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2025-01-10 17:05:28細(xì)胞代謝分析試劑盒: 細(xì)胞代謝分析試劑盒是一種用于分析細(xì)胞代謝活動的實驗工具，它包含了一系列特定的試劑和反應(yīng)體系，能夠定量檢測細(xì)胞在代謝過程中產(chǎn)生的各種生化指標(biāo)，如葡萄糖消耗、乳酸生成、氧氣消耗速率等。這些指標(biāo)對于評估細(xì)胞代謝狀態(tài)、研究代謝相關(guān)疾病及藥物篩選等具有重要意義。試劑盒通常設(shè)計有簡便的操作流程和較高的靈敏度，便于科研人員在實驗室環(huán)境下進(jìn)行細(xì)胞代謝的深入研究。

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安捷倫科技（中國）有限公司 374
2022-11-13
安捷倫 Seahorse XF 分析平臺細(xì)胞代謝分析試劑盒

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細(xì)胞代謝分析試劑盒問答

2022-11-15 20:34:18安捷倫Seahorse XF Pro創(chuàng)新引領(lǐng)活細(xì)胞代謝分析平臺: 能量代謝在多種細(xì)胞和生理過程中發(fā)揮著核心作用。細(xì)胞中能量代謝的運(yùn)作方式不僅可以作為細(xì)胞健康的關(guān)鍵指標(biāo)，也可用于有效預(yù)測細(xì)胞命運(yùn)、功能和適應(yīng)性。實時監(jiān)測這些信息可提供關(guān)于激活、增殖、分化和細(xì)胞死亡過程的深入見解，推動科學(xué)研究并助力治療藥物研發(fā)。安捷倫 Seahorse XF Pro 細(xì)胞能量代謝分析儀擁有更高的靈敏度和數(shù)據(jù)一致性、直觀的自定義工作流程方案、先進(jìn)的實驗設(shè)計和數(shù)據(jù)分析工具，讓活細(xì)胞生物能量代謝的實時測量和數(shù)據(jù)解析變得更加簡單易行，即使新手也能輕松掌握?；罴?xì)胞功能代謝分析的廣泛應(yīng)用適用于表征體外疾病模型、識別新的藥物靶標(biāo)、驗證靶標(biāo)對細(xì)胞功能的影響、評估藥物安全性以及測量 T 細(xì)胞療法抗腫瘤潛力的相關(guān)參數(shù)。藥物發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)/驗證新的治療靶標(biāo)確保細(xì)胞模型具有所需的代謝程序識別線粒體毒性，降低藥物研發(fā)管線的風(fēng)險掃碼了解更多免疫學(xué)探索細(xì)胞命運(yùn)的驅(qū)動因素實時監(jiān)測/調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞活化通過靶向代謝通路改善免疫療法的設(shè)計和性能掃碼了解更多癌癥生物學(xué)研究癌細(xì)胞如何進(jìn)行代謝重編程以支持快速生長研究營養(yǎng)物質(zhì)對癌細(xì)胞生長的影響揭示腫瘤微環(huán)境如何影響代謝干細(xì)胞生物學(xué)探索驅(qū)動干細(xì)胞多能性和分化的能量代謝程序調(diào)節(jié)培養(yǎng)基條件以獲得所需表型掃碼了解更多深入了解XF技術(shù)工作原理安捷倫 Seahorse XF Pro 分析儀利用 96 孔板形式的免標(biāo)記固態(tài)探針板，同步測定活細(xì)胞中兩種主要能量代謝途徑（線粒體呼吸和糖酵解）的活性。它提供可在系統(tǒng)水平了解培養(yǎng)細(xì)胞和體外樣品的細(xì)胞代謝功能的測量。XF Pro 分析儀適用于大多數(shù)細(xì)胞類型，包括原代細(xì)胞、貼壁細(xì)胞系和懸浮細(xì)胞。先進(jìn)的實驗設(shè)計和數(shù)據(jù)分析先進(jìn)的 XF 軟件和數(shù)據(jù)分析平臺，提供簡單直觀的實驗設(shè)置和數(shù)據(jù)分析體驗，將自動化數(shù)字成像和歸一化系統(tǒng)與Seahorse XF 分析無縫集成，輕松獲得更一致、更易于解析的結(jié)果，使用明場成像檢查 XF 分析前后的細(xì)胞培養(yǎng)完整性/健康狀況，提高數(shù)據(jù)質(zhì)量和可解讀性。量身定制的 Wave Pro Controller 軟件包括預(yù)加載模板、高級模板導(dǎo)入功能、劑量反應(yīng)分析設(shè)置功能。基于網(wǎng)頁的 Seahorse Analytics 提供獨(dú)有的前沿數(shù)據(jù)分析功能，允許定制分析視圖/報告，從而快速將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為有用見解，或?qū)?shù)據(jù)導(dǎo)出至 GraphPad Prism 和 Microsoft Excel 等第三方繪圖和統(tǒng)計軟件。細(xì)胞分析網(wǎng)絡(luò)研討會系列查看我們的細(xì)胞分析網(wǎng)絡(luò)研討會系列，我們提供了各種網(wǎng)絡(luò)研討會，您可以按需觀看。在本系列網(wǎng)絡(luò)研討會中，我們邀請了研究人員分享他們使用 Seahorse XF 技術(shù)取得的研究成果。了解其他研究人員如何使用實時代謝測量來推進(jìn)他們的研究。細(xì)胞分析出版物數(shù)據(jù)庫訪問安捷倫細(xì)胞分析出版物數(shù)據(jù)庫，其中包含 6800 多篇精選的安捷倫 Seahorse XF 同行評審出版物。利用出版物數(shù)據(jù)庫搜索過濾器，按研究領(lǐng)域、細(xì)胞系、細(xì)胞類型、作者、分析類型或分析儀查詢 Seahorse XF 出版物，找到與您的研究相關(guān)的出版物。僅供科研使用，不用于臨床診斷用途。

