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2025-04-25 14:16:26腫瘤切除手術(shù): 腫瘤切除手術(shù)是一種外科治療方法，旨在通過切除患者體內(nèi)的腫瘤組織來達到治療目的。手術(shù)前需進行詳細的檢查和評估，確定腫瘤的位置、大小和性質(zhì)。手術(shù)過程中，醫(yī)生會小心分離并切除腫瘤，同時盡量保留周圍正常組織。術(shù)后需進行恢復(fù)和監(jiān)測，以防感染和并發(fā)癥。該手術(shù)適用于多種類型的腫瘤，是腫瘤治療的重要手段之一，但具體方案需根據(jù)患者病情和醫(yī)生建議制定。

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2021-12-08

腫瘤切除手術(shù)文章

腫瘤切除手術(shù)中陽性切緣檢測的革命：FFC變場核磁技術(shù)突破保乳手術(shù)困境

FFC（Fast Field-Cycling）變場核磁技術(shù)通過動態(tài)調(diào)控磁場強度，測量細胞中水質(zhì)子的T1弛豫時間，捕捉腫瘤與正常組織間水分子交換速率的差異，實現(xiàn)高對比度的術(shù)中檢測。

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低場核磁共振技術(shù)：革新腫瘤切除中陽性切緣的實時檢測

低場核磁共振技術(shù)在腫瘤切除手術(shù)切緣檢測方面優(yōu)勢盡顯，利用 T1 弛豫時間這一廣為人知的磁共振成像（MRI）參數(shù)進行高對比度區(qū)分。

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低場核磁共振技術(shù)腫瘤切除手術(shù)切緣檢測

