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2025-01-10 17:03:54酶聯(lián)免疫檢測
酶聯(lián)免疫檢測是一種基于抗原與抗體特異性結(jié)合原理的生化分析方法。它利用酶標記的抗原或抗體與待測樣本中的相應(yīng)成分結(jié)合，通過酶促反應(yīng)產(chǎn)生可檢測的信號，如顏色變化，從而間接測定樣本中抗原或抗體的含量。該方法具有靈敏度高、特異性強、操作簡便等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷、食品安全檢測等領(lǐng)域，如病毒抗體檢測、激素水平測定等。

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2023-02-07 10:28:38本生牛乳鐵蛋白(LF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
　　本生牛乳鐵蛋白(LF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書　　本試劑盒僅供研究使用?！　z測范圍： 96T25μg/mL–850μg/mL　　使用目的：本試劑盒用于測定牛血清，血漿及相關(guān)樣本中乳鐵蛋白(LF)含量?！　嶒炘肀驹噭┖袘?yīng)用雙抗體夾心法測定標本中牛乳鐵蛋白(LF)水平。用純化的牛乳鐵蛋白(LF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入乳鐵蛋白(LF)，再與HRP標記的乳鐵蛋白(LF)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乳鐵蛋白(LF)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中乳鐵蛋白(LF)濃度。　　試劑盒組成　　130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液　　6ml×1瓶2酶標試劑　　6ml×1瓶8標準品(1600μg/mL)　　0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液　　1.5ml×1瓶4樣品稀釋液　　6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液　　6ml×1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液　　6ml×1/瓶12密封袋1個　　標本要求　　1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡s快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性?！　〔僮鞑襟E　　1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。800μg/mL5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液400μg/mL4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液200μg/mL3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液100μg/mL2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液50μg/mL1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液　　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻?！　?.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干?！　?.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外?！　?.溫育：操作同3?！　?.洗滌：操作同5。　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)?！　?1.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行?！　〔僮鞒绦蚩偨Y(jié)：　　計算 以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度?！　∽⒁馐马棥　?.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存?！　?.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果?！　?.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣?！　?.請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)?！　?.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染?！　?.底物請避光保存。　　7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。　　9.本試劑不同批號組分不得混用。　　保存條件及有效期1.試劑盒保存：2-8℃。2.　　有效期：6個月
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2022-08-09 11:23:27可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒說明書
       關(guān)鍵詞：可溶性腫瘤壞死因子 BUNSEN本生 酶聯(lián)免疫試劑盒　　可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒說明書　　實驗原理:　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中血清素/血清胺(ST)水平。用純化的血清素/血清胺(ST)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST)，再與HRP標記的血清素/血清胺(ST)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血清素/血清胺(ST)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中血清素/血清胺(ST)濃度?！　吮疽?　　1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性?！　颖咎幚砑耙螅骸　?.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融?！　?. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融?！　?. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測?！　?. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融?！　≡噭┖行阅埽骸　?. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990?！　?. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)?！　?. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%?！　〔僮鞑襟E：　　1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋?！　?0pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液　　40pg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液　　20pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液　　10pg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液　　5pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液　　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻?！　?.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘?！　?.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干?！　?.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。　　7.溫育：操作同3?！　?.洗滌：操作同5?！　?.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)?！　?1.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行?！　〔僮鞒绦蚩偨Y(jié):　　計算：　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度?！　∽⒁馐马棧骸　?.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存?！　?.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果?！　?.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣?！　?.請每次測定的同時做標準曲線，好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染?！　?.底物請避光保存?！　?.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理?！　?.本試劑不同批號組分不得混用。
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2022-03-10 15:26:49人維生素B12（VB12）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
人維生素B12（VB12）酶聯(lián)免疫分析試劑盒本試劑盒僅供研究使用。貨號：BS-1522檢測范圍：96T3pg/ml-180pg/ml使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中維生素B12（VB12）含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人維生素B12（VB12）水平。用純化的維生素B12（VB12）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入維生素B12（VB12）， 再與 HRP 標記的維生素B12（VB12）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗 滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終 的黃色。顏色的深淺和樣品中的維生素B12（VB12）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定 吸光度(OD 值)，通過標準曲線計算樣品中人維生素B12（VB12）濃度。試劑盒組成1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(320pg/ml) 0.5ml×1 瓶 3 酶標包被板12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個標本要求1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。160pg/ml5 號標準品150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液80pg/ml4 號標準品150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液40pg/ml3 號標準品150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液20pg/ml2 號標準品150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液10pg/ml1 號標準品150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。7. 溫育：操作同 3。8. 洗滌：操作同 5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié)：計算以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定，計 算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。人維生素B12（VB12）酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期1.試劑盒保存：;2-8℃。2.有效期：6 個月
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2022-06-23 11:08:47小鼠雙鏈RNA(dsRNA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
　　小鼠雙鏈RNA(dsRNA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書　　本試劑盒僅供研究使用?！　z測范圍：　　96T　　3ng/L -180ng/L　　使用目的：　　本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中雙鏈 RNA(dsRNA)含量?！　嶒炘怼　”驹噭┖袘?yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠雙鏈 RNA(dsRNA)水平。用純化的雙鏈RNA(dsRNA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雙鏈 RNA(dsRNA)，再與 HRP 標記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雙鏈 RNA(dsRNA)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標準曲線計算樣品中小鼠雙鏈 RNA(dsRNA)濃度。　　ELISA試劑盒組成：　　試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存　　說明書1 份1 份　　封板膜2 片(48)2 片(96)　　密封袋1 個1 個　　酶標包被板1×481×962-8℃保存　　標準品：540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存　　標準品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存　　酶標試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存　　樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存　　顯色劑 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存　　顯色劑 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存　　終止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存　　濃縮洗滌液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存　　小鼠雙鏈RNA(dsRNA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作       程序總結(jié)：　　計算　　以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。　　　　注意事項　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存?！　?.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果?！　?.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣?！　?. 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)?！　?. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。　　6.底物請避光保存?！　?.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理?！　?.本試劑不同批號組分不得混用?！　”４鏃l件及有效期　　1.試劑盒保存：;2-8℃?！　?.有效期：6 個月
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2021-12-15 11:12:05人腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫分析使用說明書
人腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫分析使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量。實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。用純化的人腫瘤壞死因子α(TNF-α)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入人腫瘤壞死因子α(TNF-α)，再與HRP標記的檢測抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片2片密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品0.3ml×6管0.3ml×6管2-8℃保存酶標試劑5ml×1瓶10ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存20×濃縮洗滌液15ml×1瓶25ml×1瓶2-8℃保存注：標準品濃度依次為：48、24、12、6、3、0pg/mL.樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞2濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的加樣：設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。9.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。人腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒使用說明書注意事項：1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。樣本在使用也要在室溫平衡60分鐘。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。3計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15%。檢測范圍：1.5pg/mL-48pg/mL靈敏度：檢測濃度小于0.1pg/mL保存條件及有效期：1.試劑盒保存：2-8℃。2.有效期：6個月
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