2022-11-15 20:32:31安捷倫Seahorse XF Pro創(chuàng)新引領(lǐng)活細(xì)胞代謝分析平臺: 能量代謝在多種細(xì)胞和生理過程中發(fā)揮著核心作用。細(xì)胞中能量代謝的運(yùn)作方式不僅可以作為細(xì)胞健康的關(guān)鍵指標(biāo)，也可用于有效預(yù)測細(xì)胞命運(yùn)、功能和適應(yīng)性。實時監(jiān)測這些信息可提供關(guān)于激活、增殖、分化和細(xì)胞死亡過程的深入見解，推動科學(xué)研究并助力治療藥物研發(fā)。安捷倫 Seahorse XF Pro 細(xì)胞能量代謝分析儀擁有更高的靈敏度和數(shù)據(jù)一致性、直觀的自定義工作流程方案、先進(jìn)的實驗設(shè)計和數(shù)據(jù)分析工具，讓活細(xì)胞生物能量代謝的實時測量和數(shù)據(jù)解析變得更加簡單易行，即使新手也能輕松掌握。活細(xì)胞功能代謝分析的廣泛應(yīng)用適用于表征體外疾病模型、識別新的藥物靶標(biāo)、驗證靶標(biāo)對細(xì)胞功能的影響、評估藥物安全性以及測量 T 細(xì)胞療法抗腫瘤潛力的相關(guān)參數(shù)。藥物發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)/驗證新的治療靶標(biāo)確保細(xì)胞模型具有所需的代謝程序識別線粒體毒性，降低藥物研發(fā)管線的風(fēng)險掃碼了解更多免疫學(xué)探索細(xì)胞命運(yùn)的驅(qū)動因素實時監(jiān)測/調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞活化通過靶向代謝通路改善免疫療法的設(shè)計和性能掃碼了解更多癌癥生物學(xué)研究癌細(xì)胞如何進(jìn)行代謝重編程以支持快速生長研究營養(yǎng)物質(zhì)對癌細(xì)胞生長的影響揭示腫瘤微環(huán)境如何影響代謝干細(xì)胞生物學(xué)探索驅(qū)動干細(xì)胞多能性和分化的能量代謝程序調(diào)節(jié)培養(yǎng)基條件以獲得所需表型掃碼了解更多深入了解XF技術(shù)工作原理安捷倫 Seahorse XF Pro 分析儀利用 96 孔板形式的免標(biāo)記固態(tài)探針板，同步測定活細(xì)胞中兩種主要能量代謝途徑（線粒體呼吸和糖酵解）的活性。它提供可在系統(tǒng)水平了解培養(yǎng)細(xì)胞和體外樣品的細(xì)胞代謝功能的測量。XF Pro 分析儀適用于大多數(shù)細(xì)胞類型，包括原代細(xì)胞、貼壁細(xì)胞系和懸浮細(xì)胞。先進(jìn)的實驗設(shè)計和數(shù)據(jù)分析先進(jìn)的 XF 軟件和數(shù)據(jù)分析平臺，提供簡單直觀的實驗設(shè)置和數(shù)據(jù)分析體驗，將自動化數(shù)字成像和歸一化系統(tǒng)與Seahorse XF 分析無縫集成，輕松獲得更一致、更易于解析的結(jié)果，使用明場成像檢查 XF 分析前后的細(xì)胞培養(yǎng)完整性/健康狀況，提高數(shù)據(jù)質(zhì)量和可解讀性。量身定制的 Wave Pro Controller 軟件包括預(yù)加載模板、高級模板導(dǎo)入功能、劑量反應(yīng)分析設(shè)置功能。基于網(wǎng)頁的 Seahorse Analytics 提供獨(dú)有的前沿數(shù)據(jù)分析功能，允許定制分析視圖/報告，從而快速將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為有用見解，或?qū)?shù)據(jù)導(dǎo)出至 GraphPad Prism 和 Microsoft Excel 等第三方繪圖和統(tǒng)計軟件。細(xì)胞分析網(wǎng)絡(luò)研討會系列查看我們的細(xì)胞分析網(wǎng)絡(luò)研討會系列，我們提供了各種網(wǎng)絡(luò)研討會，您可以按需觀看。在本系列網(wǎng)絡(luò)研討會中，我們邀請了研究人員分享他們使用 Seahorse XF 技術(shù)取得的研究成果。了解其他研究人員如何使用實時代謝測量來推進(jìn)他們的研究。細(xì)胞分析出版物數(shù)據(jù)庫訪問安捷倫細(xì)胞分析出版物數(shù)據(jù)庫，其中包含 6800 多篇精選的安捷倫 Seahorse XF 同行評審出版物。利用出版物數(shù)據(jù)庫搜索過濾器，按研究領(lǐng)域、細(xì)胞系、細(xì)胞類型、作者、分析類型或分析儀查詢 Seahorse XF 出版物，找到與您的研究相關(guān)的出版物。僅供科研使用，不用于臨床診斷用途。

