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2025-01-10 17:04:26拋物線飛行模型及實(shí)驗(yàn)方案: 拋物線飛行模型模擬了無(wú)重力環(huán)境，通過(guò)飛行器沿拋物線軌跡飛行，在上升和下降階段的頂點(diǎn)附近產(chǎn)生短暫的微重力環(huán)境。實(shí)驗(yàn)方案通常包括確定飛行參數(shù)、搭載科學(xué)實(shí)驗(yàn)裝置、安排實(shí)驗(yàn)步驟及數(shù)據(jù)采集等。在飛行過(guò)程中，科研人員會(huì)利用這一短暫時(shí)間窗口進(jìn)行材料科學(xué)、生物學(xué)、物理學(xué)等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)，觀察在無(wú)重力條件下物質(zhì)的行為變化。這種模型對(duì)于研究太空環(huán)境對(duì)物質(zhì)的影響具有重要意義。

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為什么坐飛機(jī)以后會(huì)疲勞？免疫力監(jiān)測(cè)來(lái)揭秘

全血在采集后的4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行處理，采用了DuraClone IM panel中的 DuraClone IM 表型基礎(chǔ)方案、DuraClone IM B細(xì)胞方案、DuraClone IM T細(xì)胞亞群方案

 貝克曼庫(kù)爾特商貿(mào)（中國(guó)）有限公司 488
2022-10-02
拋物線飛行模型及實(shí)驗(yàn)方案

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拋物線飛行模型及實(shí)驗(yàn)方案問(wèn)答

2022-08-09 15:01:18ibidi實(shí)驗(yàn)方案|腫瘤細(xì)胞2D侵襲檢測(cè)方案: AnielloFederico*,JochenUtikalSkinCancerUnit,GermanCancerResearchCenter(DKFZ),69120Heidelberg,Germany.*Correspondingauthor.E-mailaddress:a.federico@dkfz-heidelberg.de為了研究腫瘤微環(huán)境影響下腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性和侵襲特性，建立了體外2D侵襲方案。這種2D侵襲方案是一種共培養(yǎng)試驗(yàn)，在這種情況下，是由腫瘤和基質(zhì)細(xì)胞（例如成纖維細(xì)胞）組成的。一旦兩種細(xì)胞類型接觸，在不同的條件下評(píng)估侵襲成纖維細(xì)胞單層的腫瘤細(xì)胞的數(shù)量，在我們的研究中，我們?cè)谀M實(shí)體腫瘤微環(huán)境中發(fā)現(xiàn)的條件，例如與基質(zhì)細(xì)胞（成纖維細(xì)胞）的相互作用以及成纖維細(xì)胞釋放的可溶性因子（Nnetu等，2012）。我們使用A375黑色素瘤細(xì)胞系和真pi成纖維細(xì)胞進(jìn)行了此測(cè)定。黑色素瘤細(xì)胞激活成纖維細(xì)胞，繼而維持腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，惡性轉(zhuǎn)化和耐藥性（Flach等，2011）。然而，在刺激所測(cè)試的抗ai化合物后，我們發(fā)現(xiàn)與成纖維細(xì)胞直接接觸的黑素瘤細(xì)胞顯示出運(yùn)動(dòng)能力受損并且未能侵襲成纖維細(xì)胞層。材料和試劑1. GFP-A375細(xì)胞系（ATCC）2. 番茄皮成纖維細(xì)胞（從健康患者中分離）3. MEF細(xì)胞培養(yǎng)基4.PBS（Sigma-Aldrich；D8537）5.胰蛋白酶-EDTA溶液（Sigma-Aldrich；T3924）6. 