- 2025-01-10 10:52:26大鼠腫瘤模具
- 大鼠腫瘤模具是一種用于模擬大鼠腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移情況的工具。它具有精確度高、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn),能夠模擬出符合實(shí)驗(yàn)要求的大鼠腫瘤模型。該模具廣泛應(yīng)用于腫瘤學(xué)研究、藥物研發(fā)等領(lǐng)域,為科研人員提供了重要的實(shí)驗(yàn)工具。通過使用大鼠腫瘤模具,科研人員可以更好地模擬腫瘤生長(zhǎng)環(huán)境,有助于推動(dòng)腫瘤學(xué)研究的進(jìn)展。
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大鼠腫瘤模具問答
- 2025-02-11 12:45:14大鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血壓測(cè)量如何能夠準(zhǔn)確?
- 大鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血壓測(cè)量:評(píng)估與方法應(yīng)用 在醫(yī)學(xué)與生物研究領(lǐng)域,大鼠作為常見的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、疾病機(jī)制研究及生理功能探索等各個(gè)方面。其中,血壓測(cè)量作為基礎(chǔ)生理指標(biāo)之一,對(duì)評(píng)估動(dòng)物健康狀態(tài)和藥物效果至關(guān)重要。本文將探討大鼠血壓測(cè)量的常用方法,測(cè)量精度及其在科研中的應(yīng)用,幫助科研人員在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析時(shí)做出合理選擇。 大鼠血壓測(cè)量的重要性 血壓是維持生理平衡和生命活動(dòng)的關(guān)鍵指標(biāo)之一,它反映了心臟、血管及其他相關(guān)系統(tǒng)的健康狀況。在大鼠實(shí)驗(yàn)中,準(zhǔn)確測(cè)量血壓不僅有助于了解動(dòng)物的生理狀態(tài),還能夠幫助科學(xué)家們研究高血壓、心血管疾病等慢性疾病的發(fā)生機(jī)制,評(píng)估抗高血壓藥物的效果。隨著研究技術(shù)的不斷進(jìn)步,血壓測(cè)量已成為探索生理和病理變化的重要工具。 常見的血壓測(cè)量方法 尾動(dòng)脈法(Tail-cuff method) 尾動(dòng)脈法是目前為常用的大鼠血壓測(cè)量方法之一。此方法通過將動(dòng)物的尾巴暴露于溫?zé)岘h(huán)境中,使血管擴(kuò)張,再通過壓力計(jì)測(cè)量血壓。雖然尾動(dòng)脈法操作簡(jiǎn)便,適用于大量動(dòng)物樣本,但該方法可能受到動(dòng)物應(yīng)激反應(yīng)的影響,導(dǎo)致測(cè)量結(jié)果的波動(dòng)。因此,尾動(dòng)脈法更適用于正常血壓的初步篩查。 直視血壓法(Invasive method) 直視血壓法,也被稱為動(dòng)脈插管法,是一種侵入性較強(qiáng)的方法。該方法通過將微型傳感器直接植入大鼠的動(dòng)脈,實(shí)時(shí)測(cè)量血壓。這種方法的精確度高,能夠獲得大鼠在不同生理狀態(tài)下的血壓波動(dòng),常用于高血壓藥物研究或疾病模型的深入探索。因其需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行手術(shù),因此不適用于大量篩查,且需處理相關(guān)倫理問題。 間接動(dòng)態(tài)血壓測(cè)量法(Oscillometric method) 間接動(dòng)態(tài)血壓測(cè)量法通過監(jiān)測(cè)大鼠肢體周圍的壓力變化來推算血壓。與尾動(dòng)脈法類似,該方法通過儀器測(cè)量大鼠肢體(如尾巴、后肢等)部位的血流壓力波動(dòng),推導(dǎo)出血壓值。相比于尾動(dòng)脈法,這種方法對(duì)動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)較小,測(cè)量的穩(wěn)定性較好,適合用于長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)。 測(cè)量方法的選擇與優(yōu)化 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛣?dòng)物狀態(tài)的不同,選擇合適的血壓測(cè)量方法至關(guān)重要。對(duì)于非侵入性研究,尾動(dòng)脈法和間接動(dòng)態(tài)測(cè)量法更為常用,前者適用于常規(guī)篩查,而后者則適合長(zhǎng)期觀察。