2023-03-21 10:45:39本生解析elisa試劑盒質(zhì)控分析及方法原理: 　　本生解析elisa試劑盒質(zhì)控分析及方法原理　　應(yīng)客戶們對年前產(chǎn)品預(yù)購的要求，今日開始逐漸安排發(fā)貨，具體內(nèi)容公司業(yè)務(wù)員會及時聯(lián)xi。新年的開始中，本生公司技術(shù)專員為elisa試劑盒新手入門的使用技術(shù)報告做出一番整理，在這里分享給您，供參考?！　　?ELISA方法原理　　1. 雙抗體(原)夾心法：檢測抗原(體)的常見方法，應(yīng)用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標(biāo)抗體檢測溶液中的抗原(適用于二價以上抗原，不能測小分子半抗原)?！　?. 間接法：檢測抗體的方法，利用酶標(biāo)記的抗抗體(第二抗體)檢測已與固相抗原結(jié)合的抗體?！　?. 競爭法：檢測抗原或小分子半抗原、抗體，以測抗原為例，使待測抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合，結(jié)果如待測抗原含量越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原就越少，顯色越淺，二者呈負(fù)相關(guān)?！　　?elisa試劑盒操作注意　?、?使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?！　、?洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。　?、?底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值?！　　?elisa試劑盒質(zhì)控分析　　1. 人員培訓(xùn)內(nèi)容包括：　?、贆z驗項目的基本原理(ELISA試劑盒原理);　?、谑煜z測技巧，了解易出差錯的環(huán)節(jié)及難點;熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成，包被片段及其組成);③熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識;　?、苣承┨厥忭椖康臋z測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗?！　?. 基本了解　?、?1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)?！　、?特點：ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"?！　、?酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，進(jìn)行信號放大;　?、?有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過程;　?、?靈敏度特異性相對較高。　?、?局限性：只能檢測到ng水平　?、?精密度差(批內(nèi)CV15-20%);　?、?ELISA檢測試劑盒線性范圍窄(一個數(shù)量級);　?、?存在"HD-HOOK"效應(yīng)?！　LISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

2023-02-07 10:28:38本生牛乳鐵蛋白(LF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書: 　　本生牛乳鐵蛋白(LF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書　　本試劑盒僅供研究使用?！　z測范圍： 96T25μg/mL–850μg/mL　　使用目的：本試劑盒用于測定牛血清，血漿及相關(guān)樣本中乳鐵蛋白(LF)含量。　　實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛乳鐵蛋白(LF)水平。用純化的牛乳鐵蛋白(LF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入乳鐵蛋白(LF)，再與HRP標(biāo)記的乳鐵蛋白(LF)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乳鐵蛋白(LF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中乳鐵蛋白(LF)濃度。　　試劑盒組成　　130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液　　6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑　　6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(1600μg/mL)　　0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液　　1.5ml×1瓶4樣品稀釋液　　6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液　　6ml×1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液　　6ml×1/瓶12密封袋1個　　標(biāo)本要求　　1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡s快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性?！　