臺(tái)盼藍(lán)溶液（Sigma-Aldrich;93595）7.DMSO（CarlRoth;A994.2），在0.1％最終濃度下使用8.MithramycinA（BioTrend；10-2085-5mg），在300nm濃度下使用，用DMSO稀釋儀器設(shè)備1. 層流凈化罩2. 12/24孔多孔板（GreinerBio-One）3. 臺(tái)式離心機(jī)4. 細(xì)胞計(jì)數(shù)器5. 2孔插件（ibidi: 80209）/預(yù)置2孔插件培養(yǎng)皿（ibidi:81176）6.細(xì)胞培養(yǎng)管7. 渦旋8. 鑷子9. 光學(xué)顯微鏡10. 熒光顯微鏡11. NIS-Elements軟件ibidi:81176實(shí)驗(yàn)流程01. 將GFP-A375和番茄成纖維細(xì)胞系穩(wěn)定地保存在MEF培養(yǎng)基中，在37°C和5%C02加濕培養(yǎng)箱中。02. 當(dāng)細(xì)胞達(dá)到亞融合度（約80％融合度）時(shí)，在帶有PBS的通風(fēng)櫥中清洗它們，以去除死細(xì)胞和碎片。03. 在培養(yǎng)箱中用胰蛋白酶-EDTA溶液胰蛋白酶消化細(xì)胞約5分鐘，然后添加MEF培養(yǎng)基以阻止反應(yīng)。04. 將細(xì)胞懸浮液收集在15ml細(xì)胞培養(yǎng)管中，并用臺(tái)式離心機(jī)（1500xg,5′,RT）短暫離心。05. 將細(xì)胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)基中；將一體積的細(xì)胞懸液與另一體積的臺(tái)盼藍(lán)溶液混合，用細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)活細(xì)胞。06. 在MEF緩沖液中以4x105細(xì)胞/ml的濃度稀釋細(xì)胞。07. 在多孔板上，在每個(gè)孔的中間放置一個(gè)Culture-Insert2孔（2孔培養(yǎng)插件）。08. 用75μl（3x104細(xì)胞）FP-A375細(xì)胞填充插入物一側(cè)，并用番茄成纖維細(xì)胞填充另一側(cè)。用移液器上下混合插入物中的細(xì)胞，以確保細(xì)胞完全分布。09. 將多孔板放在培養(yǎng)箱中，放置過(guò)夜。10. 第二天，在鑷子的幫助下，小心地從每孔中取出培養(yǎng)基和插件，并用PBS清洗。11. 小心除去PBS，然后加入新鮮的MEF培養(yǎng)基。12. 用光學(xué)顯微鏡檢查GPF-A375與Tomto成纖維細(xì)胞之間產(chǎn)生的間隙的閉合狀態(tài)。13. 一旦每個(gè)孔中的間隙完全閉合，請(qǐng)使用熒光顯微鏡和成像軟件獲取熒光圖像。確保腫瘤細(xì)胞尚未侵入成纖維細(xì)胞單層。14. 小心地除去培養(yǎng)基，并在控制組孔中添加培養(yǎng)基+0.1％PBS，在處理組孔中添加培養(yǎng)基+300nM絲裂霉素A。將板放在培養(yǎng)箱中24小時(shí)（處理孵育時(shí)間）。24小時(shí)后，在熒光顯微鏡下重新采集共培養(yǎng)孔，以評(píng)估治療組與對(duì)照組（綠色熒光細(xì)胞散布在紅色標(biāo)記層上）的腫瘤細(xì)胞侵襲行為的任何變化（圖2）。圖1：2D侵襲系統(tǒng)的示意圖圖2：2D侵襲檢測(cè)的熒光圖像將黑素瘤細(xì)胞和成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，然后暴露于300nmMithramycinA（或DMSO）。24小時(shí)后，評(píng)估侵襲成纖維細(xì)胞層的腫瘤細(xì)胞的數(shù)目。A375細(xì)胞顯示出大規(guī)模的侵襲行為，受到MithramycinA治療的損害。比例尺：500μm。備注：1.此處描述了MEF培養(yǎng)基組成（參考文獻(xiàn)1）。2.此文僅供參考。3.此實(shí)驗(yàn)方案來(lái)自ibidi的實(shí)際用戶，更多詳情可聯(lián)系本文作者。