對(duì)于需要高度數(shù)據(jù)的藥物開發(fā)和疾病研究,動(dòng)脈插管法是更為理想的選擇,盡管其操作難度和倫理問題較為復(fù)雜。 結(jié)論與展望 大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,血壓測(cè)量在科學(xué)研究中占據(jù)了重要地位。從非侵入性到侵入性方法,不同的測(cè)量技術(shù)滿足了不同研究需求。隨著技術(shù)的進(jìn)步和測(cè)量精度的提高,未來的血壓測(cè)量技術(shù)將更加,并能夠在更廣泛的研究領(lǐng)域得到應(yīng)用??蒲腥藛T應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c實(shí)際情況選擇合適的測(cè)量方法,以保證研究結(jié)果的科學(xué)性與可靠性。
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- 2025-01-14 12:00:17擠出機(jī)模具怎么調(diào)整
- 標(biāo)題:擠出機(jī)模具怎么調(diào)整 擠出機(jī)模具的調(diào)整是確保生產(chǎn)過程中產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)效率的關(guān)鍵步驟。正確的模具調(diào)整能夠顯著降低廢品率,提升生產(chǎn)穩(wěn)定性,并且減少設(shè)備的磨損。因此,掌握擠出機(jī)模具的調(diào)整技巧對(duì)每一位生產(chǎn)操作人員來說都至關(guān)重要。本文章將詳細(xì)介紹如何對(duì)擠出機(jī)模具進(jìn)行調(diào)整,包括常見的調(diào)整方法、注意事項(xiàng)及操作技巧,幫助您更高效地優(yōu)化生產(chǎn)流程,確保模具始終處于佳工作狀態(tài)。 1. 模具調(diào)整的基本概念 擠出機(jī)模具的調(diào)整主要是為了確保擠出物料在模具中的流動(dòng)均勻,保證終產(chǎn)品的質(zhì)量。模具在使用過程中,由于溫度、壓力以及物料特性等因素,可能會(huì)發(fā)生形變或積垢,因此需要定期進(jìn)行檢查和調(diào)整。模具的調(diào)整不僅僅是對(duì)模具本身的設(shè)置,還包括對(duì)溫度、壓力等操作條件的優(yōu)化。 2. 調(diào)整前的準(zhǔn)備工作 在進(jìn)行模具調(diào)整之前,首先需要確認(rèn)擠出機(jī)的工作狀態(tài),包括溫度、壓力、螺桿轉(zhuǎn)速等參數(shù)。如果這些基本條件不合適,再進(jìn)行模具調(diào)整也難以達(dá)到理想效果。檢查模具內(nèi)部是否存在積物或磨損,確保模具本身沒有損壞或退化。準(zhǔn)備好相關(guān)的工具和設(shè)備,確保操作過程的順利進(jìn)行。 3. 常見的模具調(diào)整方法 (1) 調(diào)整溫度控制系統(tǒng) 溫度對(duì)擠出過程中的物料流動(dòng)性和模具的壓力分布有很大影響。通常,模具的溫控系統(tǒng)會(huì)設(shè)有多個(gè)加熱區(qū),每個(gè)區(qū)的溫度需要根據(jù)物料的特性進(jìn)行調(diào)整。操作人員應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的要求和物料的種類,合理設(shè)置模具各區(qū)的溫度,確保物料在擠出過程中具有合適的流動(dòng)性。 (2) 模具間隙調(diào)整 模具的間隙是影響物料擠出質(zhì)量的另一個(gè)重要因素。間隙過小會(huì)導(dǎo)致物料堵塞或壓力過大,間隙過大則會(huì)導(dǎo)致物料流動(dòng)不均勻或成型不穩(wěn)定。根據(jù)不同的生產(chǎn)需求,調(diào)整模具的間隙,以確保物料能夠平穩(wěn)均勻地通過模具。 (3) 改變模具壓力 模具內(nèi)部的壓力會(huì)直接影響擠出物料的密度和形態(tài)。通過調(diào)整模具的壓力,可以改變產(chǎn)品的物理特性,例如厚度、密度等。需要根據(jù)生產(chǎn)要求,通過適當(dāng)調(diào)節(jié)模具的壓力,以確保成品符合標(biāo)準(zhǔn)。 4. 注意事項(xiàng)與技巧 (1) 逐步調(diào)整 每次調(diào)整模具時(shí),應(yīng)逐步進(jìn)行,并在每次調(diào)整后觀察擠出產(chǎn)品的質(zhì)量。避免一次性進(jìn)行大幅度的調(diào)整,以免引發(fā)其他問題。 (2) 定期維護(hù)與檢查 模具的調(diào)整不僅僅是應(yīng)對(duì)生產(chǎn)過程中出現(xiàn)的問題,還需要定期進(jìn)行檢查和維護(hù)。通過定期清理模具,檢查磨損情況,及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題并進(jìn)行修復(fù),能夠延長(zhǎng)模具的使用壽命。 (3) 操作人員培訓(xùn) 由于模具調(diào)整涉及多個(gè)參數(shù),操作人員需要具備一定的專業(yè)知識(shí)和技能。定期對(duì)操作人員進(jìn)行培訓(xùn),提高其對(duì)模具調(diào)整的理解和實(shí)踐能力,能夠有效提升生產(chǎn)線的整體性能。 5. 結(jié)語 擠出機(jī)模具的調(diào)整是一項(xiàng)需要細(xì)心和專業(yè)知識(shí)的工作,通過合理的調(diào)整方法,可以顯著提高生產(chǎn)效率和產(chǎn)品質(zhì)量。操作人員應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際情況,靈活運(yùn)用調(diào)整技巧,并保持模具的良好狀態(tài),確保擠出過程的順利進(jìn)行。只有持續(xù)優(yōu)化調(diào)整操作,才能在競(jìng)爭(zhēng)激烈的市場(chǎng)中保持領(lǐng)先地位。
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- 2023-06-14 11:23:07大鼠17-β-雌二醇ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟
- 大鼠17-β-雌二醇ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟 大鼠17-β-雌二醇試劑盒操作步驟: 3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用?! ?. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干?! ?. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外?! ∽⒁庖c(diǎn):請(qǐng)仔細(xì)閱讀產(chǎn)品的詳細(xì)使用說明,嚴(yán)格遵照規(guī)定操作,必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果. 操作注意事項(xiàng) 1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存?! ?. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)?! ?. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器?! ?. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?! ?. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。 7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值?! ?. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。 9. 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作?! lisa試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。
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- 2022-04-07 13:42:36大鼠補(bǔ)體因子H試劑盒,大鼠(CFH)ELISA檢測(cè)試劑盒
- 大鼠補(bǔ)體因子H試劑盒,大鼠(CFH)ELISA檢測(cè)試劑盒本生生物公司供應(yīng):ELISA試劑盒,分光光度計(jì),血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進(jìn)口凍存管,細(xì)胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器。產(chǎn)品名稱:大鼠補(bǔ)體因子H(CFH)ELISA試劑盒貨號(hào):BS-2896規(guī)格:96T/48T保存條件及有效期: 1、試劑盒保存:2-8℃。 2、有效期:6個(gè)月.大鼠補(bǔ)體因子H試劑盒,大鼠(CFH)ELISA檢測(cè)試劑盒 注:科研實(shí)驗(yàn)專用。 