〔僮鞑襟E　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。800μg/mL5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液400μg/mL4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200μg/mL3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100μg/mL2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μg/mL1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液　　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻?！　?.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘?！　?.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外?！　?.溫育：操作同3?！　?.洗滌：操作同5?！　?.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。　　11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行?！　〔僮鞒绦蚩偨Y(jié)：　　計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度?！　∽⒁馐马棥　?.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存?！　?.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果?！　?.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。　　4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)?！　?.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。　　6.底物請避光保存?！　?.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理?！　?.本試劑不同批號組分不得混用?！　”４鏃l件及有效期1.試劑盒保存：2-8℃。2.　　有效期：6個月

2022-12-06 13:14:13應(yīng)用簡報：直接測量細(xì)胞代謝以識別線粒體藥物靶點: 前言藥物靶點識別在藥物發(fā)現(xiàn)價值鏈中起到關(guān)鍵作用。藥物開發(fā)的關(guān)鍵步驟是識別潛在候選藥物的直接靶點并區(qū)分任何繼發(fā)或脫靶效應(yīng)。藥物靶點識別的方法之一是表型篩選，涉及向細(xì)胞（或較小的模型生物）中添加化合物并測量對目標(biāo)表型或細(xì)胞活性的影響1。對于對表型或細(xì)胞功能具有所期望的影響的化合物，必須識別活性化合物直接擾亂的基因或基因產(chǎn)物（即，靶點）。因此，藥物開發(fā)的關(guān)鍵步驟是識別活性化合物的直接靶點以及該化合物可能影響進(jìn)一步開發(fā)的任何繼發(fā)或脫靶效應(yīng)。圖 1. 按年份繪制的 PubMed 中包括關(guān)鍵詞“線粒體”、“藥物”和“靶點”的出版物的數(shù)量近年來，已經(jīng)確定線粒體和細(xì)胞代謝過程除具有眾所周知的底物氧化和 ATP 生成作用以外，還是細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、免疫細(xì)胞應(yīng)答、缺氧感受和細(xì)胞凋亡的核心2-4。實際上，線粒體和代謝功能障礙越來越多地與眾多病理聯(lián)系在一起，其中包括癌癥、免疫細(xì)胞和系統(tǒng)疾病、神經(jīng)退化、心臟病、肥胖和糖尿病以及衰老過程5-7。于是，人們對線粒體和代謝藥物靶點的關(guān)注大幅增加（圖 1）。因此，相應(yīng)地需要對代謝通路功能進(jìn)行高靈敏度直接測量，以闡明潛在候選藥物的特異性（及任何可能的非特異性）靶點。安捷倫 Seahorse XF Pro 分析儀以多孔板形式直接測量活細(xì)胞中的線粒體呼吸和細(xì)胞代謝。因此，該系統(tǒng)是用于檢測以線粒體和其他代謝通路（如糖酵解）為靶標(biāo)的藥物的功能效應(yīng)的理想選擇。本應(yīng)用簡報提供了可用于代謝靶點識別研究的Seahorse XF 應(yīng)用和工作流程的總體概述。未來，本系列應(yīng)用簡報將探討如何使用這些分析來闡明藥物化合物的特異性和非特異性靶點的有趣案例。