參考文獻(xiàn)：1.MithramycinAandmithralogEC-8042inhibitSETDB1expressionanditsoncogenicactivityinmalignantmelanoma. FedericoA,SteinfassT,LarribèreL,NovakD,MorísF,Nú?ezLE,UmanskyV,UtikalJ.MolelucarTherapy-Oncolytics2020;doi: https://doi.org/10.1016/j.omto.2020.06.001 (Methoddescribedinthisprotocolwasincludedinthispublishedarticle).2.Theimpactofjammingonboundariesofcollectivelymovingweak-interactingcells. NnetuKD,KnorrM,K?sJ,ZinkM.NewJournalofPhysics2012;doi:https://doi.org/10.1088%2F1367-2630%2F14%2F11%2F1150123.Fibroblastscontributetomelanomatumorgrowthanddrugresistance. FlachEH,RebeccaVW,HerlynM,SmalleyKS,AndersonAR.Molecular pharmaceutics2011;doi:10.1021/mp200421k

2022-06-21 17:34:18“沃”的實(shí)驗(yàn) | 免費(fèi)直播！腦缺血模型構(gòu)建及檢測(cè)，助你快速掌握要領(lǐng)！: 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物該怎么選擇？不同腦缺血模型，弄不清對(duì)應(yīng)構(gòu)建方法？常用的血流監(jiān)測(cè)技術(shù)，你都掌握了嗎？「全線賦能·“沃”的實(shí)驗(yàn)」之實(shí)驗(yàn)方法實(shí)戰(zhàn)教程直播第五期為大家聚焦《腦缺血模型構(gòu)建及檢測(cè)》從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、不同模型的分類各個(gè)模型的構(gòu)建方法到血流監(jiān)測(cè)技術(shù)兩位老師將進(jìn)行綜合詳細(xì)的講解全面助力你的科研實(shí)驗(yàn)研究直播時(shí)間6月21日（周二）19：00報(bào)名方式識(shí)別上方二維碼，立即免費(fèi)報(bào)名主題：腦缺血模型構(gòu)建腦缺血研究背景腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ蜆?gòu)建腦缺血模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)儀器講師：孫紹強(qiáng)瑞沃德行業(yè)解決方案專家，在膜片鉗/鈣成像/干細(xì)胞誘導(dǎo)方面有著豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，曾參與多項(xiàng)重大研發(fā)及自然科學(xué)基金項(xiàng)目，曾在Cell Stem Cell 上發(fā)表論文，專注于神經(jīng)疾病，腦缺血及神經(jīng)退行性疾病模型制備和機(jī)制研究，已為上百家客戶提供專業(yè)的神經(jīng)疾病整體解決方案。主題：腦卒中研究中的血流監(jiān)測(cè)技術(shù)激光多普勒激光散斑超聲多普勒核磁共振成像雙光子顯微鏡講師：殷維君瑞沃德微循環(huán)監(jiān)測(cè)解決方案專家，在生理信號(hào)監(jiān)測(cè)和血流血氧成像領(lǐng)域擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)，主導(dǎo)動(dòng)物活體成像解決方案的設(shè)計(jì)及優(yōu)化，專注于臨床及臨床前微循環(huán)監(jiān)測(cè)解決方案的構(gòu)建。上期直播間互動(dòng)問(wèn)題這次我們?nèi)繛樾』锇榻獯餛1：組織剪切的大小有沒有具體要求，腫瘤組織一般2-4mm可以嗎？A1：這要根據(jù)組織類型去判斷，一般會(huì)預(yù)處理成10mm左右的組織塊，太大可能會(huì)導(dǎo)致處理不完全，太小可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡增加，甚至導(dǎo)致樣本變稠等。