大鼠補(bǔ)體因子H試劑盒,大鼠(CFH)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠血小板衍化生長(zhǎng)因子-B試劑盒,大鼠(PDGF-B)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠CXC趨化因子配體16試劑盒,大鼠(CXCL16)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子試劑盒,大鼠(TSGF)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠白介素27試劑盒,大鼠(IL-27)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠第八因子相關(guān)抗原試劑盒,大鼠(FⅧAg)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠環(huán)磷酸鳥苷試劑盒,大鼠(cGMP)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10試劑盒,大鼠(IP-10/CXCL10)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒,大鼠(sPECAM-1/sCD31)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類試劑盒,大鼠(MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類試劑盒,大鼠(MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ)ELISA檢測(cè)試劑盒 大鼠胰高血糖素樣肽1試劑盒,大鼠(Glp-1)ELISA檢測(cè)試劑盒 小鼠左旋肉堿試劑盒,小鼠(L-Carnitine)ELISA檢測(cè)試劑盒 小鼠磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3試劑盒,小鼠(p-IRF3)ELISA檢測(cè)試劑盒 小鼠脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒,小鼠(LBP)ELISA檢測(cè)試劑盒
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- 2023-02-15 14:27:47腫瘤疫苗生物學(xué)活性評(píng)估
- 腫瘤疫苗背景腫瘤疫苗,是一種具有預(yù)防和治 療潛力的有吸引力的替代免疫治 療選擇,是近年研究的熱點(diǎn)之一。針對(duì)腫瘤相關(guān)抗原(Tumor-associated antigen,TAA)或腫瘤特異性抗原 (Tumor specific antigen,TSA) 的疫苗可以特異性地攻擊和破壞抗原過表達(dá)的惡性細(xì)胞,并由于免疫記憶而實(shí)現(xiàn)慢性治 療反應(yīng)。因此,與其他免疫療法相比,癌癥疫苗提供了特異性、安全性和可耐受的治 療。根據(jù)腫瘤抗原的組分,癌癥疫苗大致可以分為四種類型:基于 DNA 的疫苗,基于 RNA 的疫苗,基于多肽的疫苗和基于免疫細(xì)胞的疫苗。FDA 批準(zhǔn)的首 個(gè)個(gè)性化腫瘤疫苗 PROVENGE (Sipuleucel-T) 是一種基于免疫細(xì)胞的疫苗,用于激素難治性前列腺癌的治 療。除此之外,Moderna,BioNTech 都在布局基于 mRNA 的腫瘤疫苗。圖 1 腫瘤疫苗抗原呈遞平臺(tái)示意圖腫瘤疫苗有效性評(píng)估方法生物體接種疫苗后,腫瘤抗原被帶到淋巴結(jié),進(jìn)而激活抗原特異性的 B 細(xì)胞和 T 細(xì)胞,活化的 B 細(xì)胞產(chǎn)生的抗體及活化的效應(yīng) T 細(xì)胞會(huì)使腫瘤內(nèi)脹并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。圖 2 腫瘤疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)示意圖如何有效的評(píng)估腫瘤疫苗的有效性是一個(gè)非常值得探討的問題,常用的腫瘤疫苗有效性驗(yàn)證的方法,包括細(xì)胞因子檢測(cè)、CTL 活性檢測(cè)、T 細(xì)胞活化標(biāo)志物檢測(cè)、抗體滴度檢測(cè)、ADCC 檢測(cè)等。1、細(xì)胞因子檢測(cè)細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞經(jīng)過刺激而合成并分泌的小分子蛋白質(zhì),在免疫應(yīng)答中起著非常重要的作用,因此可以通過細(xì)胞因子的分泌能力來反應(yīng)疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫的水平。常見的細(xì)胞因子有白介素 (IL) 、干擾素 (IFN)、 腫瘤壞死因子 (TNF) 等。下面比較了幾種常見的檢測(cè)方法。ELISA 是一種非常經(jīng)典的細(xì)胞因子的檢測(cè)方法,例如在王曉東等人發(fā)表的關(guān)于胃癌疫苗研究的文章中,提到了用 ELISA 的方法檢測(cè)接種疫苗后小鼠骨 髓源樹突狀細(xì)胞(BMDCs)分泌細(xì)胞因子的能力,檢測(cè)方法如下:BMDCs 在含有 10ng/mL GM-CSF 和 10ng/mL IL-4 的 X-vivo 15 培養(yǎng)基中培養(yǎng),37℃下培養(yǎng) 6 天,然后以每孔 5×104 細(xì)胞的密度在 96 孔板中接種。