用于線粒體和代謝藥物靶點識別的 Seahorse XF 工作流程本工作流程分為一系列分析，旨在解答以下主要問題：1. 化合物是否影響線粒體或代謝功能？2. 化合物的特異性靶點是什么？3. 是否存在任何非特異性或脫靶效應(yīng)？對于在表型篩選中表現(xiàn)為有效的化合物（例如，藥物 X），執(zhí)行安捷倫 Seahorse XF 細(xì)胞線粒體壓力測試 (MST) 以確定化合物是否影響線粒體功能8, 9。該分析通過測定耗氧率（圖 2，左圖），對線粒體呼吸的幾個關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行了檢測。其中發(fā)生變化的參數(shù)（以及變化幅度）提供了有關(guān)化合物是否改變線粒體功能的信息10, 11。該分析的結(jié)果還可以確定后續(xù)最適合采用哪種類型的 XF 分析設(shè)計來采集更具體的信息（包括藥物靶點識別）。例如對于藥物 X，該工作流程將應(yīng)用于眾所周知的線粒體丙酮酸載體抑制劑 UK509910。圖 2（右圖）顯示了在缺乏和存在 UK5099 時的 MST 結(jié)果。數(shù)據(jù)表明，UK5099 確實影響線粒體功能，表現(xiàn)在基礎(chǔ)呼吸速率和最大呼吸速率均有所下降。藥物 X 是否影響線粒體功能？圖 2. 左圖：安捷倫 Seahorse XF 細(xì)胞線粒體壓力測試分析設(shè)計和輸出參數(shù)；右圖：用 UK5099 對細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理后的 MST接下來，必須考慮代謝的哪些部分可能會驅(qū)動這種變化。UK5099 的 MST 圖譜表明，在底物氧化和/或電子傳遞鏈/氧化磷酸化通路中發(fā)生了功能障礙11。這些通路包括底物轉(zhuǎn)運(yùn)和速率控制蛋白質(zhì)和酶的活性，包括谷氨酰胺酶、CPT1a、丙酮酸脫氫酶 (PDH)、TCA 循環(huán)酶、電子傳遞和氧化磷酸化機(jī)制。為確定 UK5099 的效果，使用安捷倫 Seahorse XF 細(xì)胞膜通透劑 (PMP)。細(xì)胞膜透化使得提供的底物可直接進(jìn)入線粒體中，而無須將線粒體與細(xì)胞物理分離10, 12, 13。由于不同的可氧化底物參與不同的代謝通路，因此提供了特定底物的透性化細(xì)胞的呼吸速率可用于識別靶點，這些靶點在受到調(diào)節(jié)后引起可在完整細(xì)胞中觀察到的線粒體呼吸變化。圖 3 簡單概述了丙酮酸、谷氨酸和琥珀酸的底物依賴性通路，更多信息參見參考文獻(xiàn)10 的圖 S3。因此，工作流程中的下一步 XF 分析是在存在和缺乏候選藥物UK5099 的情況下將這三種底物分別提供給透性化細(xì)胞。如圖 4 所示，UK5099 僅在丙酮酸作為底物時阻止呼吸；向各種類型的透性化細(xì)胞（HskMM、NRVM 和原代皮層神經(jīng)元）提供谷氨酸或琥珀酸時無效。總而言之，這些結(jié)果表明：呼吸復(fù)合物 I 和復(fù)合物 II 都不是 UK5099 的靶點，并且 UK5099 對呼吸的抑制必定位于復(fù)合物 I 和 TCA 循環(huán)的上游，因為谷氨酸（復(fù)合物 I 底物）或琥珀酸（TCA/復(fù)合物 II 底物）氧化都不受影響。此外，這些結(jié)果還表明丙酮酸脫氫酶 (PDH) 或線粒體丙酮酸載體 (MPC) 可能是 UK5099 的靶點。然后可以進(jìn)一步分析透性化細(xì)胞和替代底物以區(qū)分 PDH 和 MPC，如同證明 MPC 是 UK5099 的特異性靶點一樣10。圖 3. 丙酮酸、谷氨酸和琥珀酸線粒體氧化通路的簡單示意圖。復(fù)合物 I 和復(fù)合物 II 底物和通路分別顯示為紅色和藍(lán)色。請注意：丙酮酸和谷氨酸都提供 NADH 給 CI，而琥珀酸提供FADH2 給 CII。MPC：線粒體丙酮酸載體；PDH：丙酮酸脫氫酶。為清楚起見，省略了復(fù)合物 V 及其他氧化磷酸化組分圖 4. 提供丙酮酸 (Pyr)/蘋果酸、谷氨酸 (Glu)/蘋果酸或琥珀酸 (Succ)/魚藤酮作為唯一底物的透化性細(xì)胞的呼吸；UK5099 僅抑制丙酮酸驅(qū)動的呼吸。HSkMM：人骨骼肌成肌細(xì)胞；NRVM：新生大鼠心室肌細(xì)胞；皮層神經(jīng)元：大鼠原代皮層神經(jīng)元。摘自參考文獻(xiàn) 11總結(jié)我們對代謝作用的理解已經(jīng)從簡單的“管家”演變?yōu)樵S多正常和疾病狀態(tài)的核心參與者。在活細(xì)胞中檢測化合物對線粒體功能和代謝表型的影響，提供了一條識別代謝調(diào)節(jié)靶點的通路。此方法補(bǔ)充了其他方法，例如以信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和細(xì)胞受體為靶標(biāo)的方法。除 ETC 和氧化磷酸化以外，本文所概述的示例強(qiáng)調(diào)了考慮多條線粒體通路（包括底物轉(zhuǎn)運(yùn)和線粒體酶活性）的重要性。通過將線粒體和代謝功能的直接基于細(xì)胞的測量結(jié)合到藥物靶點識別研究中，可以獲得有關(guān)化合物的特異性和非特異性效應(yīng)的重要見解。參考文獻(xiàn)1. 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