- 2025-01-10 10:53:35雙通道恒電位儀
- 雙通道恒電位儀是一種高性能的電化學(xué)測(cè)試儀器,具有兩個(gè)獨(dú)立的電位控制通道。它能夠提供穩(wěn)定、精確的電位控制,適用于腐蝕研究、電化學(xué)合成、電池測(cè)試等多種應(yīng)用場(chǎng)景。該儀器具有響應(yīng)速度快、控制精度高、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn),能夠同時(shí)監(jiān)測(cè)和記錄兩個(gè)通道的電位和電流數(shù)據(jù)。雙通道設(shè)計(jì)提高了實(shí)驗(yàn)效率和數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性,是電化學(xué)研究和應(yīng)用中不可或缺的重要工具。
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雙通道恒電位儀問(wèn)答
- 2025-05-08 14:30:20共聚焦顯微鏡怎么看雙通道
- 共聚焦顯微鏡怎么看雙通道 共聚焦顯微鏡作為一種高分辨率的光學(xué)顯微鏡技術(shù),廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、材料科學(xué)以及醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。隨著科技的不斷發(fā)展,雙通道成像技術(shù)在共聚焦顯微鏡中的應(yīng)用也逐漸成為研究者的熱點(diǎn)。通過(guò)雙通道技術(shù),科研人員能夠同時(shí)觀察和分析不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào),從而獲得更為精確和全面的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本文將詳細(xì)探討如何在共聚焦顯微鏡中實(shí)現(xiàn)雙通道成像,以及這一技術(shù)在研究中的重要應(yīng)用。 雙通道成像的基本原理 共聚焦顯微鏡通過(guò)使用激光作為光源,利用點(diǎn)掃描的方式收集樣本的反射或熒光信號(hào)。在傳統(tǒng)的單通道成像中,顯微鏡只接收來(lái)自單一波長(zhǎng)的信號(hào),而雙通道成像技術(shù)則可以同時(shí)接收來(lái)自兩個(gè)不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。這是通過(guò)在光路中加入多個(gè)檢測(cè)器,每個(gè)檢測(cè)器專門用于接收特定波長(zhǎng)的光信號(hào)。通過(guò)這一方式,研究者可以在同一實(shí)驗(yàn)中獲得兩種不同的標(biāo)記物或不同信號(hào)的同時(shí)成像數(shù)據(jù),從而進(jìn)行更為復(fù)雜的分析。 如何操作共聚焦顯微鏡實(shí)現(xiàn)雙通道成像 在共聚焦顯微鏡中進(jìn)行雙通道成像時(shí),首先需要選擇適合的熒光標(biāo)記物。熒光標(biāo)記物的選擇需根據(jù)目標(biāo)分子或細(xì)胞結(jié)構(gòu)的特異性以及熒光發(fā)射波長(zhǎng)的差異進(jìn)行。操作時(shí),通過(guò)調(diào)整顯微鏡的激光光源,使得兩種不同的標(biāo)記物在兩個(gè)不同的波長(zhǎng)范圍內(nèi)激發(fā)光譜。通過(guò)光學(xué)濾光片對(duì)來(lái)自樣本的熒光信號(hào)進(jìn)行過(guò)濾,確保每個(gè)通道只接收到對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)的信號(hào)。 通常情況下,雙通道共聚焦顯微鏡的成像分辨率較高,能夠有效避免單通道成像中的信號(hào)重疊問(wèn)題,從而確保成像的準(zhǔn)確性。操作過(guò)程中,科研人員需要根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)要求,調(diào)整顯微鏡的增益、曝光時(shí)間以及掃描速度等參數(shù),以優(yōu)化成像質(zhì)量。 雙通道成像技術(shù)的優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用 雙通道共聚焦顯微鏡成像技術(shù)大的優(yōu)勢(shì)在于其可以同時(shí)觀察樣本中的兩種不同標(biāo)記物的分布和相互作用。