以 5μM 或 10μM 的最 終濃度加入疫苗抗原,孵育 24 小時(shí)。使用小鼠 TNF-α 和 IL-12 p70 ELISA Ready-SET-Go 試劑組定量培養(yǎng)上清中的 TNF-α 和 IL-12 。首先在 4℃下用捕獲抗體包被 ELISA 板過夜,然后在室溫下依次加入阻斷液、細(xì)胞培養(yǎng)上清和檢測(cè)抗體,孵育 1h 。 最 后加入終止液和顯色劑,用酶標(biāo)儀 (BioTek) 在 450nm 處記錄 OD 值。檢測(cè)結(jié)果如下:從檢測(cè)結(jié)果可以看出,T7(TLR7 激動(dòng)劑)的存在可以顯著提升 ML/MB 抗原誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)。圖 3 ELISA 法測(cè)定小鼠骨 髓樹突狀細(xì)胞 (BMDCs) 分泌TNF-α (a) 和 IL-12 (b) 的水平Ankita Leekha 等人發(fā)表的關(guān)于 SRAS-COV2 疫苗文章中,提到了用 ELISPOT 的方法評(píng)估細(xì)胞因子的分泌水平,可以作為參考。具體方法如下:從小鼠中分離脾細(xì)胞和肺細(xì)胞,使用小鼠 IFNγ ELISpot 基礎(chǔ)試劑盒和小鼠 IL4 ELISpot 基礎(chǔ)試劑盒 (Mabtech, VA, USA) 進(jìn)行 IFNγ 和 IL4 ELISpot 檢測(cè)。在 37℃ 下,在預(yù)包被抗體的 ELISpot 板中,用抗原刺激脾細(xì)胞和肺細(xì)胞,培養(yǎng) 16-18 小時(shí)。第二天,洗掉細(xì)胞,加入生物素化的檢測(cè)抗體。洗板后,加入 1:30000 稀釋的 Extravidi-ALP 偶聯(lián)物,室溫孵育 1 小時(shí)。洗板后,每孔添加 70μL 顯色液,孵育 20-30min,形成斑點(diǎn),然后用水清洗,干燥。使用 Cytation 7 (BioTek) 對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行量化。每個(gè)點(diǎn)對(duì)應(yīng)一個(gè)單獨(dú)的細(xì)胞因子分泌細(xì)胞。檢測(cè)結(jié)果如下:圖 4 ELIPSOT 方法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞和肺細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的水平2、CTL 活性檢測(cè)疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞 (CTL) 可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞,起到抗腫瘤的作用,因此可以通過檢測(cè) CTL 的殺傷效應(yīng)來反應(yīng)疫苗的效果。常用的檢測(cè)細(xì)殺傷效應(yīng)的方法有很多,下表列舉了一些常用的方法。王曉東等人發(fā)表的文章中提到了 LDH 檢測(cè),檢測(cè)方法如下:從接種疫苗小鼠的脾 臟中分離淋巴細(xì)胞(效應(yīng)細(xì)胞)。EAC 腫瘤細(xì)胞(靶細(xì)胞)與淋巴細(xì)胞(效應(yīng)細(xì)胞-靶細(xì)胞比例為 50:1)共培養(yǎng) 4h,使用乳酸脫氫 (LDH) 法測(cè)定細(xì)胞毒性。將培養(yǎng) 4h 后的培養(yǎng)上清加入在 ELISA 板中,室溫下加入底物溶液,孵育 30min。最 后,加入終止液終止反應(yīng),并用酶標(biāo)儀 (BioTek) 在 490nm 處檢測(cè)光密度。檢測(cè)結(jié)果如下:相對(duì)于 PBS 對(duì)照組來說,T7-MB 組 CTL 細(xì)胞具有顯著的殺傷效應(yīng)。圖 5 LDH 法測(cè)定 CTL 介導(dǎo)的 EAC 靶細(xì)胞的裂解水平3、抗體滴度及親和力檢測(cè)腫瘤疫苗除了可以誘導(dǎo)細(xì)胞免疫之外,也可誘導(dǎo)體液免疫,對(duì)此可通過對(duì)抗體滴度及親和力進(jìn)行檢測(cè)來反應(yīng)疫苗抗腫瘤的效果,ELISA 是一種非常經(jīng)典的檢測(cè)方法。上述關(guān)于胃癌疫苗的文章中通過 ELISA 方法測(cè)定小鼠接種疫苗后血清中總 IgG 含量,具體檢測(cè)過程如下:小鼠接種疫苗后收集血液樣本,通過 3000g 離心 15 分鐘獲得血清樣本。ELISA 板預(yù)先在 4℃ 包被 BSA-MG1 過夜,然后在室溫下依次加載封閉溶液 2h,血清樣品 (1:50 稀釋) 和檢測(cè)抗體 1h。