- 2025-01-10 10:53:35實(shí)時(shí)紅外光譜儀
- 實(shí)時(shí)紅外光譜儀是一款精密的分析儀器,能夠?qū)崟r(shí)獲取物質(zhì)的紅外光譜信息。它利用紅外光與物質(zhì)相互作用產(chǎn)生的光譜,快速分析物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)、官能團(tuán)及成分。該儀器具有分析速度快、靈敏度高、實(shí)時(shí)性好等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于化學(xué)、材料科學(xué)、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。實(shí)時(shí)紅外光譜儀能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)化學(xué)反應(yīng)過(guò)程、材料變化等,為科研和工業(yè)生產(chǎn)提供重要的數(shù)據(jù)支持,是科研人員和工程師不可或缺的工具。
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實(shí)時(shí)紅外光譜儀問(wèn)答
- 2025-04-15 16:00:17紅外光譜儀注意事項(xiàng)有哪些?
- 紅外光譜儀作為一種重要的分析工具,廣泛應(yīng)用于化學(xué)、材料、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。其通過(guò)測(cè)量樣品對(duì)紅外光的吸收情況,能夠獲得分子結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分等信息。為了確保紅外光譜儀的測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確性和儀器的長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行,使用時(shí)需要特別注意一些事項(xiàng)。本文將詳細(xì)探討紅外光譜儀使用過(guò)程中常見(jiàn)的注意事項(xiàng),幫助用戶更好地進(jìn)行操作和維護(hù)。 紅外光譜儀的校準(zhǔn)非常關(guān)鍵。在進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)前,確保儀器已通過(guò)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)。儀器的校準(zhǔn)不僅可以保證測(cè)量數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,還能避免因設(shè)備偏差而導(dǎo)致的誤差。在校準(zhǔn)過(guò)程中,需要選擇適合實(shí)驗(yàn)需求的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),嚴(yán)格遵循廠商提供的操作手冊(cè)進(jìn)行操作,避免人為因素引入的不確定性。 樣品的處理和準(zhǔn)備也是影響測(cè)試結(jié)果的重要因素。紅外光譜儀通常要求樣品具有良好的均勻性和適當(dāng)?shù)暮穸?。?duì)于液體樣品,可以使用特定的液體池,避免氣泡和雜質(zhì)的干擾;固體樣品則需要均勻研磨或切割,確保樣品表面光滑,以減少光譜信號(hào)的畸變。樣品的純度也對(duì)測(cè)試結(jié)果產(chǎn)生直接影響,因此,在使用前,好對(duì)樣品進(jìn)行必要的預(yù)處理,去除其中的雜質(zhì)。 除了樣品本身,環(huán)境因素對(duì)紅外光譜儀的測(cè)試結(jié)果也具有不容忽視的影響。紅外光譜儀的精度很大程度上依賴于測(cè)試環(huán)境的溫濕度條件。過(guò)高或過(guò)低的溫度、濕度變化過(guò)大的環(huán)境都會(huì)影響儀器的性能,甚至可能導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。