這種優(yōu)勢(shì)使其在多種研究領(lǐng)域中得到了廣泛應(yīng)用。例如,在細(xì)胞生物學(xué)研究中,雙通道成像技術(shù)可用于同時(shí)觀察細(xì)胞內(nèi)不同蛋白質(zhì)或分子的分布,幫助研究者理解它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的相互作用以及功能。雙通道成像還能夠用于多重標(biāo)記分析、熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)實(shí)驗(yàn)以及信號(hào)通路研究等方面,極大地拓展了共聚焦顯微鏡在科研中的應(yīng)用范圍。 結(jié)語(yǔ) 雙通道共聚焦顯微鏡的應(yīng)用不僅能夠提高成像精度,還能為科研工作者提供更多維度的數(shù)據(jù)支持。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步,雙通道成像將會(huì)在各個(gè)領(lǐng)域中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。掌握其操作技巧和應(yīng)用方法,對(duì)于從事相關(guān)研究的人員來(lái)說(shuō),將有助于更好地解析復(fù)雜的生物現(xiàn)象和材料特性,推動(dòng)科研成果的不斷創(chuàng)新。
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- 2022-11-23 10:19:02現(xiàn)貨回收/收購(gòu)Agilent安捷倫86112A雙通道電模塊
- 安捷倫86112A20 GHz雙通道電模塊安捷倫/ HP86112A雙20GHz的電氣CH。插件模塊安捷倫86112A提供兩個(gè)精確的測(cè)量通道,用戶可選擇12.4或20GHz的帶寬。低帶寬模式提供了極好的精確測(cè)量小信號(hào)示波器的噪聲性能。高帶寬模式下提供高的保真度非常高的速度波形的顯示和測(cè)量。2通道電測(cè)量模塊可選帶寬20GHz的12.4千兆赫茲2.5/12.5GHz觸發(fā)通道(主機(jī)設(shè)置)
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- 2023-06-05 16:41:32鎖相放大器用于生物樣品雙通道和多儀器模式SRS顯微技術(shù)的研究
- 鎖相放大器用于生物樣品雙通道和多儀器模式SRS顯微技術(shù)的研究一.簡(jiǎn)介 拉曼散射光譜為生物分子的特異性檢測(cè)和分析提供了化學(xué)鍵的固有振動(dòng)指紋。那么什么是受激拉曼散射顯微鏡?受激拉曼散射(SRS)顯微技術(shù)是一種相對(duì)較新的顯微技術(shù),是一種相干拉曼散射過(guò)程,允許使用光譜和空間信息進(jìn)行化學(xué)成像[18],由于相干受激發(fā)射過(guò)程[1]能產(chǎn)生約103-105倍的增強(qiáng)拉曼信號(hào),可以實(shí)現(xiàn)高達(dá)視頻速率(約25幀/s)[2]的高速成像。SRS顯微鏡繼承了自發(fā)拉曼光譜的優(yōu)點(diǎn), 是一種能夠快速開(kāi)發(fā)、label-free的成像技術(shù),同時(shí)具有高靈敏度和化學(xué)特異性[3-6], 在許多生物醫(yī)學(xué)研究的分支顯示出應(yīng)用潛力,包括細(xì)胞生物學(xué)、脂質(zhì)代謝、微生物學(xué)、腫瘤檢測(cè)、蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊和制藥[7-11]。特別的是,SRS在對(duì)新鮮手術(shù)組織和術(shù)中診斷的快速組織病理學(xué)方面表現(xiàn)出色,與傳統(tǒng)的H&E染色幾乎完全一致[12,13]。此外,SRS能夠根據(jù)每個(gè)物種的光譜信息,對(duì)多種組分的混合物進(jìn)行定量化學(xué)分析[6,7,14]。盡管在之前的研究[17]中已經(jīng)研究了痛風(fēng)中MSU的自發(fā)拉曼光譜,但微弱的信號(hào)強(qiáng)度阻礙了其用于快速組織學(xué)的應(yīng)用。因此,復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院華英匯教授 和復(fù)旦大學(xué)物理學(xué)系季敏標(biāo)教授團(tuán)隊(duì)將受激拉曼散射顯微技術(shù)用于人體痛風(fēng)組織病理成像[15]。