Q2：細(xì)胞活率80%就可以了嗎，看到一些資料寫的都要90%以上。A2：這個(gè)需要根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)的需求靈活調(diào)整，如果樣本存活率不能達(dá)到要求的話，除了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件以外，還可以通過(guò)一些死細(xì)胞去除的試劑來(lái)優(yōu)化已獲得的樣本。Q3：低溫解離細(xì)胞與常規(guī)的37度制備單細(xì)胞優(yōu)勢(shì)分別是什么？區(qū)別是什么？A3：37℃條件下進(jìn)行組織解離，由于細(xì)胞轉(zhuǎn)錄活躍，因此解離過(guò)程中基因表達(dá)可能會(huì)發(fā)生改變，可能會(huì)干擾應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)，所以在進(jìn)行snRNA-seq時(shí)可以通過(guò)使用冷活性酶釋放細(xì)胞核，同時(shí)一些熱敏感或者脆弱的細(xì)胞更適合采用低溫解離的分離方式，但是低溫條件對(duì)一些質(zhì)密難解離的組織的處理效率可能會(huì)降低。另外，溫度對(duì)不同細(xì)胞種類也有一定影響，比如在進(jìn)行腦組織解離時(shí)，熱解離可能會(huì)影響神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的獲取，但是會(huì)大量富集小膠質(zhì)細(xì)胞，所以在進(jìn)行組織解離時(shí)，根據(jù)獲得目的細(xì)胞的需求要靈活調(diào)整解離方案。Q4：裂紅處理有什么注意事項(xiàng)嗎？A4：如果直徑6-8μm的細(xì)胞占比較高，且有核率偏低，這表明紅細(xì)胞含量可能較多，需要進(jìn)行紅細(xì)胞裂解，如果紅細(xì)胞裂解依然不干凈，不建議增大裂解體系，建議適當(dāng)延長(zhǎng)裂紅時(shí)間，或適當(dāng)增加裂紅次數(shù)。Q5：流式染色時(shí)間及溫度如何選擇？A5：染色本身取決于抗體抗原之間的結(jié)合能力，染色時(shí)間和溫度，受限于抗體濃度，一般根據(jù)選擇抗體的說(shuō)明書推薦的濃度和孵育時(shí)間、溫度選擇。我的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)：當(dāng)不清楚說(shuō)明書的情況，我會(huì)選擇室溫染色12-15min（取決于抗體濃度微調(diào)），或4度冰上30min。注意染色時(shí)間盡量不要讓細(xì)胞破損，否則死細(xì)胞碎片會(huì)影響流式結(jié)果。此外細(xì)胞消化完畢后應(yīng)該盡快染色處理，特別是一些凋亡染色、胞內(nèi)酶染色為保持細(xì)胞物質(zhì)活性，應(yīng)盡快染色。Q6：請(qǐng)問(wèn)流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中單抗進(jìn)行熒光需要什么樣的對(duì)照？A6：關(guān)于對(duì)照設(shè)置，這個(gè)比較復(fù)雜，一般我們是選擇同型對(duì)照作為陰性對(duì)照組，得到的結(jié)果往往是比較好的。所謂的同型對(duì)照就是同種屬同亞型、相同熒光標(biāo)記物、使用劑量和濃度相同，且屬于非特異性結(jié)合的抗體為同型對(duì)照組。通常用來(lái)消除抗體與抗原的非特異性結(jié)合造成的背景染色。還有一類就是最常見的純陰性對(duì)照，檢測(cè)細(xì)胞群不進(jìn)行任何抗體處理，直接進(jìn)行流式檢測(cè)，這就是簡(jiǎn)單消除細(xì)胞和溶劑本身的影響，這種方法的好處是節(jié)約抗體，畢竟抗體很貴。Q7：如何減少補(bǔ)償?shù)母蓴_？A7：補(bǔ)償干擾往往是多激光的流式儀器才會(huì)發(fā)生一定干擾情況，此時(shí)，可以根據(jù)抗體公司提供的染料搭配方案選擇比較好，也就是發(fā)射光譜的波長(zhǎng)峰盡量不重疊的染料，這樣補(bǔ)償干擾會(huì)盡量消除。