因此,在進(jìn)行測(cè)量時(shí),應(yīng)將儀器放置在溫濕度控制較為穩(wěn)定的環(huán)境中,以確保儀器能夠正常工作。 在操作過(guò)程中,使用者還需注意紅外光譜儀的定期維護(hù)與清潔。儀器的光學(xué)部件,如透鏡和反射鏡,容易受到灰塵和污染物的影響,這會(huì)導(dǎo)致光學(xué)性能下降,影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,定期清潔光學(xué)元件,特別是鏡頭和光源區(qū)域,是保持儀器高效運(yùn)行的基本保障。也需要定期檢查儀器的光源和探測(cè)器,確保它們的穩(wěn)定性和靈敏度。 為了延長(zhǎng)紅外光譜儀的使用壽命,避免頻繁發(fā)生故障,操作人員應(yīng)嚴(yán)格遵循廠商的操作規(guī)范。對(duì)于不同型號(hào)的儀器,使用手冊(cè)中往往會(huì)提供專門的維護(hù)指南,用戶應(yīng)根據(jù)儀器的具體要求進(jìn)行保養(yǎng)。定期的檢查和專業(yè)的維修保養(yǎng)是防止設(shè)備故障和延長(zhǎng)其使用周期的重要手段。 紅外光譜儀的應(yīng)用也需要操作人員具備一定的專業(yè)知識(shí)。正確理解和分析紅外光譜圖是至關(guān)重要的,特別是在復(fù)雜樣品分析時(shí),用戶需要具備較強(qiáng)的化學(xué)分析能力和數(shù)據(jù)解析能力。否則,可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論,從而影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)或應(yīng)用。 紅外光譜儀作為精密的實(shí)驗(yàn)工具,使用時(shí)需要細(xì)致關(guān)注多個(gè)方面,從校準(zhǔn)、樣品處理、環(huán)境控制到定期維護(hù)等,均是確保測(cè)量準(zhǔn)確性和儀器性能的重要因素。專業(yè)的操作與細(xì)心的保養(yǎng)能大程度地發(fā)揮其優(yōu)勢(shì),確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。
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- 2025-04-15 16:00:17傅立葉紅外光譜儀步驟哪些必不可少?
- 傅立葉紅外光譜儀步驟 傅立葉紅外光譜儀(FTIR)作為現(xiàn)代分析化學(xué)中常見(jiàn)且重要的儀器之一,廣泛應(yīng)用于材料分析、化學(xué)成分鑒定以及污染監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。通過(guò)對(duì)紅外光譜的解析,F(xiàn)TIR能夠準(zhǔn)確地揭示樣品的分子結(jié)構(gòu)和功能基團(tuán)。本文將詳細(xì)介紹傅立葉紅外光譜儀的操作步驟,從樣品準(zhǔn)備到數(shù)據(jù)分析的整個(gè)過(guò)程,幫助用戶更好地理解和掌握該技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用。 樣品準(zhǔn)備與處理 傅立葉紅外光譜儀的使用首先要求樣品的充分準(zhǔn)備。根據(jù)樣品的物理狀態(tài)(固態(tài)、液態(tài)或氣態(tài)),處理方法有所不同。在處理固態(tài)樣品時(shí),通常需要將其磨成細(xì)粉,混合少量的KBr(氯化鉀)粉末,并通過(guò)壓片法制備成薄片,保證其透光性。液體樣品則可以直接滴加到紅外窗片上,或通過(guò)配制成薄膜來(lái)進(jìn)行測(cè)試。氣體樣品一般通過(guò)氣體池進(jìn)行分析,確保測(cè)試氣體的流動(dòng)性和均勻性。 在進(jìn)行樣品準(zhǔn)備時(shí),操作人員需要特別注意避免樣品的污染或揮發(fā)。因?yàn)檫@些因素會(huì)直接影響的光譜結(jié)果,導(dǎo)致誤差。因此,樣品準(zhǔn)備過(guò)程中應(yīng)確保清潔操作,并使用高質(zhì)量的化學(xué)試劑。 設(shè)備設(shè)置與校準(zhǔn) 傅立葉紅外光譜儀的操作需要先進(jìn)行必要的設(shè)備設(shè)置與校準(zhǔn)。