研究人員應(yīng)用SRS和二次諧波(SHG)顯微鏡同時(shí)表征了晶型和非晶型MSU。在普通光鏡下,MSU晶體呈典型的針狀。這些晶體在拉曼峰630 cm-1的SRS上很容易成像,當(dāng)SRS頻率稍微偏離振動(dòng)共振時(shí),表現(xiàn)出了高化學(xué)特異性的非共振行為,SRS信號(hào)消失。已知SHG對(duì)非中心對(duì)稱結(jié)構(gòu)敏感,包括MSU晶體和[17]組織中的膠原纖維。然而,由于拉曼極化率張量和二階光學(xué)磁化率對(duì)晶體對(duì)稱性[16]的依賴,研究者們發(fā)現(xiàn)線偏振光光束在晶體取向上傾向于產(chǎn)生SRS和SHG的強(qiáng)各向異性信號(hào)。因此,研究者們對(duì)泵浦光束和斯托克斯光束都應(yīng)用了圓偏振,以消除MSU晶體和膠原纖維的定向效應(yīng)。Moku:Pro 的鎖相放大器 (LIA) 為受激拉曼散射 (SRS) 顯微鏡實(shí)驗(yàn)中的自外差信號(hào)檢測(cè)提供了一種直觀、精確且穩(wěn)健的解決方案。高質(zhì)量的 LIA 是 SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)中具有調(diào)制傳輸檢測(cè)方案的關(guān)鍵硬件組件。在此更新的案例研究中,我們提供了有關(guān)雙 LIA 應(yīng)用程序的更多詳細(xì)信息和描述。由于SRS 是一種相干拉曼散射過(guò)程,允許使用光譜和空間信息進(jìn)行化學(xué)成像[18]。它使用兩個(gè)同步脈沖激光器,即泵浦和斯托克斯(圖 1)相干地激發(fā)分子的振動(dòng)。當(dāng)入射到樣品上的兩束激光的頻率差與目標(biāo)分子的振動(dòng)頻率相匹配時(shí),就會(huì)發(fā)生 SRS 過(guò)程。振動(dòng)激發(fā)的結(jié)果是泵浦光束將失去光子,而斯托克斯光束將獲得光子。當(dāng)檢測(cè)到泵浦光束的損失時(shí),這稱為受激拉曼損失 (SRL) 檢測(cè)。強(qiáng)度損失 ΔI?/I? 通常約為 10 -7 -10 -4,遠(yuǎn)小于典型的激光強(qiáng)度波動(dòng)。為了克服這一挑戰(zhàn),需要一種高頻調(diào)制和相敏檢測(cè)方案來(lái)從嘈雜的背景中提取 SRS 信號(hào)[19]。在 SRL 檢測(cè)方案中,斯托克斯光束以固定頻率調(diào)制,由此產(chǎn)生的調(diào)制傳輸?shù)奖闷止馐?LIA 檢測(cè)。圖 1:受激拉曼損耗檢測(cè)方案。檢測(cè)到由于 SRS 引起的 Stokes 到泵浦光束的調(diào)幅傳輸。演示的泵浦光束具有 80 MHz 的重復(fù)率,Stokes 光束具有相同的 80 MHz 重復(fù)率,但也以 20 MHz 進(jìn)行調(diào)制。Δpump 是 LIA 在此檢測(cè)方案中提取的內(nèi)容二.實(shí)驗(yàn)裝置使用的激光系統(tǒng)能夠輸出兩個(gè) 80 MHz 的激光脈沖序列:斯托克斯光束在 1030 nm,泵浦光束在 790 nm。激光輸出也用于同步調(diào)制:80 MHz 參考被發(fā)送到分頻器以生成 20 MHz TTL 輸出。這些 20 MHz 輸出被使用兩次:一次作為電光調(diào)制器調(diào)制斯托克斯光束的驅(qū)動(dòng)頻率,另一次作為外部鎖相環(huán)的 LIA 輸入通道 2(B 中)的參考。泵浦光束由硅光電二極管檢測(cè),然后被發(fā)送到 LIA 的輸入通道 1(In A)。來(lái)自輸出通道 1(Out A)的信號(hào)被發(fā)送到數(shù)據(jù)采集卡以進(jìn)行圖像采集。來(lái)自輸出通道 2 (Out B) 的信號(hào)被最小化(通過(guò)調(diào)整相移)。 2.1 單通道鎖相放大器配置圖 2:典型的鎖定放大器配置設(shè)置圖 2 演示了用于 SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)的 LIA 的初始設(shè)置。在初始設(shè)置時(shí),必須重新獲取鎖相環(huán)。輸入均配置為 AC:50 歐姆。通過(guò)調(diào)整相位度數(shù)優(yōu)化相移 (Df),直到 Out A zui大化(正值)并且 Out B zui小化(接近零)。探針A顯示對(duì)應(yīng)于 DMSO zui高信號(hào)峰 (2913 cm-1 ) 的 SRS 信號(hào),并zui大化輸出 A 的 103.3 mV。