當(dāng)分析強(qiáng)極性化合物（如Vitamin C）時(shí)，可能需要使用高水相流動(dòng)相。這是由于反相柱固定相為非極性，對極性化合物保留能力較弱。需要增加流動(dòng)相中的水含量來提高保留，但實(shí)際操作中會(huì)遇到一些問題。我們將一同探討這些問題并提供解決方案。

C8和C18固定相是非極性的油狀物質(zhì)，與水的相互作用有限。當(dāng)流動(dòng)相水含量過高時(shí)，會(huì)導(dǎo)致固定相潤濕失敗，引發(fā)"疏水塌陷"現(xiàn)象，使固定相失去保留能力。例如，含甲醇/水混合流動(dòng)相時(shí)，C8/C18固定相可正常潤濕；當(dāng)出現(xiàn)純水流動(dòng)相時(shí)，固定相發(fā)生"去濕"現(xiàn)象。

 常見問題 

高水相（強(qiáng)極性）流動(dòng)相與非極性固定相相溶性差。水的強(qiáng)極性使其無法有效潤濕C8/C18固定相表面，導(dǎo)致固定相與分析物相互作用不足，影響分離效率。

持續(xù)使用高水相流動(dòng)相會(huì)造成固定相孔隙閉合。由于水的高表面張力無法充分滲透孔道，分析物失去相互作用位點(diǎn)，導(dǎo)致保留能力下降和分離失敗。

固定相去濕后，需用非極性溶劑沖洗色譜柱進(jìn)行再生。此過程耗時(shí)且可能無法完全恢復(fù)柱效。

水相過高會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間不穩(wěn)定和峰拖尾現(xiàn)象，源于固定相-分析物相互作用的不穩(wěn)定導(dǎo)致。

使用高水相流動(dòng)相時(shí)可采取以下措施：

策略1：
采用可耐受純水的反相柱，例如Kromasil Classic C18(w)，或其他品牌的AQ柱等。

策略2：
采用短鏈烷基固定相（如C4），其更大自由體積和更少屏蔽效應(yīng)可改善固定相潤濕性。

策略3：
選用大孔徑固定相（如300?），更寬孔徑有利于水分子滲透。

結(jié)論

在HPLC分析中，C8/C18色譜柱使用高水相流動(dòng)相時(shí)，可能發(fā)生疏水塌陷、保留時(shí)間不穩(wěn)定性、峰形畸變，以及色譜柱再生困難等問題。通過選擇可耐受純水的Kromasil Classic C18(w)或適宜的固定相類型（親水修飾/短鏈烷基/大孔徑）和未封端色譜柱，可有效改善高水相條件下的分離性能及穩(wěn)定性。

上?？萍加邢薰旧罡镝t(yī)藥行業(yè)多年，自創(chuàng)立之初就以為生物醫(yī)藥企業(yè)提供從研發(fā)分析到工業(yè)生產(chǎn)的全方位服務(wù)為愿景。不斷鉆研色譜分析及制備技術(shù)，提升服務(wù)品質(zhì)，致力于成為值得信賴的色譜技術(shù)服務(wù)提供商。

現(xiàn)為Nouryon旗下品牌 Kromasil液相色譜柱及制備填料中國區(qū)總代理。主營業(yè)務(wù)為代理銷售各類實(shí)驗(yàn)室精密儀器、試劑耗材以及相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)開發(fā)與咨詢服務(wù)。

愿與您攜手同行，共同前進(jìn)，為更健康，更安全的生物醫(yī)藥而不懈努力。

點(diǎn)擊左下角閱讀全文