打開(kāi)儀器并進(jìn)行自檢,確保所有硬件運(yùn)行正常。接著,根據(jù)不同的樣品類型,選擇適當(dāng)?shù)墓庾V范圍和掃描模式。FTIR通常工作在4000 cm-1至400 cm-1的紅外區(qū)域,用戶應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求設(shè)置合適的掃描次數(shù)和分辨率。 在進(jìn)行數(shù)據(jù)采集之前,校準(zhǔn)是確保實(shí)驗(yàn)精度的重要步驟。常見(jiàn)的校準(zhǔn)方法包括使用標(biāo)準(zhǔn)的波長(zhǎng)校準(zhǔn)片,或進(jìn)行背景掃描。背景掃描是指在沒(méi)有樣品的情況下,對(duì)環(huán)境進(jìn)行一次測(cè)量,獲得背景光譜。這樣,后續(xù)樣品測(cè)試時(shí)能夠扣除環(huán)境的影響,提高測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。 數(shù)據(jù)采集與分析 當(dāng)樣品準(zhǔn)備完畢,儀器設(shè)置完成后,開(kāi)始進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。傅立葉紅外光譜儀通過(guò)紅外光源照射樣品,樣品對(duì)不同波長(zhǎng)的紅外光具有不同的吸收特性,得到樣品的吸收光譜。在測(cè)試過(guò)程中,儀器會(huì)將光譜信息通過(guò)傅立葉變換算法轉(zhuǎn)化為可供分析的數(shù)據(jù)。 數(shù)據(jù)采集完畢后,用戶需要對(duì)光譜圖進(jìn)行詳細(xì)的分析。檢查光譜的主要吸收峰,這些峰值對(duì)應(yīng)的是樣品分子中的特定化學(xué)鍵。通過(guò)與已知的標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)進(jìn)行比對(duì),分析樣品的成分和結(jié)構(gòu)。不同化學(xué)基團(tuán)會(huì)在紅外光譜上產(chǎn)生特定的吸收峰,例如,C=O、N-H、C-H等基團(tuán)的吸收特征非常明顯,能夠幫助用戶迅速定位到樣品的分子結(jié)構(gòu)。 結(jié)果驗(yàn)證與報(bào)告 為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性,用戶需對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證??梢酝ㄟ^(guò)對(duì)比不同批次樣品的光譜結(jié)果,或者使用其他分析方法(如GC-MS、NMR)進(jìn)行輔助驗(yàn)證。如果光譜數(shù)據(jù)與已知標(biāo)準(zhǔn)相符,則可以確認(rèn)樣品的成分與結(jié)構(gòu)。 在完成數(shù)據(jù)分析后,生成的報(bào)告需詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)條件、樣品信息、光譜圖及分析結(jié)論。報(bào)告的準(zhǔn)確性對(duì)于后續(xù)的科研工作或質(zhì)量控制至關(guān)重要。 總結(jié) 傅立葉紅外光譜儀作為一種強(qiáng)大的分析工具,其操作過(guò)程雖有一定復(fù)雜性,但通過(guò)合理的樣品準(zhǔn)備、設(shè)備設(shè)置、數(shù)據(jù)采集與分析,可以得到高精度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。精確的操作步驟和科學(xué)的分析方法是確保結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。通過(guò)對(duì)傅立葉紅外光譜技術(shù)的掌握,不僅能夠提高實(shí)驗(yàn)效率,更能為材料分析和化學(xué)研究提供有力的支持。
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- 2024-11-20 16:17:53紅外光譜儀有哪些功能?如何做好清潔保養(yǎng)?