最 后,在體系中加入 p-NPP 底物 (Millipore) 和終止液,用酶標(biāo)儀 (BioTek) 在 405nm 處記錄 OD 值。檢測(cè)結(jié)果如下:相對(duì)于 PBS 對(duì)照組來說,T7-MB 組抗體含量明顯上升。圖6 ELISA法測(cè)定疫苗誘導(dǎo)的血清抗體水平除此之外,在 Emily C. Gale 等人發(fā)表的關(guān)于 mRNA 遞送系統(tǒng)及輔劑研究的文章中,通過 ELISA 的方法測(cè)定了 mRNA OVA 模式疫苗誘導(dǎo)的 OVA 特異性抗體的絕 對(duì)含量及其親和力。具體檢測(cè)方法如下:抗體濃度:小鼠接種加強(qiáng)疫苗后,采集血液樣品,血清按照 1:100 000 進(jìn)行稀釋。采用 anti-OVA mouse IgG1 ELISA (Cayman Chemicals) 試劑,按照試劑廠家的說明進(jìn)行 ELISA 實(shí)驗(yàn)。使用 Synergy H1 Microplate Reader (BioTek) 在 450nm 處記錄 OD 值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清抗體濃度,表示 mg/mL??贵w親和性:將 12 個(gè)梯度稀釋的血清與恒定濃度標(biāo)記 HRP 的 anti-OVA 抗體 (3nM) 混合,并在 OVA 抗原包被的板中室溫孵育 2 小時(shí),洗板后用 TMB 底物孵育,用 HCl 停止反應(yīng)。測(cè)定 450nm 處的 OD 值。根據(jù)業(yè)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的單克隆抗體的共同親和力,假設(shè)對(duì)照抗體的 KD 為 1nM 對(duì)實(shí)驗(yàn)組的 KD 值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。這一假設(shè)僅影響報(bào)告的絕 對(duì) KD 值,而不影響實(shí)驗(yàn)組之間的相對(duì)差異。檢測(cè)結(jié)果如下:pIC 為雙鏈 RNA 結(jié)構(gòu)模擬物,圖E中比較了可溶性的 pIC 和不同納米顆粒遞送系統(tǒng)誘導(dǎo)的絕 對(duì)抗體含量,從圖 E 中可以看出 2B 遞送系統(tǒng)誘導(dǎo)的 OVA 特異性抗體含量最 高。從F和G可以看出 2B 遞送系統(tǒng)相對(duì)于可溶性 pIC 來說誘導(dǎo)的 IgG 親和力也顯著升高。圖 7 pIC/PBAE NPs 增強(qiáng)體液免疫4、ADCC 檢測(cè)疫苗誘導(dǎo)體液免疫產(chǎn)生的抗體能夠捕捉目標(biāo)抗原,阻斷這個(gè)靶分子的功能,也可以引導(dǎo)其他免疫細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞)殺死表達(dá)抗原的靶細(xì)胞,在腫瘤治 療中,特別是血液腫瘤中,抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用 (ADCC) 起著關(guān)鍵作用,ADCC 常用的檢測(cè)方法包括細(xì)胞活力檢測(cè)、LDH 檢測(cè)、工程細(xì)胞株、Delfia、RTCA、細(xì)胞成像檢測(cè)等。王曉東等人發(fā)表的關(guān)于胃癌疫苗研究的文章中,提到了 LDH 方法檢測(cè) ADCC,檢測(cè)方法如下:小鼠接種疫苗后,采集其血清樣本(1:25 稀釋),然后與 EAC 細(xì)胞(靶細(xì)胞)在 37°C 孵育 30min。使用小鼠 NK 細(xì)胞分離試劑盒從正常 BALB/c 小鼠中分離出自然殺傷 (NK) 細(xì)胞(效應(yīng)細(xì)胞),與抗體標(biāo)記的 EAC 細(xì)胞以效靶比 50:1 共培養(yǎng) 4 小時(shí)。采用 LDH 法 (Promega) 測(cè)定細(xì)胞毒性,檢測(cè)方法與之前提到的 CTL 活性檢測(cè)的方法一致。檢測(cè)結(jié)果如下:相對(duì)于 PBS 對(duì)照組來說,T7-MB 組產(chǎn)生的抗體具有顯著的殺傷效應(yīng)。圖 8 LDH 法測(cè)定血清抗體介導(dǎo)的 EAC 靶細(xì)胞的裂解水平腫瘤疫苗生物學(xué)活性檢測(cè)解決方案推薦本文介紹了腫瘤疫苗活性檢測(cè)的常用方法,包括細(xì)胞因子檢測(cè)、CTL 活性檢測(cè)、抗體滴度及親和力檢測(cè)、ADCC 檢測(cè)等方法,涉及到了酶標(biāo)儀、成像系統(tǒng)、流式、RTCA、洗板分液系統(tǒng)等設(shè)備。Agilent 細(xì)胞分析事業(yè)部可以從多個(gè)角度為用戶提供從樣品處理,到結(jié)果檢測(cè)再到數(shù)據(jù)分析的全面解決方案。
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