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腫瘤切除手術(shù)問答

2023-02-15 14:27:47腫瘤疫苗生物學(xué)活性評估: 腫瘤疫苗背景腫瘤疫苗，是一種具有預(yù)防和治療潛力的有吸引力的替代免疫治療選擇，是近年研究的熱點之一。針對腫瘤相關(guān)抗原（Tumor-associated antigen,TAA）或腫瘤特異性抗原 (Tumor specific antigen,TSA) 的疫苗可以特異性地攻擊和破壞抗原過表達的惡性細胞，并由于免疫記憶而實現(xiàn)慢性治療反應(yīng)。因此，與其他免疫療法相比，癌癥疫苗提供了特異性、安全性和可耐受的治療。根據(jù)腫瘤抗原的組分，癌癥疫苗大致可以分為四種類型：基于 DNA 的疫苗，基于 RNA 的疫苗，基于多肽的疫苗和基于免疫細胞的疫苗。FDA 批準的首個個性化腫瘤疫苗 PROVENGE (Sipuleucel-T) 是一種基于免疫細胞的疫苗，用于激素難治性前列腺癌的治療。除此之外，Moderna，BioNTech 都在布局基于 mRNA 的腫瘤疫苗。圖 1 腫瘤疫苗抗原呈遞平臺示意圖腫瘤疫苗有效性評估方法生物體接種疫苗后，腫瘤抗原被帶到淋巴結(jié)，進而激活抗原特異性的 B 細胞和 T 細胞，活化的 B 細胞產(chǎn)生的抗體及活化的效應(yīng) T 細胞會使腫瘤內(nèi)脹并誘導(dǎo)腫瘤細胞死亡。圖 2 腫瘤疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)示意圖如何有效的評估腫瘤疫苗的有效性是一個非常值得探討的問題，常用的腫瘤疫苗有效性驗證的方法，包括細胞因子檢測、CTL 活性檢測、T 細胞活化標志物檢測、抗體滴度檢測、ADCC 檢測等。1、細胞因子檢測細胞因子是由免疫細胞經(jīng)過刺激而合成并分泌的小分子蛋白質(zhì)，在免疫應(yīng)答中起著非常重要的作用，因此可以通過細胞因子的分泌能力來反應(yīng)疫苗誘導(dǎo)的細胞免疫的水平。常見的細胞因子有白介素 (IL) 、干擾素 (IFN)、腫瘤壞死因子 (TNF) 等。下面比較了幾種常見的檢測方法。ELISA 是一種非常經(jīng)典的細胞因子的檢測方法，例如在王曉東等人發(fā)表的關(guān)于胃癌疫苗研究的文章中，提到了用 ELISA 的方法檢測接種疫苗后小鼠骨髓源樹突狀細胞（BMDCs）分泌細胞因子的能力，檢測方法如下：BMDCs 在含有 10ng/mL GM-CSF 和 10ng/mL IL-4 的 X-vivo 15 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，37℃下培養(yǎng) 6 天，然后以每孔 5×104 細胞的密度在 96 孔板中接種。以 5μM 或 10μM 的最終濃度加入疫苗抗原，孵育 24 小時。使用小鼠 TNF-α 和 IL-12 p70 ELISA Ready-SET-Go 試劑組定量培養(yǎng)上清中的 TNF-α 和 IL-12 。首先在 4℃下用捕獲抗體包被 ELISA 板過夜，然后在室溫下依次加入阻斷液、細胞培養(yǎng)上清和檢測抗體，孵育 1h 。最后加入終止液和顯色劑，用酶標儀 (BioTek) 在 450nm 處記錄 OD 值。檢測結(jié)果如下：從檢測結(jié)果可以看出，T7（TLR7 激動劑）的存在可以顯著提升 ML/MB 抗原誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。圖 3 ELISA 法測定小鼠骨髓樹突狀細胞 (BMDCs) 分泌TNF-α (a) 和 IL-12 (b) 的水平Ankita Leekha 等人發(fā)表的關(guān)于 SRAS-COV2 疫苗文章中，提到了用 ELISPOT 的方法評估細胞因子的分泌水平，可以作為參考。具體方法如下：從小鼠中分離脾細胞和肺細胞，使用小鼠 IFNγ ELISpot 基礎(chǔ)試劑盒和小鼠 IL4 ELISpot 基礎(chǔ)試劑盒 (Mabtech, VA, USA) 進行 IFNγ 和 IL4 ELISpot 檢測。在 37℃ 下，在預(yù)包被抗體的 ELISpot 板中，用抗原刺激脾細胞和肺細胞，培養(yǎng) 16-18 小時。第二天，洗掉細胞，加入生物素化的檢測抗體。洗板后，加入 1:30000 稀釋的 Extravidi-ALP 偶聯(lián)物，室溫孵育 1 小時。洗板后，每孔添加 70μL 顯色液，孵育 20-30min，形成斑點，然后用水清洗，干燥。使用 Cytation 7 (BioTek) 對斑點進行量化。每個點對應(yīng)一個單獨的細胞因子分泌細胞。檢測結(jié)果如下：圖 4 ELIPSOT 方法檢測小鼠脾細胞和肺細胞分泌細胞因子的水平2、CTL 活性檢測疫苗誘導(dǎo)的細胞毒性 T 淋巴細胞 (CTL) 可以直接殺傷腫瘤細胞，起到抗腫瘤的作用，因此可以通過檢測 CTL 的殺傷效應(yīng)來反應(yīng)疫苗的效果。常用的檢測細殺傷效應(yīng)的方法有很多，下表列舉了一些常用的方法。王曉東等人發(fā)表的文章中提到了 LDH 檢測，檢測方法如下：從接種疫苗小鼠的脾臟中分離淋巴細胞（效應(yīng)細胞）。