- 紅外光譜儀如何清潔:保持儀器性能的關(guān)鍵紅外光譜儀作為一種精密的分析儀器,在化學(xué)、制藥、環(huán)境監(jiān)測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。由于其高度敏感的性質(zhì),任何污漬、灰塵或其他污染物都可能影響其測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,定期且正確的清潔紅外光譜儀,不僅能延長(zhǎng)儀器的使用壽命,還能確保測(cè)試數(shù)據(jù)的可靠性。本文將詳細(xì)介紹如何清潔紅外光譜儀,幫助用戶正確維護(hù)這一高精密儀器。一、清潔前的準(zhǔn)備工作在進(jìn)行任何清潔操作之前,首先要確保紅外光譜儀已完全關(guān)閉,并拔掉電源插頭。斷電不僅是為了安全,也能避免在清潔過(guò)程中不小心操作引發(fā)儀器損壞。隨后,準(zhǔn)備一些必要的清潔工具,如超細(xì)纖維布、專用清潔液、氣吹器、鏡頭紙以及棉簽等。這些工具能夠有效地清除表面污漬和細(xì)小灰塵,同時(shí)不會(huì)對(duì)儀器造成損傷。二、清潔外部表面紅外光譜儀的外部表面通常會(huì)積累灰塵、指紋等污漬。為避免這些污染物影響儀器的外觀和操作,應(yīng)使用超細(xì)纖維布進(jìn)行擦拭。超細(xì)纖維布具有良好的吸附性能,可以輕松清除表面灰塵,且不容易刮傷儀器表面。如果污漬較為頑固,可以輕輕噴灑一些專業(yè)的清潔液,然后用布擦拭干凈。對(duì)于一些細(xì)小的縫隙和按鈕等難以觸及的部位,可以使用氣吹器清除灰塵。氣吹器的氣流能夠有效去除細(xì)小顆粒,避免用手觸碰而可能帶來(lái)的污染或刮傷。三、清潔光學(xué)部件紅外光譜儀的光學(xué)部件,如鏡頭、透鏡和光纖等,是影響測(cè)量結(jié)果精度的重要因素。因此,這些部件的清潔需要特別小心。通常,可以使用專用鏡頭紙和少量的清潔液,輕輕擦拭光學(xué)鏡頭。務(wù)必避免使用硬物或過(guò)于濕潤(rùn)的布料,以免損壞光學(xué)表面。在清潔過(guò)程中,要注意操作的輕柔度,并避免過(guò)度摩擦。鏡頭上的指紋或污漬可以通過(guò)鏡頭紙輕松去除,但如有較頑固的污染物,可以借助棉簽沾少量清潔液進(jìn)行擦拭。四、清潔內(nèi)部部件紅外光譜儀的內(nèi)部部件,如光源、探測(cè)器和光學(xué)模塊,通常需要專業(yè)人員進(jìn)行清潔。如果需要自己進(jìn)行內(nèi)部清潔,應(yīng)非常小心??梢允褂脷獯灯鬏p輕吹去內(nèi)部積塵,避免使用任何液體清潔劑,以免液體進(jìn)入儀器內(nèi)部造成損壞。如果發(fā)現(xiàn)有較大的污漬或污垢,建議尋求專業(yè)的維護(hù)服務(wù),以確保不會(huì)影響儀器的性能。五、定期檢查與維護(hù)除了日常的清潔工作外,紅外光譜儀還需要定期進(jìn)行維護(hù)檢查。這包括校準(zhǔn)光譜儀、檢查光源的穩(wěn)定性和探測(cè)器的靈敏度等。定期的專業(yè)維護(hù)不僅能確保儀器的精度和穩(wěn)定性,還能幫助發(fā)現(xiàn)潛在的問(wèn)題,防止出現(xiàn)故障。
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- 2023-06-05 09:39:20傅立葉變換紅外光譜儀測(cè)定粉塵中游離二氧化硅含量
- 關(guān)鍵詞:紅外光譜儀 定量檢測(cè) 游離二氧化硅 在電力、煤炭等行業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中,粉塵中游離二氧化硅含量較高,粉塵的分散度也比較高,即多為呼吸性粉塵,因此對(duì)作業(yè)人員的危害較大,主要包括鼻炎、咽炎、氣管炎、支氣管炎等呼吸系統(tǒng)疾病。因此,加強(qiáng)對(duì)粉塵中游離二氧化硅含量的檢測(cè)是一件非常重要和緊迫的工作。以往檢測(cè)均采用“焦磷酸重量法”,該方法存在操作步驟復(fù)雜、使用試劑種類繁多、檢測(cè)周期長(zhǎng)、準(zhǔn)確性差、試驗(yàn)室條件要求苛刻等一系列問(wèn)題,難以滿足現(xiàn)場(chǎng)批量檢測(cè)的要求。