壓力流速是層析填料的一個重要性質。在使用層析柱時,實驗人員需要在?KTA上設置delta壓力的報警壓來保護層析填料,那么,填料的最大耐壓從哪來?如何定義填料的最大耐壓呢?
圖1:層析實驗操作過程中的壓力設置
層析填料的說明書一般會提供體現(xiàn)壓力流速性質的相關信息,如壓力流速曲線圖和填料性質參數表中的壓力流速數據;但 “最大耐壓(max pressure)”的字眼基本上消失不見,原因是該數據信息一般是基于生產級別的層析柱直徑下,使用水進行測定。該數據可以作為實驗人員設置報警壓或者操作壓力的重要參考。
但是實際生產環(huán)境下,層析柱的運行條件和說明書的壓力流速曲線可能會有很大不同,比如層析柱的直徑/裝柱高度/裝填效果/溶液組成/樣品狀態(tài)等。簡單的按照說明書提供的一個固定壓力數字,往往不足以降低實際生產將來可能遇到的超壓風險,甚至會給實驗人員帶來一個誤解:只要設置好報警壓,就會高枕無憂;而忽略了對層析柱壓力流速的細致研究。
圖2:以Mabselect PrismA的說明書為例
填料的壓力流速性質的展示形式
壓力流速曲線實驗
這是一個簡單但是卻能夠提供大量信息的實驗。
執(zhí)行壓力流速曲線測試實驗的時候,將層析系統(tǒng)的入口放置在足量的水中,依次設置不同的流速水平(比如30-60-90-120-150-180-210-240-270-300 cm/h),每個流速的壓力穩(wěn)定后,記錄一個“流速-對應的壓力”實驗點。
邊記錄,邊作圖,當壓力流速曲線出現(xiàn)拐點,或者當設置某個流速水平,壓力穩(wěn)定所需的時間顯著變長或者柱床開始出現(xiàn)水層,即說明填料的柱床開始不穩(wěn)定,運行流速開始超出層析柱床的壓力承受范圍了,那么就可以停止測試。
穩(wěn)健的操作流速或者壓力應該位于壓力流速曲線的線性區(qū),并預留充足的安全空間,來抵抗未來可能發(fā)生的各種影響壓力的因素,比如層析柱高度/直徑,填料批間差,裝柱質量,樣品濃度/濁度變化,溫度變化等等。
圖3:開放的壓力流速曲線示例。X軸為線性流速(cm/h)
Y軸為對應流速下穩(wěn)定后的運行壓力(bar)
圖4:基于壓力流速曲線,科學裝柱和操作
壓力流速曲線在不同的實驗背景下可以提供不同的信息。比如:
① 指導裝柱:基于開放的壓力流速曲線,可以找到拐點壓力(即critical pressure),一般裝柱壓力在拐點壓力的70-80%。該壓力對應的裝填因子(packing factor,PF)可以作為裝柱參考。
② 指導操作:已經裝填好的層析柱,測定柱效合格之后,可以再次使用水運行壓力流速曲線。通過該曲線可以詳細了解具體層析柱的壓力流速的線性操作區(qū)間。此外,還可以使用具有較大壓力風險的buffer溶液進行壓力流速曲線測試,以觀察真實溶液下,層析柱壓力流速運行的真正線性區(qū)。
③ 層析柱的穩(wěn)健性研究:在生產中,每次重新裝柱后運行壓力流速曲線實驗,或者每次更換新的填料批號后運行壓力流速曲線實驗,積累的壓力流速曲線在?KTA的UNICORN軟件中進行重疊比對,可以從中分析層析柱的壓力流速方面的長期穩(wěn)定性是否良好。
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