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2025-01-10 10:52:26大鼠脊髓切片模具: 大鼠脊髓切片模具是一種專門用于制作大鼠脊髓組織切片的工具。它具有精確度高、操作簡便等特點，能夠制作出符合實驗要求的大鼠脊髓組織切片。該模具廣泛應用于神經(jīng)科學研究、病理學等領域，為科研人員提供了重要的實驗工具。通過使用大鼠脊髓切片模具，科研人員可以更好地進行脊髓組織觀察和分析，推動相關領域的研究進展。

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大鼠脊髓切片模具問答

2025-02-11 12:45:14大鼠實驗動物血壓測量如何能夠準確？: 大鼠實驗動物血壓測量：評估與方法應用在醫(yī)學與生物研究領域，大鼠作為常見的實驗動物，廣泛應用于藥物研發(fā)、疾病機制研究及生理功能探索等各個方面。其中，血壓測量作為基礎生理指標之一，對評估動物健康狀態(tài)和藥物效果至關重要。本文將探討大鼠血壓測量的常用方法，測量精度及其在科研中的應用，幫助科研人員在實驗設計和數(shù)據(jù)分析時做出合理選擇。大鼠血壓測量的重要性血壓是維持生理平衡和生命活動的關鍵指標之一，它反映了心臟、血管及其他相關系統(tǒng)的健康狀況。在大鼠實驗中，準確測量血壓不僅有助于了解動物的生理狀態(tài)，還能夠幫助科學家們研究高血壓、心血管疾病等慢性疾病的發(fā)生機制，評估抗高血壓藥物的效果。隨著研究技術的不斷進步，血壓測量已成為探索生理和病理變化的重要工具。常見的血壓測量方法尾動脈法（Tail-cuff method）尾動脈法是目前為常用的大鼠血壓測量方法之一。此方法通過將動物的尾巴暴露于溫熱環(huán)境中，使血管擴張，再通過壓力計測量血壓。雖然尾動脈法操作簡便，適用于大量動物樣本，但該方法可能受到動物應激反應的影響，導致測量結(jié)果的波動。因此，尾動脈法更適用于正常血壓的初步篩查。直視血壓法（Invasive method）直視血壓法，也被稱為動脈插管法，是一種侵入性較強的方法。該方法通過將微型傳感器直接植入大鼠的動脈，實時測量血壓。這種方法的精確度高，能夠獲得大鼠在不同生理狀態(tài)下的血壓波動，常用于高血壓藥物研究或疾病模型的深入探索。因其需要對動物進行手術，因此不適用于大量篩查，且需處理相關倫理問題。間接動態(tài)血壓測量法（Oscillometric method）間接動態(tài)血壓測量法通過監(jiān)測大鼠肢體周圍的壓力變化來推算血壓。與尾動脈法類似，該方法通過儀器測量大鼠肢體（如尾巴、后肢等）部位的血流壓力波動，推導出血壓值。相比于尾動脈法，這種方法對動物的應激反應較小，測量的穩(wěn)定性較好，適合用于長期監(jiān)測。測量方法的選擇與優(yōu)化根據(jù)實驗目的和動物狀態(tài)的不同，選擇合適的血壓測量方法至關重要。對于非侵入性研究，尾動脈法和間接動態(tài)測量法更為常用，前者適用于常規(guī)篩查，而后者則適合長期觀察。對于需要高度數(shù)據(jù)的藥物開發(fā)和疾病研究，動脈插管法是更為理想的選擇，盡管其操作難度和倫理問題較為復雜。結(jié)論與展望大鼠作為實驗動物，血壓測量在科學研究中占據(jù)了重要地位。從非侵入性到侵入性方法，不同的測量技術滿足了不同研究需求。隨著技術的進步和測量精度的提高，未來的血壓測量技術將更加，并能夠在更廣泛的研究領域得到應用?？蒲腥藛T應根據(jù)實驗目的與實際情況選擇合適的測量方法，以保證研究結(jié)果的科學性與可靠性。