為了提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性,實(shí)現(xiàn)批量檢測(cè)的目的,可選用FTIR920型傅立葉變換紅外光譜儀來(lái)檢測(cè)粉塵中游離二氧化硅含量。檢測(cè)原理:α-石英在紅外光譜中于 12.5μm(800cm-1)、12.8μm(780cm-1)及 14.4(694cm-1)μm處出現(xiàn)特異性強(qiáng)的吸收帶,在一定范圍內(nèi),其吸光度值與α-石英質(zhì)量成線性關(guān)系。通過(guò)測(cè)量吸光度,進(jìn)行定量測(cè)定。儀器配置:制樣準(zhǔn)備:瓷坩堝和坩堝鉗;箱式電阻爐或低溫灰化爐;十萬(wàn)分之一天平;200目過(guò)濾篩;濾紙、稱量紙 若干;無(wú)水乙醇;手套、脫脂棉、小藥勺、玻璃取樣瓶;游離二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)品(純度高于95%);采集的粉塵樣品。樣品的采集:根據(jù)測(cè)定目的,樣品的采集方法參見(jiàn) GBZ 159 和 GBZ/T 192.2 或 GBZ/T 192.1,濾膜上采集的粉塵量大于 0.1mg 時(shí),可直接用于本法測(cè)定游離二氧化硅含量。測(cè)定:1、樣品處理準(zhǔn)確稱量采有粉塵的濾膜上粉塵的質(zhì)量(G)。然后將受塵面向內(nèi)對(duì)折 3 次,放在瓷坩堝內(nèi),置于低溫灰化爐或電阻爐(小于 600℃)內(nèi)灰化,冷卻后,放入干燥器內(nèi)待用。稱取 250mg 溴化鉀和灰化后的粉塵樣品一起放入瑪瑙乳缽中研磨混勻后,連同壓片模具一起放入干燥箱(110℃±5℃)中10min。將干燥后的混合樣品置于壓片模具中,加壓25MPa,持續(xù) 3min,制備出的錠片作為測(cè)定樣品。同時(shí),取空白濾膜一張,同樣處理,作為空白對(duì)照樣品。2、石英標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確稱取不同質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)α-石英塵(0.01mg ~1.00mg),分別加入250mg 溴化鉀,置于瑪瑙乳缽中充分研磨均勻,按上述樣品制備方法做出透明的錠片。將不同質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)石英錠片置于樣品室光路中進(jìn)行掃描,紅外軟件以 X 軸橫坐標(biāo)記錄 1000cm-1~600cm-1 的譜圖,在 900cm-1 處校正零點(diǎn)和 100%,以 Y 軸縱坐標(biāo)表示吸光度。以 800cm-1、780cm-1 及 694cm-1 三處的吸光度值為縱坐標(biāo),以石英質(zhì)量(mg)為橫坐標(biāo),繪制三條不同波長(zhǎng)的α-石英標(biāo)準(zhǔn)曲線,并求出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式。在無(wú)干擾的情況下,一般選用 800 cm-1標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分析。3、樣品測(cè)定分別將樣品錠片與空白對(duì)照樣品錠片置于樣品室光路中進(jìn)行掃描,記錄800cm-1(或 694cm-1)處的吸光度值,重復(fù)掃描測(cè)定 3 次,測(cè)定樣品的吸光度均值減去空白對(duì)照樣品的吸光度均值后,由α-石英標(biāo)準(zhǔn)曲線得樣品中游離二氧化硅的質(zhì)量(m)。計(jì)算 按以下公式計(jì)算粉塵中游離二氧化硅的含量:SiO2(F)= m/G× 100公式中:SiO2(F)——粉塵中游離二氧化硅(α-石英)的含量,%;m——測(cè)得的粉塵樣品中游離二氧化硅的質(zhì)量,mg;G——粉塵樣品質(zhì)量,mg。注意事項(xiàng)1、本法的α-石英檢出量為 0.01mg;相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)為 0.64%~1.41%。