因此，往往需要查看染料的波長(zhǎng)范圍，此外，對(duì)于4色以上的多色標(biāo)記情況，一般不常見，此時(shí)往往染料的波長(zhǎng)范圍難以避免的重疊，這時(shí)候，推薦使用抗體公司推薦的配色方案，盡量避免發(fā)射光譜的重疊。此外很多流式儀器配套軟件都帶一定算法對(duì)補(bǔ)償進(jìn)行修正，可以適當(dāng)修正這個(gè)影響。Q8：細(xì)胞自發(fā)熒光如何解決？A8：細(xì)胞自發(fā)熒光往往是細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)帶有熒光，植物細(xì)胞因?yàn)槿~綠素原因會(huì)自帶一定熒光，然后一些藥物處理下，藥物本身帶有發(fā)色基團(tuán)，也可能自熒光，此時(shí)，純陰性對(duì)照的設(shè)置可以補(bǔ)償一定的情況。然后就是染料的選擇情況，染料熒光波長(zhǎng)范圍避免與細(xì)胞自發(fā)熒光的波長(zhǎng)的重疊，這樣會(huì)比較好一些。我之前做藥物的細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)時(shí)候，考慮到藥物的情況，就沒有使用常見的凋亡檢測(cè)的Annexin V染料，而改用Annexin V-APC 。盡量設(shè)置純陰性對(duì)照、有條件做下同型對(duì)照，往往可以在數(shù)據(jù)處理時(shí)候適當(dāng)減少部分因素的影響。這樣流式的結(jié)果會(huì)更好。如果您錯(cuò)過(guò)前四期直播課或想再回顧一遍戳這里→即可查看前四期直播回放↓↓本期直播記得預(yù)約噢，全程免費(fèi)還可進(jìn)群輕松獲取后續(xù)科研直播課信息以及更多豐富學(xué)術(shù)干貨~

2023-06-29 10:03:57報(bào)告分享 | 生態(tài)系統(tǒng)碳源碳匯立體監(jiān)測(cè)方案及實(shí)踐

2023-06-26 14:04:54報(bào)告分享 | 生態(tài)系統(tǒng)碳源碳匯立體監(jiān)測(cè)方案及實(shí)踐

2022-06-29 15:59:20ibidi實(shí)驗(yàn)方案|在流體環(huán)境下細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行粘附實(shí)驗(yàn): 　　該應(yīng)用描述了一種在流動(dòng)下的粘附試驗(yàn)，該試驗(yàn)旨在研究特定細(xì)胞表面分子的作用，以確定它們?cè)诩?xì)胞附著和粘附到其他細(xì)胞類型期間的潛在相互作用。　　對(duì)于我們的方法，我們使用預(yù)染色的鼠腫瘤細(xì)胞（多發(fā)性骨s瘤：MM）和鼠內(nèi)皮細(xì)胞（EC），然后使用單克隆抗體阻斷我們感興趣的分子之一。簡(jiǎn)而言之，將EC接種到ibidi通道μ-SlidesI0.6mmLuer中，并在恒流下培養(yǎng)24小時(shí)。為了開始共培養(yǎng)，將標(biāo)記的MM細(xì)胞添加到流動(dòng)容器中并繼續(xù)流動(dòng)。24小時(shí)后，用抗體（以阻斷感興趣的分子）或相應(yīng)的同種型對(duì)照處理裝置，并保持流動(dòng)24小時(shí)。第二天，將μ-Slides與流體單元(FU)斷開并清洗以去除非粘附的MM細(xì)胞。為了分析標(biāo)記的MM細(xì)胞對(duì)EC的粘附，使用共聚焦顯微鏡獲得了μ-Slides的熒光圖像。　　1. 材料和試劑　　?MOPC多發(fā)性骨s瘤(MM)細(xì)胞系(ATCC,TIB-23?) 　　?EOMA內(nèi)皮細(xì)胞(EC)系(ATCC,CRL-2586?) 　　?含10%FCS的RPMI培養(yǎng)基（FisherScientific，11530586）　　?內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基（EC培養(yǎng)基、CellBiologics、M1168）　　?PBS（泛生物技術(shù)，P04-361000）　　?非酶細(xì)胞解離溶液（Sigma-Aldrich，C5914-100ML）　　?