探針B表示正交輸出,最小化為零。一旦 LIA 針對(duì)校準(zhǔn)溶劑進(jìn)行了優(yōu)化,樣品就可以進(jìn)行成像了。圖 3:2930 cm -1拉曼躍遷處的 SRS HeLa 細(xì)胞圖像圖 3 是使用 Moku:Pro 鎖相放大器拍攝的 HeLa 細(xì)胞圖像。顯示的圖像是從 SRS 圖像生成的,拉曼位移為 2930cm-1,對(duì)應(yīng)于蛋白質(zhì)峰。低通濾波器設(shè)置為 40 kHz,對(duì)應(yīng)于 約4μs 的時(shí)間常數(shù)??梢愿鶕?jù)SRS信號(hào)大小增加或減少增益。2.2 雙通道成像Moku:Pro 的 LIA 也適用于實(shí)時(shí)雙色 SRS 成像。這是通過(guò)在 SRS 成像中應(yīng)用正交調(diào)制并檢測(cè)LIA的X和Y輸出來(lái)執(zhí)行的。在這種情況下,斯托克斯調(diào)制有兩個(gè)部分:一個(gè) 20 MHz 脈沖序列生成SRS信號(hào),另一個(gè) 20 MHz 脈沖序列具有90°相移,生成另一個(gè)針對(duì)不同拉曼波段的SRS信號(hào)[3]。由于90°相移,兩個(gè)通道(Out A和Out B)彼此正交,可以同時(shí)獲取兩個(gè)SRS圖像而不會(huì)受到干擾。 4:使用正交調(diào)制和輸出在兩個(gè)不同的拉曼躍遷下同時(shí)獲得鼠腦樣本的雙通道 SRS 圖像圖 4 是利用雙通道X&Y輸出同時(shí)在2930 cm -1和 2850 cm -1處生成兩個(gè) SRS 圖像的代表性圖像。2.3 多儀器模式應(yīng)用 在大多數(shù) SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)中,由于激光器總帶寬的限制,光譜范圍被限制在大約 300 cm -1左右。繞過(guò)這一技術(shù)障礙的一種方法是使用可調(diào)諧激光器掃描波長(zhǎng)。然而,波長(zhǎng)調(diào)諧速度很慢,而且對(duì)于時(shí)間敏感的實(shí)驗(yàn)(如活細(xì)胞成像)來(lái)說(shuō)往往不夠。應(yīng)對(duì)這一挑戰(zhàn)的另一種解決方案是引入第三束激光束來(lái)掃描不同的拉曼過(guò)渡區(qū)域。這種能力對(duì)于兩個(gè)光譜區(qū)域的同時(shí)成像特別有吸引力:一個(gè)在指紋區(qū)域(例如 約1600 cm-1用于酰胺振動(dòng))和一個(gè)在CH區(qū)域(例如 約2900 cm -1蛋白質(zhì))。在 SRL 成像方法中,實(shí)驗(yàn)裝置由一個(gè)斯托克斯光束和兩個(gè)不同波長(zhǎng)的泵浦光束組成。此設(shè)置的常用檢測(cè)方法需要單獨(dú)的檢測(cè)器和單獨(dú)的 LIA。然而,Moku:Pro 的多儀器模式允許部署多個(gè)LIA,因此可以在不需要任何額外硬件妥協(xié)的情況下實(shí)施第二個(gè)LIA。圖 5:Moku:Pro 多儀器鎖相放大器配置圖 5 演示了LIA 的多儀器模式設(shè)置,用于同步 SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)。對(duì)于Slot 1,In 1是di一個(gè)光電二極管的檢測(cè)信號(hào),In 2是參考信號(hào),Out 1是發(fā)送到數(shù)據(jù)采集卡的信號(hào),Out 3被丟棄。對(duì)于 Slot 2,In 3 是第二個(gè)光電二極管的檢測(cè)信號(hào),In 2 再次作為參考,Out 2 是發(fā)送到數(shù)據(jù)采集卡的信號(hào),Out 4 被丟棄。此配置僅使用 4 個(gè) Moku 插槽中的 2 個(gè)。插槽 3 和 4 未分配,因此可用于進(jìn)一步的 LIA 或任何其他 Moku 儀器。輸入全部配置為 AC:50 歐姆。每個(gè) LIA 插槽(1 和 2)都遵循與單通道 LIA 配置相同的設(shè)置。在三個(gè)激光器的情況下,Moku:Pro 的多儀器模式可以配置兩個(gè)鎖定放大器,將系統(tǒng)簡(jiǎn)化為一個(gè)設(shè)備,而不會(huì)有任何妥協(xié)。這使得研究人員可以同時(shí)拍攝兩張波數(shù)差較大的 SRS 圖像,利用一個(gè) Moku:Pro 來(lái)處理兩個(gè)光電二極管檢測(cè)器信號(hào)。