2025-01-14 12:00:17擠出機模具怎么調(diào)整: 標題：擠出機模具怎么調(diào)整擠出機模具的調(diào)整是確保生產(chǎn)過程中產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)效率的關鍵步驟。正確的模具調(diào)整能夠顯著降低廢品率，提升生產(chǎn)穩(wěn)定性，并且減少設備的磨損。因此，掌握擠出機模具的調(diào)整技巧對每一位生產(chǎn)操作人員來說都至關重要。本文章將詳細介紹如何對擠出機模具進行調(diào)整，包括常見的調(diào)整方法、注意事項及操作技巧，幫助您更高效地優(yōu)化生產(chǎn)流程，確保模具始終處于佳工作狀態(tài)。 1. 模具調(diào)整的基本概念擠出機模具的調(diào)整主要是為了確保擠出物料在模具中的流動均勻，保證終產(chǎn)品的質(zhì)量。模具在使用過程中，由于溫度、壓力以及物料特性等因素，可能會發(fā)生形變或積垢，因此需要定期進行檢查和調(diào)整。模具的調(diào)整不僅僅是對模具本身的設置，還包括對溫度、壓力等操作條件的優(yōu)化。 2. 調(diào)整前的準備工作在進行模具調(diào)整之前，首先需要確認擠出機的工作狀態(tài)，包括溫度、壓力、螺桿轉(zhuǎn)速等參數(shù)。如果這些基本條件不合適，再進行模具調(diào)整也難以達到理想效果。檢查模具內(nèi)部是否存在積物或磨損，確保模具本身沒有損壞或退化。準備好相關的工具和設備，確保操作過程的順利進行。 3. 常見的模具調(diào)整方法 (1) 調(diào)整溫度控制系統(tǒng) 溫度對擠出過程中的物料流動性和模具的壓力分布有很大影響。通常，模具的溫控系統(tǒng)會設有多個加熱區(qū)，每個區(qū)的溫度需要根據(jù)物料的特性進行調(diào)整。操作人員應根據(jù)產(chǎn)品的要求和物料的種類，合理設置模具各區(qū)的溫度，確保物料在擠出過程中具有合適的流動性。 (2) 模具間隙調(diào)整模具的間隙是影響物料擠出質(zhì)量的另一個重要因素。間隙過小會導致物料堵塞或壓力過大，間隙過大則會導致物料流動不均勻或成型不穩(wěn)定。根據(jù)不同的生產(chǎn)需求，調(diào)整模具的間隙，以確保物料能夠平穩(wěn)均勻地通過模具。 (3) 改變模具壓力模具內(nèi)部的壓力會直接影響擠出物料的密度和形態(tài)。通過調(diào)整模具的壓力，可以改變產(chǎn)品的物理特性，例如厚度、密度等。需要根據(jù)生產(chǎn)要求，通過適當調(diào)節(jié)模具的壓力，以確保成品符合標準。 4. 注意事項與技巧 (1) 逐步調(diào)整每次調(diào)整模具時，應逐步進行，并在每次調(diào)整后觀察擠出產(chǎn)品的質(zhì)量。避免一次性進行大幅度的調(diào)整，以免引發(fā)其他問題。 (2) 定期維護與檢查模具的調(diào)整不僅僅是應對生產(chǎn)過程中出現(xiàn)的問題，還需要定期進行檢查和維護。通過定期清理模具，檢查磨損情況，及時發(fā)現(xiàn)問題并進行修復，能夠延長模具的使用壽命。 (3) 操作人員培訓由于模具調(diào)整涉及多個參數(shù)，操作人員需要具備一定的專業(yè)知識和技能。定期對操作人員進行培訓，提高其對模具調(diào)整的理解和實踐能力，能夠有效提升生產(chǎn)線的整體性能。 5. 結(jié)語擠出機模具的調(diào)整是一項需要細心和專業(yè)知識的工作，通過合理的調(diào)整方法，可以顯著提高生產(chǎn)效率和產(chǎn)品質(zhì)量。操作人員應根據(jù)生產(chǎn)實際情況，靈活運用調(diào)整技巧，并保持模具的良好狀態(tài)，確保擠出過程的順利進行。只有持續(xù)優(yōu)化調(diào)整操作，才能在競爭激烈的市場中保持領先地位。

2023-06-14 11:23:07大鼠17-β-雌二醇ELISA試劑盒的實驗步驟: 　　大鼠17-β-雌二醇ELISA試劑盒的實驗步驟　　大鼠17-β-雌二醇試劑盒操作步驟：　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘?！　?. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外?！　∽⒁庖c：請仔細閱讀產(chǎn)品的詳細使用說明,嚴格遵照規(guī)定操作,必能得出準確的結(jié)果.　　操作注意事項　　1. 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存?！　?. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)?！　?. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用?！　?. 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器?！　?. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?！　?. 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水?！　?. 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值?！　?. 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣?！　?. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。　　Elisa試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