臺(tái)盼藍(lán)溶液（Sigma-Aldrich，93595）　　?CellTracker?綠色CMFDA染料（ThermoFisher，C7025）　　2. 設(shè)備和設(shè)置　　?帶有2個(gè)流體單元(FU)的ibidi泵系統(tǒng)，每個(gè)單元都帶有用于2ml儲(chǔ)液罐的支架（ibidi，10977）　　?ibidiμ-SlideI0.6mmLuer，ibiTreat（ibidi，80186）　　?ibidiPerfusionSet藍(lán)色，15厘米，內(nèi)徑0.8毫米（ibidi，10961）　　?ibidi過(guò)濾器/儲(chǔ)液罐套裝，2毫升（ibidi，10972）　　?帶細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備的層流罩　　?培養(yǎng)箱（所有培養(yǎng)步驟均在37°C和5%CO2下進(jìn)行）　　?帶有適當(dāng)濾光片組和照相機(jī)的熒光顯微鏡　　?粘度：0.0072(dynxs)/cm2 　　3.實(shí)驗(yàn)流程　　1.準(zhǔn)備EOMA細(xì)胞稀釋液：根據(jù)制造商的說(shuō)明，使用非酶細(xì)胞解離溶液分離先前培養(yǎng)的EOMA細(xì)胞。使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器（Neubauerchamber）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。在EC培養(yǎng)基中將細(xì)胞稀釋至1.2x106個(gè)細(xì)胞/ml的濃度。　　2.種入EOMA細(xì)胞：在3個(gè) μ-SlidesI0.6mmLuer（ibidi，80186）中加入150μlEOMA細(xì)胞稀釋液（每個(gè)μ-Slide1.75x105EOMA細(xì)胞），然后孵育3小時(shí)。表1：實(shí)驗(yàn)設(shè)置　　3.啟動(dòng)流量：播種三小時(shí)后，將2個(gè)μ-Slides連接到流體單元FU，使用總量2.7毫升EC培養(yǎng)基。在8.2mbar的壓力下將EOMA細(xì)胞表面的剪切應(yīng)力設(shè)置為0.5dyn/cm2。測(cè)量流速并使用兩個(gè)FU的平均值來(lái)計(jì)算校準(zhǔn)因子。提前孵育FU和連接的載玻片過(guò)夜。第三個(gè)帶有EOMA細(xì)胞的μ-Slide用作靜態(tài)控制。在沒有任何流動(dòng)的情況下孵育它過(guò)夜。　　4.準(zhǔn)備MM細(xì)胞：根據(jù)制造商的方案，用CellTrackerGreen(CMFDA)染料在600μlRPMI培養(yǎng)基（不含F(xiàn)CS）中染色6x105MM細(xì)胞。標(biāo)記后，離心細(xì)胞并使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器對(duì)其進(jìn)行計(jì)數(shù)。　　5.開始與MM細(xì)胞共培養(yǎng)：停止流動(dòng)并在無(wú)菌條件下從FU水庫(kù)中取出EC培養(yǎng)基。要開始共培養(yǎng)，將RPMI培養(yǎng)基（含10%FCS）和EC培養(yǎng)基以1:1的比例混合，并填充該混合物總體積為2.5ml，其中含有1.5x105MM注入兩個(gè)FU儲(chǔ)液罐。將FU重新連接到泵系統(tǒng)并繼續(xù)流動(dòng)24小時(shí)。　　6.分子阻斷：將MM細(xì)胞添加到ECs后24小時(shí)，用100μg/ml抗體（載玻片 #2）或相應(yīng)的同種型對(duì)照（載玻片 #1）處理細(xì)胞，將它們直接添加到FU，無(wú)需更換介質(zhì)。將孵育保持在流動(dòng)狀態(tài)下24小時(shí)。　　7.清洗和成像：從FU上斷開μ-Slides。用PBS清洗細(xì)胞一次，以去除任何非貼壁細(xì)胞。使用共聚焦顯微鏡獲取熒光圖像，以可視化附著在EC層上的標(biāo)記MM細(xì)胞。圖1：與同種型對(duì)照處理（左圖）相比，阻斷特定表面分子（右圖）時(shí)，MM細(xì)胞對(duì)ECs的粘附性降低