2、粉塵粒度大小對(duì)測(cè)定結(jié)果有一定影響,因此,樣品和制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的石英塵應(yīng)充分研磨,使其粒度小于 5μm 者占 95%以上,方可進(jìn)行分析測(cè)定。3、灰化溫度對(duì)煤礦塵樣品定量結(jié)果有一定影響,若煤塵樣品中含有大量高嶺土成分,在高于 600℃灰化時(shí)發(fā)生分解,于 800cm-1 附近產(chǎn)生干擾,如灰化溫度小于 600℃時(shí),可消除此干擾帶。4、在粉塵中若含有粘土、云母、閃石、長(zhǎng)石等成分時(shí),可在 800cm-1 附近產(chǎn)生干擾,則可用 694cm-1 的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分析。5、為降低測(cè)量的隨機(jī)誤差,實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)控制在 18℃~24℃,相對(duì)濕度小于 50%為宜。制備石英標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的分析條件應(yīng)與被測(cè)樣品的條件完全一致,以減少誤差。
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- 2023-01-12 17:17:57Ramina 應(yīng)用實(shí)例|實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)性能測(cè)試
- 前言拉曼光譜在復(fù)雜水體系中反映組分微小變化的能力深化了該技術(shù)在生物制藥過(guò)程分析(如生物反應(yīng)器中的細(xì)胞生長(zhǎng))方面的應(yīng)用。拉曼光譜儀技術(shù)可以實(shí)時(shí)、原位和無(wú)損地監(jiān)測(cè)生物制藥生產(chǎn)過(guò)程,可用于復(fù)雜化學(xué)體系的連續(xù)過(guò)程監(jiān)測(cè)。拉曼光譜技術(shù)在生物反應(yīng)過(guò)程中可檢測(cè)大量代謝物變化的能力已將該技術(shù)提升為強(qiáng)大的過(guò)程分析工具。實(shí)驗(yàn)概述拉曼光譜分析光學(xué)探頭具有可重復(fù)使用的特點(diǎn),通過(guò)減少運(yùn)行間的可變性來(lái)提高過(guò)程監(jiān)測(cè)的可重復(fù)性和可靠性。Thermo Scientific? Ramina? 過(guò)程分析儀可匹配多個(gè)光纖探頭。MarqMetrix 生物反應(yīng)器球形探頭是專為滿足生物工藝工業(yè)的要求而設(shè)計(jì)的,可以搭載到 Ramina 過(guò)程分析儀上使用。這些探頭具有快速、易于更換和連接以及耐用等特點(diǎn),可以進(jìn)行無(wú)菌處理,比如離線的高壓滅菌。DynaDrive 一次性生物反應(yīng)器(S.U.B.)是 S.U.B. 技術(shù)的最 新產(chǎn)品,為大規(guī)模生物生產(chǎn)提供了更好的性能,并具備可擴(kuò)展性。與傳統(tǒng)的 S.U.B. 設(shè)計(jì)相比,長(zhǎng)方體的罐體具有幾個(gè)關(guān)鍵優(yōu)勢(shì),包括優(yōu)越的混合和傳質(zhì)能力以及更好的可擴(kuò)展性。本應(yīng)用介紹了Ramina過(guò)程分析儀系統(tǒng)與 500L HyPerforma DynaDrive 生物反應(yīng)器的集成,并實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵過(guò)程參數(shù)(CPPs)的在線測(cè)量,通過(guò)采集整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)過(guò)程中連續(xù)生成的光譜數(shù)據(jù)建立起若干參數(shù)和代謝物的精確預(yù)測(cè)模型。材料與方法細(xì)胞培養(yǎng)和喂養(yǎng)策略細(xì)胞培養(yǎng)在500L HyPerforma DynaDrive S.U.B 中進(jìn)行(見(jiàn)下圖1),其中包含體積約為320L細(xì)胞培養(yǎng)基,在36.5℃,pH=6.9+/-0.3, DO=50%的條件下接種0.5x106個(gè)細(xì)胞/mL。