EAC 腫瘤細胞（靶細胞）與淋巴細胞（效應(yīng)細胞-靶細胞比例為 50:1）共培養(yǎng) 4h，使用乳酸脫氫 (LDH) 法測定細胞毒性。將培養(yǎng) 4h 后的培養(yǎng)上清加入在 ELISA 板中，室溫下加入底物溶液，孵育 30min。最后，加入終止液終止反應(yīng)，并用酶標儀 (BioTek) 在 490nm 處檢測光密度。檢測結(jié)果如下：相對于 PBS 對照組來說，T7-MB 組 CTL 細胞具有顯著的殺傷效應(yīng)。圖 5 LDH 法測定 CTL 介導(dǎo)的 EAC 靶細胞的裂解水平3、抗體滴度及親和力檢測腫瘤疫苗除了可以誘導(dǎo)細胞免疫之外，也可誘導(dǎo)體液免疫，對此可通過對抗體滴度及親和力進行檢測來反應(yīng)疫苗抗腫瘤的效果，ELISA 是一種非常經(jīng)典的檢測方法。上述關(guān)于胃癌疫苗的文章中通過 ELISA 方法測定小鼠接種疫苗后血清中總 IgG 含量，具體檢測過程如下：小鼠接種疫苗后收集血液樣本，通過 3000g 離心 15 分鐘獲得血清樣本。ELISA 板預(yù)先在 4℃ 包被 BSA-MG1 過夜，然后在室溫下依次加載封閉溶液 2h，血清樣品 (1:50 稀釋) 和檢測抗體 1h。最后，在體系中加入 p-NPP 底物 (Millipore) 和終止液，用酶標儀 (BioTek) 在 405nm 處記錄 OD 值。檢測結(jié)果如下：相對于 PBS 對照組來說，T7-MB 組抗體含量明顯上升。圖6 ELISA法測定疫苗誘導(dǎo)的血清抗體水平除此之外，在 Emily C. Gale 等人發(fā)表的關(guān)于 mRNA 遞送系統(tǒng)及輔劑研究的文章中，通過 ELISA 的方法測定了 mRNA OVA 模式疫苗誘導(dǎo)的 OVA 特異性抗體的絕對含量及其親和力。具體檢測方法如下：抗體濃度：小鼠接種加強疫苗后，采集血液樣品，血清按照 1:100 000 進行稀釋。采用 anti-OVA mouse IgG1 ELISA (Cayman Chemicals) 試劑，按照試劑廠家的說明進行 ELISA 實驗。使用 Synergy H1 Microplate Reader (BioTek) 在 450nm 處記錄 OD 值。根據(jù)標準曲線計算血清抗體濃度，表示 mg/mL?？贵w親和性：將 12 個梯度稀釋的血清與恒定濃度標記 HRP 的 anti-OVA 抗體 (3nM) 混合，并在 OVA 抗原包被的板中室溫孵育 2 小時，洗板后用 TMB 底物孵育，用 HCl 停止反應(yīng)。測定 450nm 處的 OD 值。根據(jù)業(yè)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的單克隆抗體的共同親和力，假設(shè)對照抗體的 KD 為 1nM 對實驗組的 KD 值進行統(tǒng)計。這一假設(shè)僅影響報告的絕對 KD 值，而不影響實驗組之間的相對差異。檢測結(jié)果如下：pIC 為雙鏈 RNA 結(jié)構(gòu)模擬物，圖E中比較了可溶性的 pIC 和不同納米顆粒遞送系統(tǒng)誘導(dǎo)的絕對抗體含量，從圖 E 中可以看出 2B 遞送系統(tǒng)誘導(dǎo)的 OVA 特異性抗體含量最高。從F和G可以看出 2B 遞送系統(tǒng)相對于可溶性 pIC 來說誘導(dǎo)的 IgG 親和力也顯著升高。圖 7 pIC/PBAE NPs 增強體液免疫4、ADCC 檢測疫苗誘導(dǎo)體液免疫產(chǎn)生的抗體能夠捕捉目標抗原，阻斷這個靶分子的功能，也可以引導(dǎo)其他免疫細胞（如巨噬細胞和自然殺傷細胞）殺死表達抗原的靶細胞，在腫瘤治療中，特別是血液腫瘤中，抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒性作用 (ADCC) 起著關(guān)鍵作用，ADCC 常用的檢測方法包括細胞活力檢測、LDH 檢測、工程細胞株、Delfia、RTCA、細胞成像檢測等。王曉東等人發(fā)表的關(guān)于胃癌疫苗研究的文章中，提到了 LDH 方法檢測 ADCC，檢測方法如下：小鼠接種疫苗后，采集其血清樣本（1:25 稀釋），然后與 EAC 細胞（靶細胞）在 37°C 孵育 30min。使用小鼠 NK 細胞分離試劑盒從正常 BALB/c 小鼠中分離出自然殺傷 (NK) 細胞（效應(yīng)細胞），與抗體標記的 EAC 細胞以效靶比 50:1 共培養(yǎng) 4 小時。采用 LDH 法 (Promega) 測定細胞毒性，檢測方法與之前提到的 CTL 活性檢測的方法一致。檢測結(jié)果如下：相對于 PBS 對照組來說，T7-MB 組產(chǎn)生的抗體具有顯著的殺傷效應(yīng)。圖 8 LDH 法測定血清抗體介導(dǎo)的 EAC 靶細胞的裂解水平腫瘤疫苗生物學(xué)活性檢測解決方案推薦本文介紹了腫瘤疫苗活性檢測的常用方法，包括細胞因子檢測、CTL 活性檢測、抗體滴度及親和力檢測、ADCC 檢測等方法，涉及到了酶標儀、成像系統(tǒng)、流式、RTCA、洗板分液系統(tǒng)等設(shè)備。Agilent 細胞分析事業(yè)部可以從多個角度為用戶提供從樣品處理，到結(jié)果檢測再到數(shù)據(jù)分析的全面解決方案。