圖 6:HeLa 細(xì)胞 SRS 圖像使用多儀器設(shè)置在間隔較遠(yuǎn)的拉曼躍遷處拍攝圖 6 是利用一個(gè)Moku:Pro處理兩個(gè)光電二極管檢測(cè)器信號(hào)同時(shí)拍攝兩個(gè)大波數(shù)差的 SRS 圖像的代表性圖像。三.結(jié)論 Moku:Pro 的 LIA 為大量 SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)提供了出色的解決方案。在本文檔中,討論了典型的單通道 SRS 成像、雙通道成像和多儀器成像。用戶界面允許對(duì)提取低強(qiáng)度 SRS 信號(hào)進(jìn)行直觀和強(qiáng)大的控制。重要的是 Moku:Pro 的多儀器工具功能允許在多儀器同用的緊湊型系統(tǒng)上進(jìn)行復(fù)雜的成像實(shí)驗(yàn)。圖 7:Moku:Pro 在多樂(lè)器模式下的使用圖像。In 1 和 In 3 分別是插槽 1 和插槽 2 中 LIA 的信號(hào)輸入。2 中是兩個(gè) LIA 插槽的參考。在所示的配置中,Out 1 和 Out 3 是記錄的信號(hào),Out 2 和 Out 4 是插槽 1 和 2 的轉(zhuǎn)儲(chǔ)信號(hào)參考文獻(xiàn):1.Freudiger CW, Min W, Saar BG, Lu S, Holtom GR, He C. et al. Label-free biomedical imaging with high sensitivity by stimulated Raman scattering microscopy. Science. 2008;322:1857-612.Saar BG, Freudiger CW, Reichman J, Stanley CM, Holtom GR, Xie XS. Video-rate molecular imaging in vivo with stimulated Raman scattering. Science. 2010;330:1368-703.Ji M, Lewis S, Camelo-Piragua S, Ramkissoon SH, Snuderl M, Venneti S. et al. Detection of human brain tumor infiltration with quantitative stimulated Raman scattering microscopy. Sci Transl Med. 2015;7:309ra1634.Ji M, Arbel M, Zhang L, Freudiger CW, Hou SS, Lin D. et al. Label-free imaging of amyloid plaques in Alzheimer''s disease with stimulated Raman scattering microscopy. Sci Adv. 2018;4:eaat77155.Cheng JX, Xie XS. Vibrational spectroscopic imaging of living systems: An emerging platform for biology and medicine. Science. 2015;350:aaa88706.Ao JP, Feng YQ, Wu SM, Wang T, Ling JW, Zhang LW. et al. Rapid, 3D Chemical Profiling of Individual Atmospheric Aerosols with Stimulated Raman Scattering Microscopy. Small Methods. 2020;4:19006007.Hu F, Shi L, Min W. Biological imaging of chemical bonds by stimulated Raman scattering microscopy. Nat Methods. 2019;16:830-428.Fu D, Zhou J, Zhu WS, Manley PW, Wang YK, Hood T. et al. Imaging the intracellular distribution of tyrosine kinase inhibitors in living cells with quantitative hyperspectral stimulated Raman scattering. Nat Chem. 2014;6:614-229.Shen Y, Zhao Z, Zhang L, Shi L, Shahriar S, Chan RB. et al. Metabolic activity induces membrane phase separation in endoplasmic reticulum. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017;114:13394-910.Bae K, Zheng W, Ma Y, Huang Z. Real-time monitoring of pharmacokinetics of antibiotics in biofilms with Raman-tagged hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy. Theranostics. 2019;9:1348-5711.Shin KS, Laohajaratsang M, Men S, Figueroa B, Dintzis SM, Fu D. 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The Journal of Physical Chemistry Letters 2020, 11 (17), 7083-7089.更多詳情請(qǐng)聯(lián)系昊量光電/歡迎直接聯(lián)系昊量光電關(guān)于昊量光電:上海昊量光電設(shè)備有限公司是光電產(chǎn)品專 業(yè)代理商,產(chǎn)品包括各類激光器、光電調(diào)制器、光學(xué)測(cè)量設(shè)備、光學(xué)元件等,涉及應(yīng)用涵蓋了材料加工、光通訊、生物醫(yī)療、科學(xué)研究、國(guó) 防、量 子光學(xué)、生物顯微、物聯(lián)傳感、激光制造等;可為客戶提 供完 整的設(shè)備安裝,培訓(xùn),硬件開(kāi)發(fā),軟件開(kāi)發(fā),系統(tǒng)集成等服務(wù)。
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- 2020-06-30 11:19:3760V6A獨(dú)立雙通道電源選型方案
- 普源DP711為單通道可編程線性直流電源,是為需求成本更低、尺寸更小的高可靠性電源用戶設(shè)計(jì)的一款基礎(chǔ)電源產(chǎn)品,具有低紋波噪聲,快速瞬態(tài)響應(yīng),的電源和負(fù)載調(diào)節(jié)率等特性,并具備強(qiáng)大的定時(shí)輸出功能以及完備的保護(hù)功能。DP700系列電源支持電源串并聯(lián)功能。串聯(lián)(并聯(lián))兩臺(tái)或多臺(tái)電源可以獲得更高的電壓(電流)。電源串并聯(lián)時(shí),相應(yīng)參數(shù)的設(shè)置必須符合安全要求。串聯(lián)電源的輸出電壓是所有通道的輸出電壓之和操作步驟:2. 打開(kāi)儀器,參考“恒壓輸出”一節(jié)中的介紹設(shè)置符合安全要求的通道輸出參數(shù)。注意:務(wù)必保證所有串聯(lián)通道均工作在恒壓模式。注意:所有通道的電流設(shè)置值必須相同。注意:所有通道的過(guò)流保護(hù)值必須相同。此時(shí),負(fù)載實(shí)際得到的電壓為兩個(gè)通道的輸出電壓之和(VL = V1 + V2)。并聯(lián)電源的輸出電流是所有通道的輸出電流之和。以兩個(gè)通道并聯(lián)為例,接線方式如下圖所示。操作步驟:2. 打開(kāi)儀器,參考“恒壓輸出”中的介紹為各個(gè)通道設(shè)置合適的輸出參數(shù)。3. 打開(kāi)每個(gè)通道的輸出。以上60V6A獨(dú)立雙通道電源選型方案由西安安泰測(cè)試技術(shù)工程師提供,如果大家在選擇電源、示波器、頻譜儀、萬(wàn)用表等電測(cè)儀器過(guò)程中有什么問(wèn)題,歡迎咨詢安泰測(cè)試。
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- 2019-08-19 17:21:45HF2LI雙通道數(shù)字鎖相放大器用于受激拉曼散射顯微成像
