圍內(nèi)的檢測和成像可能會受到細(xì)胞自發(fā)熒光的影響^[3]。使用遠(yuǎn)紅外和近紅外（NIR）熒光染料來測量 ROS 水平則避免細(xì)胞自發(fā)熒光的干擾。

SpectraMax iD 系列多功能微孔板讀板儀采用專利的超冷卻 PMT 和 4 光柵光路設(shè)計，可減少信號背景和雜散光。這些特性為遠(yuǎn)紅外熒光檢測提供了寬動態(tài)范圍和靈敏度。

在此，我們演示了如何使用 SpectraMax iD5 微孔板讀板儀通過兩個熒光測定試劑盒測量細(xì)胞內(nèi) ROS 水平。使用光譜優(yōu)化向?qū)В⊿pectral Optimization Wizard）功能，我們優(yōu)化了遠(yuǎn)紅外分析的激發(fā)波長和發(fā)射波長組合。最后，我們比較了綠色熒光測定和遠(yuǎn)紅外熒光測定之間的測定性能。

SpectraMax iD5 多功能微孔板讀板儀與 SoftMax Pro 軟件相結(jié)合，是熒光測量細(xì)胞內(nèi) ROS 水平的出色工具。SoftMax Pro 軟件中的光譜優(yōu)化向?qū)Ш妥x取高度優(yōu)化功能可自動優(yōu)化分析條件以獲得最佳結(jié)果。盡管 SpectraMax iD5 讀板儀能夠有效地檢測這兩種檢測，但具有優(yōu)化激發(fā)和發(fā)射波長的遠(yuǎn)紅檢測顯示出比基于綠色熒光的檢測略好的 Z' 因子。

目前 Molecular Devices 公司配備光譜優(yōu)化向?qū)В⊿pectral Optimization Wizard）功能的讀板儀主要包括：SpectraMax iD3，SpectraMax iD5，這兩款讀板儀將分別被新上市的 SpectraMax iD3s 和 SpectraMax iD5e 取代，另外，SpectraMax i3x 以及 SpectraMax Paradigm 的 Tunable Wavelength（TUNE）檢測卡盒也可使用 Spectral Optimization Wizard 功能。