2023-06-25 11:45:31【Leica in Scope課程】前節(jié)手術(shù)的技術(shù)趨勢：術(shù)中OCT與3D可視化手術(shù): 第四期：前節(jié)手術(shù)的技術(shù)趨勢：術(shù)中OCT與3D可視化手術(shù)課程簡介：來自英國南安普頓大學(xué)醫(yī)院的David Anderson醫(yī)師和來自羅馬尼亞Oculus 眼科診所的Ozana Moraru博士將分享新興技術(shù)趨勢如何改變眼前節(jié)手術(shù)。他們將通過臨床病例和手術(shù)視頻討論術(shù)中OCT和3D的價值。講者：Mr. David Anderson 高級眼科顧問醫(yī)師南安普頓大學(xué)醫(yī)院英國Dr. Ozana Moraru眼科醫(yī)師歐科路斯眼科診所羅馬尼亞

2024-07-04 14:33:073D打印牙科專用樹脂：種植手術(shù)導(dǎo)板樹脂全面解析: 種植手術(shù)導(dǎo)板樹脂是一種用于牙科和醫(yī)療領(lǐng)域的光固化3D打印材料，它能夠幫助醫(yī)生在手術(shù)中準確定位種植體的位置、深度和角度，從而提高手術(shù)的成功率和種植體的長期穩(wěn)定性。種植手術(shù)導(dǎo)板樹脂具有優(yōu)異的生物相容性和高機械強度，支持高速成型，同時其高透明度、易于拋光、低吸水率的特點都可以滿足牙科應(yīng)用的需求。 01產(chǎn)品特點 1. 生物相容性導(dǎo)板樹脂必須滿足生物相容性的標準，以確保不會在人體內(nèi)部引起不良反應(yīng)。 2.高機械強度導(dǎo)板樹脂通常具有較高的機械強度，包括彎曲強度和抗沖擊強度，這使得它能夠承受一定的外力而不發(fā)生斷裂，是制作種植手術(shù)導(dǎo)板等需要高強度應(yīng)用場景的理想材料。 3.低吸水率導(dǎo)板樹脂材料具有較低的吸水率，在較為濕潤的口腔環(huán)境中，依然能保持模型的尺寸穩(wěn)定性。 4.易于拋光導(dǎo)板樹脂表面光滑，易于進行拋光處理，以達到更高的精度和美觀度，對于口腔科應(yīng)用尤為關(guān)鍵。 5.耐高溫蒸汽滅菌材料能夠耐受高溫蒸汽滅菌處理，保證在臨床使用前的無菌要求。 02產(chǎn)品應(yīng)用正畸導(dǎo)板、手術(shù)導(dǎo)板、功能性保持器、頜墊、咬合板、X光導(dǎo)板、其他正畸附件 03產(chǎn)品參數(shù)近年來，基于3D打印技術(shù)開發(fā)的數(shù)字化定制齒科解決方案在在口腔診療領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。導(dǎo)板樹脂的應(yīng)用過程簡單可分為“數(shù)據(jù)采集、診斷性分析、種植體三維設(shè)計、導(dǎo)板結(jié)構(gòu)設(shè)計、導(dǎo)板數(shù)據(jù)輸出、導(dǎo)板打印、導(dǎo)板引導(dǎo)下實施手術(shù)”等步驟。使用牙科導(dǎo)板樹脂進行3D打印得到的模型，精度更高，尺寸穩(wěn)定性更好，可以提高在植入手術(shù)中種植體的植入位置、方向和角度的精確性，且可以采用高壓蒸汽消毒，提高手術(shù)的安全性，避免損傷重要結(jié)構(gòu)，可以很大程度上改善患者的就醫(yī)體驗。