體系的 pH 值通過(guò)添加二氧化碳?xì)怏w和碳酸鈉來(lái)控制。細(xì)胞在化學(xué)定義的培養(yǎng)基中生長(zhǎng),從第3天開(kāi)始每天進(jìn)行兩步喂養(yǎng)過(guò)程。第 一種喂養(yǎng)介質(zhì)以起始體積的重量為4%添加,第二種喂養(yǎng)介質(zhì)以0.4%添加。第6天體系溫度轉(zhuǎn)為33°C。試驗(yàn)在14天后終止。生物反應(yīng)器避光處理以防止雜散光干擾。在高壓滅菌后,將 Ramina 過(guò)程分析儀生物反應(yīng)器球形探頭插入HyPerforma DynaDrive S.U.B. 中,進(jìn)行在線實(shí)時(shí)拉曼光譜數(shù)據(jù)采集。圖1.500L Thermo Scientific HyPerforma DynaDrive S.U.B. 細(xì)胞培養(yǎng)罐Ramina 過(guò)程分析儀測(cè)試使用 Ramina 過(guò)程分析儀進(jìn)行數(shù)據(jù)采集(見(jiàn)下圖2), Ramina 過(guò)程分析儀的生物反應(yīng)器球形探頭直接浸入在生物反應(yīng)器(500L) 中,每平均20次測(cè)量獲取一張拉曼光譜數(shù)據(jù),積分/曝光時(shí)間為3秒,激光功率設(shè)置為450mW。每個(gè)數(shù)據(jù)光譜的總采集時(shí)間為2分鐘,在 Ramina 過(guò)程分析儀用以建立模型數(shù)據(jù)與離線儀器分析通過(guò)匹配時(shí)間戳以確認(rèn)。圖2.Thermo Scientific? Ramina? 在線拉曼分析儀化學(xué)計(jì)量學(xué)模型建立來(lái)自多臺(tái) Ramina 過(guò)程分析儀、探頭和生物反應(yīng)器的數(shù)據(jù)被用于創(chuàng)建模型。訓(xùn)練數(shù)據(jù)集從每個(gè)生物反應(yīng)器的45個(gè)樣本中收集,以創(chuàng)建每個(gè)化學(xué)計(jì)量學(xué)模型。對(duì)光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行了檢查,剔除了由宇宙射線引起的異常譜峰。選擇感興趣的光譜區(qū)域,并對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理,以去除基線干擾并優(yōu)化信噪比。建模過(guò)程中測(cè)試了許多預(yù)處理技術(shù),包括Savitzky Golay濾波、自動(dòng)Whitaker平滑、多元散射校正、SNV和均值中心化。根據(jù)建模的關(guān)注點(diǎn)選擇優(yōu)化不同的預(yù)處理技術(shù)。為每個(gè)感興趣的組分創(chuàng)立偏最小二乘(PLS)模型并進(jìn)行交叉驗(yàn)證以測(cè)試每個(gè)模型的優(yōu)化的效果。這些組分包括葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺、谷氨酸、TCD、VCD和其他在生物反應(yīng)器培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的常見(jiàn)代謝物。結(jié)果在這項(xiàng)工作中,在線拉曼光譜儀應(yīng)用于連續(xù)分批補(bǔ)料 CHO 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程。使用拉曼光譜監(jiān)測(cè)工藝參數(shù)首先需要使用外部校準(zhǔn)數(shù)據(jù)集(獨(dú)立離線數(shù)據(jù))建立化學(xué)計(jì)量學(xué)模型,通過(guò)對(duì)感興趣的參數(shù)的離線分析數(shù)據(jù)和對(duì)應(yīng)的在線拉曼光譜數(shù)據(jù)的關(guān)聯(lián)關(guān)系建立模型。
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