- 相干拉曼散射顯微術(shù)(Coherent Raman Scattering Microscopy)是一類植根于拉曼散射的光學(xué)顯微成像方法,主要包含相干反斯托克斯拉曼散射(Coherent Anti-StokesRaman Scattering, CARS)和受激拉曼散射(Stimulated Raman Scattering, SRS)兩種方法。CARS/SRS 顯微術(shù)通過(guò)探測(cè)目標(biāo)分子特定的振動(dòng)來(lái)提供成像所需的襯度,通過(guò)非線性光學(xué)過(guò)程大大提高了檢測(cè)的靈敏度,同時(shí)本征地具備三維成像能力。CARS 和 SRS 顯微術(shù)可以對(duì)脂類等不易被標(biāo)記的物質(zhì)成像,還可以很好地通過(guò)選擇振動(dòng)光譜, 對(duì)生物體內(nèi)特定小分子物質(zhì)如藥物等以及生物大分子如核酸、蛋白質(zhì)等進(jìn)行無(wú)需標(biāo)記的成像,因此成為極有潛力的活體(in vivo)成像手段。拉曼散射是發(fā)生在光和分子振動(dòng)能級(jí)間的相互作用。在不滿足電子能級(jí)共振條件的情況下,分子吸收光子的能量不能完成向電子激發(fā)態(tài)的躍遷,但是可以到達(dá)一個(gè)中間態(tài),即虛態(tài)。處在虛態(tài)的分子會(huì)迅速向低能態(tài)躍遷,同時(shí)發(fā)射出一個(gè)光子,這就是散射過(guò)程,發(fā)射出的光子就是散射光。如果散射光子和原來(lái)的光子頻率相同,稱之為瑞利散射(Rayleigh Scattering)。如果分子從虛態(tài)向下躍遷時(shí),到達(dá)比原來(lái)能量高的態(tài),散射光的頻率將降低,稱之為斯托克斯散射(Stokes Scattering);相反,如果終態(tài)的能量比初態(tài)低,那么散射光的頻率將升高,稱之為反斯托克斯散射(anti-Stokes Scattering)。斯托克斯與反斯托克斯散射統(tǒng)稱為拉曼散射(Raman Scattering)。顯然,拉曼散射是光的非彈性散射。拉曼散射的截面(cross section)很小,因此自發(fā)拉曼散射的信號(hào)強(qiáng)度通常很低。能量在分子振動(dòng)能級(jí)和光子之間發(fā)生交換,其大小對(duì)應(yīng)振動(dòng)能級(jí)間距,散射光的頻率移動(dòng)(拉曼位移)也因此與分子振動(dòng)的頻率相同。斯托克斯線與反斯托克斯線在光譜上則相對(duì)于入射光的頻率對(duì)稱分布。受激拉曼散射顯微鏡的工作原理自發(fā)拉曼散射是分子對(duì)光子的一種非彈性散射現(xiàn)象,在這個(gè)現(xiàn)象中,散射光子的頻率較入射光子相比發(fā)生了改變,改變量對(duì)應(yīng)分子內(nèi)部振動(dòng)模式的頻率,這個(gè)現(xiàn)象在1928年由印度物理學(xué)家Raman C V發(fā)現(xiàn)的。激光出現(xiàn)后,在激光器的激發(fā)下,使某些介質(zhì)的散射過(guò)程具有受激性質(zhì),這就是受激拉曼散射(SRS)。如下圖所示,采用兩束滿足共振條件的激光,即泵浦光和斯托克斯光進(jìn)行激發(fā),SRS過(guò)程可在生物組織樣品中發(fā)生。當(dāng)泵浦光和斯托克斯光的頻率差,與特定分子化學(xué)鍵的振動(dòng)頻率(Ωvib)相等而發(fā)生共振耦合時(shí),分子就會(huì)從基態(tài)躍遷到它的振動(dòng)激發(fā)態(tài)。光和分子之間發(fā)生能量交換,一個(gè)泵浦光子借助分子振動(dòng)能級(jí)的躍遷而轉(zhuǎn)化為了斯托克斯光子。泵浦光發(fā)生了受激拉曼損失(stimulated Raman loss, SRL),導(dǎo)致強(qiáng)度降低,同時(shí)斯托克斯光發(fā)生了受激拉曼增益(stimulated Raman gain, SRG),強(qiáng)度升高。通過(guò)一定的技術(shù)手段來(lái)檢測(cè)SRL或SRG,即可作為成像的襯度來(lái)源。對(duì)泵浦光和探測(cè)光都進(jìn)行電光調(diào)制或者聲光調(diào)制,可以在同一個(gè)受激拉曼散射實(shí)驗(yàn)裝置中,實(shí)現(xiàn)相干拉曼散射成像(CARS)和受激拉曼散射成像(SRS)以及通過(guò)微弱的調(diào)整可實(shí)現(xiàn)的雙光子吸收光譜(TPA)。如下圖則是采用雙調(diào)制獲得拉曼成像的實(shí)驗(yàn)裝置及成像結(jié)果[1]。[1] Jessica C. Mansfield, George R. Littlejohn, Julian Moger, etc. Label-free Chemically Specific Imaging in Planta with Stimulated Raman Scattering Microscopy, Anal. Chem. 2013, 85: 5055-5063
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