2022-12-25 11:02:19脊柱手術(shù)中的高級可視化: 近年來脊柱手術(shù)取得了有意義的進展。微創(chuàng)脊柱手術(shù)(MISS)技術(shù)具有顯著的優(yōu)勢，有助于大限度地減少手術(shù)創(chuàng)傷，改善患者結(jié)果，并縮短術(shù)后恢復(fù)時間。手術(shù)顯微鏡，為脊柱手術(shù)的可視化質(zhì)量設(shè)定了新的標準。手術(shù)顯微鏡提供了優(yōu)質(zhì)的光學(xué)器件和照明，以及反應(yīng)靈敏且穩(wěn)定的落地支架。手術(shù)顯微鏡可以為狹窄的腔體深處提供明亮的全聚焦視場。主要經(jīng)驗醫(yī)生在進行后路腰椎融合術(shù)時手術(shù)顯微鏡的優(yōu)點：幫助醫(yī)生使手術(shù)創(chuàng)傷更小。手術(shù)顯微鏡的主要特點：簡單易用、連通性、全面可視化、景深大、最佳照明、圖像質(zhì)量高和符合人體工學(xué)的操作體位。關(guān)于手術(shù)顯微鏡手術(shù)顯微鏡為支持微創(chuàng)脊柱手術(shù)(MISS)和諸如后路腰椎融合術(shù)、后路腰椎椎體間融合術(shù)等手術(shù)提供了獨特的優(yōu)勢。手術(shù)顯微鏡具有出色的光學(xué)性能和大景深，讓醫(yī)生看到所需的細節(jié)。無需反復(fù)尋找重要細節(jié)或不斷重新聚焦。手術(shù)顯微鏡的支架采用輕量化設(shè)計且功能豐富多樣，可快速設(shè)置，能提高手術(shù)室的工作效率。在脊柱手術(shù)中使用手術(shù)顯微鏡給醫(yī)生留下了什么印象？手術(shù)顯微鏡是一個非常好的設(shè)備，易于使用，易于操作。對于手術(shù)室中的操作人員來說，該機器的設(shè)計使其簡單易用。例如，觸摸屏非常方便，簡單易用，也可以將它輕松連接到手術(shù)室的上方屏幕。在使用手術(shù)顯微鏡的過程中，醫(yī)生體會到了哪些優(yōu)勢？醫(yī)生使用手術(shù)顯微鏡時可以清楚地看到受損側(cè)的退化神經(jīng)根，可以擁有很好的視野，在手術(shù)側(cè)非常深入地聚焦?？梢栽诮馄蕦涌吹角宄膮^(qū)別?？梢钥吹近S色韌帶，神經(jīng)根，硬膜囊，鞘囊，可以在使用焦距和放大倍數(shù)的同時清晰地區(qū)分它們。手術(shù)顯微鏡的哪一點最吸引醫(yī)生？對醫(yī)生來說手術(shù)顯微鏡主要的好處是，醫(yī)生可以將光線很好地、深入的帶入手術(shù)視野中，可以在不改變生理位置的情況下改變顯微鏡的位置，這樣可以更加輕松地對患者進行手術(shù)。使得手術(shù)創(chuàng)傷更小，所以對患者更有益處。手術(shù)顯微鏡的其它優(yōu)勢手術(shù)顯微鏡進入手術(shù)室也非常人性化，側(cè)屏幕，新的平板屏幕，具有非常高的圖像質(zhì)量，讓手術(shù)室里的每個人都可以觀看手術(shù)。

2022-12-06 13:04:21探秘腫瘤微環(huán)境，原位“看透”細胞因子: 細胞因子是腫瘤微環(huán)境（Tumor Microenvironment,TME）中細胞通訊的關(guān)鍵介質(zhì)，在癌癥的發(fā)生、發(fā)展、治療和預(yù)后等多個方面發(fā)揮重要作用。在過去的 40 年中，細胞因子和細胞因子受體作為癌癥靶點或癌癥治療方法得到了廣泛的研究。目前公認的臨床前治療策略為增強干擾素和白細胞介素（包括 IL-2 ，IL-7 ，IL-12 和 IL-15 ）的生長抑制和免疫刺激作用，或抑制細胞因子（如 TNF ，IL-1β 和 IL-6 ）的炎癥和促進腫瘤的作用[1]。圖 1 . 細胞因子在腫瘤微環(huán)境中的作用特定細胞因子的表達也與腫瘤細胞的高存活率和高轉(zhuǎn)移性密切相關(guān)。其中促炎細胞因子 IL-6 和 IL-8 與多種癌癥相關(guān)，包括淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸直腸癌等 [2,3]。因此，分析細胞因子的表達是一種重要的診斷工具和預(yù)測癌癥預(yù)后的關(guān)鍵因素。非放射性的 RNA 原位雜交技術(shù)（ViewRNA ISH）是一種高靈敏度的檢測細胞因子表達的有效方法，并且可以對 1 至 4 個 mRNA 目標進行多重分析。檢測原理如下圖所示：圖 2 . ViewRNA ISH 檢測原理安捷倫BioTek Cytation 5 多功能細胞成像微孔板檢測系統(tǒng)，可容納多達四個熒光通道同時成像，快速并出色地成多色熒光成像。儀器配備的高內(nèi)涵分析軟件可自動計算細胞內(nèi) RNA 的表達水平。Cytation 5 活細胞成像工作站結(jié)合ViewRNA ISH，為細胞因子研究提供了一種高效率、高靈敏度和可重復(fù)的檢測方法。實驗案例分享實驗一．細胞因子mRNA的成像和分析為研究細胞因子mRNA 在不同營養(yǎng)條件下的表達情況，設(shè)置兩組對照實驗。陽性對照細胞培養(yǎng)于完全培養(yǎng)基中，而陰性對照細胞經(jīng)過 18 小時的血清饑餓處理。隨后加入 ViewRNA 探針以標記 IL-6 、IL-8 和 ACTB mRNA ，在Cytation 5 上分別使用 RFP 、GFP 、Cy5 和 DAPI 通道對探針進行成像完成 ISH 細胞分析。圖像結(jié)果表明：細胞因子mRNA 的表達在營養(yǎng)匱乏的條件下會顯著降低。圖 3 . 陽性和陰性對照組成像。HCT116 放大 20 倍圖像作為（ A ）陽性對照和（ B ）陰性對照。MDA-MB-231 細胞放大 40 倍的圖像作為（ C ）陽性對照和（ D ）陰性對照。藍色：DAPI 染色的細胞核；綠色：標記 IL-8 mRNA ；橙色：標記 IL-6 mRNA ；紅色：標記 ACTB mRNA 。接下來為了定量分析細胞因子表達，首先在 Cytation 5 的 DAPI 通道下進行細胞核計數(shù)，以確定每孔的細胞數(shù)量（圖 4A ）。然后分別在GFP 、RFP 通道進行細胞因子探針（ IL-6 或 IL-8 ）的熒光信號分析（圖 4B ）。通過細胞熒光信號的比率評估不同實驗條件下的細胞因子表達（圖 5 ）。圖 4 . 每個細胞的熒光信號分析。( A ) 使用 Agilent-BioTek Gen5 軟件進行細胞分析圈選出 DAPI 標記的細胞核；( B ) 熒光標記的 IL-8 信號的圖像分析。如圖 5 所示，使用 ViewRNA ISH 和 Cytation 5 這一組合準確的量化了細胞內(nèi) IL-6 和 IL-8 mRNA 的表達。圖 5 . MDA-MB-231 細胞中 IL-8 表達和 HCT116 細胞中 IL-6 表達，并以細胞數(shù)目進行校正。實驗二．誘導(dǎo)細胞因子 mRNA 的表達使用不同劑量的 IL-1β 刺激 DU145 細胞，以分析細胞因子的 mRNA 的表達（圖6）。圖 7 結(jié)果顯示：雖然 IL-6 和 IL-8 的 mRNA 表達增加，但 IL-8 的表達變化更為顯著，這與先前研究結(jié)果一致[4]。IL-1β 的最高劑量下，這兩種細胞因子的表達減少則是由于細胞毒性。這驗證了該檢測方法的可行性與穩(wěn)定性。圖 6 . 不同濃度的 IL-1β 刺激下的 IL-6 、IL-8 和 ACTB 熒光 mRNA 探針信號 ( A ) 0 ng/mL；( B ) 0.02 ng/mL ；0.128 ng/mL；( D ) 0.8 ng/mL。藍色：DAPI染色的細胞核；綠色：標記的IL-8 mRNA；橙色：標記的 IL-6 mRNA ；紅色：標記的 ACTB mRNA 。圖 7 . 不同濃度的 IL-1β 刺激下 DU145 細胞中 IL-6 和 IL-8 mRNA 的表達。實驗三．抑制細胞因子 mRNA 的表達研究表明絲裂原活化蛋白激酶（ MAPK ）可調(diào)節(jié) IL-8 ，并證明用 MAPK/ERK 抑制劑 U 0126 治療可減少 DU145 和 MDA-MB-231 細胞中的炎癥細胞因子[4,5]。為了確認這一現(xiàn)象并驗證 ViewRNA ISH 和 Cytation 5 這一組合的能力，將不同濃度的 U 0126 加入到每種細胞類型中孵育 30 分鐘。然后用 1 ng/mL 的 IL-1β 刺激 DU145 細胞達 3 小時，而 MDA-MB-231 細胞未被刺激。使用 GFP 和 RFP 通道進行細胞計數(shù)和圖像分析以評估在 U 0126 治療后 IL-8 和 IL-6 細胞因子 mRNA 的表達。采集的圖像（圖 8 ）和計算的熒光信號強度（圖 9 ）證實了 U 0126 的抑制作用。此外，也驗證了該方法的靈敏度，可以準確識別給予抑制劑后 mRNA 的表達變化。圖 8. U 0126 抑制 IL-8 mRNA 的表達。圖像顯示了在不同濃度的 U 0126 處理后 ( A-E ) MDA-MB-231 細胞內(nèi) IL-6 、IL-8 和 ACTB 熒光 mRNA 探針信號；( F-J ) 為 DU145 細胞。藍色：DAPI 染色的細胞核；綠色：標記的 IL-8 mRNA ；橙色：標記的 IL-6 mRNA ；紅色：標記的 ACTB mRNA 。圖 9 . U 0126 治療后 IL-8 和 IL-6 mRNA 在 MDA-MB-231 和 DU 145 細胞中的表達結(jié) 語ThermoFisher 的 ViewRNA ISH 細胞分析試劑盒和探針提供一種靈敏的方法來檢測 mRNA 表達。該方法在安捷倫BioTek Cytation 5 細胞成像系統(tǒng)的加持下得以更更快地采集多熒光通道的圖像，并更精準的計算出每一個細胞的熒光信號強度。這種檢測、成像和分析的完美結(jié)合提供了一種靈敏、靈活和高通量的方法用以檢測細胞因子 mRNA 的表達。參考文獻：[1] Propper DJ, Balkwill FR. Harnessing cytokines and chemokines for cancer therapy. Nat Rev Clin Oncol. 2022 Apr;19(4):237-253.[2] Kampan NC, Xiang SD, McNally OM, Stephens AN, Quinn MA, Plebanski M. Immunotherapeutic Interleukin-6 or Interleukin-6 Receptor Blockade in Cancer: Challenges and Opportunities. Curr Med Chem. 2018;25(36):4785-4806.[3] Vecchi L, Mota STS, Zóia MAP, Martins IC, de Souza JB, Santos TG, Beserra AO, de Andrade VP, Goulart LR, Araújo TG. Interleukin-6 Signaling in Triple Negative Breast Cancer Cells Elicits the Annexin A1/Formyl Peptide Receptor 1 Axis and Affects the Tumor Microenvironment. Cells. 2022 May 20;11(10):1705.[4] Kooijman R, Himpe E, Potikanond S, Coppens A. Regulation of interleukin-8 expression in human prostate cancer cells by insulin-like growth factor-I and inflammatory cytokines. Growth Horm IGF Res. 2007 Oct;17(5):383-91.[5] Chelouche-Lev D, Miller CP, Tellez C, Ruiz M, Bar-Eli M, Price JE. Different signalling pathways regulate VEGF and IL-8 expression in breast cancer: implications for therapy. Eur J Cancer. 2004 Nov;40(16):2509-18.