2022-06-24 10:21:40告別純手動切片，智啟切片輕時代: 近年來，聽到越來越多的病理切片技術老師在使用純手動輪轉(zhuǎn)式切片機（以下稱純手動切片機）時抱怨：1、用久了切片精度下降，切出來的片子普遍偏厚；2、做免疫組化或者分子病理研究切片時，精度不高，影響切片質(zhì)量；3、純手動切片機切小樣本的時候，手動控制進樣，容易造成樣本粗修過度；4、長期的手動進樣切片，造成手部肌肉疲勞及不適感加強。為解決以上問題，瑞沃德推出半自動和全自動兩款全新石蠟切片機產(chǎn)品，讓操作者可輕松地得到高質(zhì)量的切片，真正步入高精度、更輕松的切片輕時代。瑞沃德（Reward）秉持著回報的初心，致力于以鑄就國產(chǎn)高品質(zhì)儀器，為病理研究領域貢獻一份力量。一、切片精度高，運行穩(wěn)定精準進樣步進電機驅(qū)動進樣，經(jīng)久耐用，保證進樣精準及使用穩(wěn)定性；頂級十字交叉導軌和精密絲桿，搭配五相高分辨率進樣電機和航空鋁材質(zhì)的水平進樣滑塊，組成高精準進樣系統(tǒng)，保證切片質(zhì)量。精密電機及編碼器，保證自動切片穩(wěn)定順暢；精密刀架精準的刀架側(cè)向移動功能，同一樣本側(cè)向移動更換刀口后位置變化極其微小，刀架底座有刻度，便于刀架定位。二、防止樣本粗修過度，精準控制半刀模式+步進電機，精準修片開啟半刀模式，技術老師可在12點-6點或者12點-9點方向轉(zhuǎn)動手輪修片，無需全輪轉(zhuǎn)動。搭配步進電機，進樣距離以修片厚度為準，減少修片行程，提高修片效率的同時防止樣本粗修過度。半刀模式啟停方便。樣本頭角度可調(diào)節(jié)及復現(xiàn)專利可視化指針標識，角度調(diào)整數(shù)據(jù)直觀可視，調(diào)節(jié)不同傾斜面組織角度時，jingzhun控制樣本頭方向，避免組織樣本浪費?？焖賹⒍嗯_設備調(diào)整為相同角度，使同一樣本在不同設備切片時保持同一角度，減少因粗修導致的樣本浪費。三、人體工學設計，操作更舒適更高效操作更便捷側(cè)面進樣旋鈕與機身一體化，符合人體工程學設計，進樣幅度小，操作更舒適且不占空間。進樣速度0-1800um/s間自由調(diào)節(jié)，操作更高效。采用jungong級器件，結(jié)實耐用，動作壽命2000萬次以上。清理更便捷超大容量廢屑盤，具有磁吸功能，便于拆卸和安裝。特殊涂層材料，抗靜電廢屑盤，不沾蠟，易清潔，清潔時間大大縮短。信息記錄及回溯5英寸觸摸屏，具備歷史記錄系統(tǒng)，便于信息回溯追蹤，快速解決問題。四、保障操作者安全，更安心工作手輪雙鎖定系統(tǒng)同時配備手輪鎖和任意位置鎖雙鎖定系統(tǒng)且自帶提示音，在樣品更換操作中保護手部安全。護刀器/退刀器護刀器覆蓋刀鋒全長，避免操作過程中潛在的受傷風險。更換刀片時，退刀器輕松推出刀片并安全取出。電子剎車和急停按鈕性能穩(wěn)定的電子剎車使手輪處于穩(wěn)定狀態(tài)（自動切片完成后），保護操作者安全。為了快速排除危險，按下紅色緊急停止按鈕，立即停止，拉起即可恢復正常工作。五、四種自動切片模式，切片更智能滿足不同應用場景自動切片需求無需花費時間練習切片技術，機器自動切出高質(zhì)量片子。自動切片穩(wěn)定，能保持切片一致性。全切標本如胚胎、腦等，切片量大，任務重，使用自動切片，可緩解您的切片壓力。四種自動切片模式，滿足不同切片場景需求。切窗功能，保障切片質(zhì)量的同時提高自動切片效率?！畔胍私獾酶?？想要體驗？還等什么？掃碼登記，免費試用！

2022-07-13 15:10:55Neuron：脊髓神經(jīng)元調(diào)控傷害性熱刺激感受新機制: 帶你看文獻，只做純干貨文獻精讀第25期文章概述對人來說，皮膚溫度高于43℃會引起急性疼痛，長時間暴露于傷害性熱刺激中會造成組織損傷，并破壞體溫的動態(tài)平衡。脊髓背角神經(jīng)元在處理和傳遞來自背根神經(jīng)節(jié)（Dorsal Root Ganglion, DRG）痛覺傳入纖維的感覺信號中起著關鍵作用，但是，傷害性熱刺激信號在脊髓中的處理過程尚不清楚。2022年5月12日，美國凱斯西儲大學醫(yī)學院的研究人員在《Neuron》雜志上發(fā)表題為“A novel spinal neuron connection for heat sensation”的文章，該研究證實了由脊髓ErbB4+（ErbB4，一種表皮生長因子受體家族的酪氨酸激酶受體）神經(jīng)元能夠通過NRG1-ErbB4信號通路來調(diào)控機體對傷害性熱刺激的感受，揭示了脊髓中一個新的傷害性熱刺激感受的調(diào)控機制。核心觀點1、脊髓ErbB4+神經(jīng)元能夠被傷害性熱刺激所激活；2、脊髓ErbB4+神經(jīng)元受TRPV1+傷害感受器的單突觸神經(jīng)支配；3、消融或抑制ErbB4+神經(jīng)元會降低動物對傷害性熱刺激的感受；4、同時抑制脊髓中ErbB4+、SST+和CCK+神經(jīng)元能夠進一步降低傷害性熱刺激的感受；5、NRG1-ErbB4信號通路能夠促進傷害性熱刺激的感受和熱痛過敏反應。研究結(jié)果分析1. 傷害性熱刺激能夠激活脊髓中ErbB4+興奮性神經(jīng)元為了識別對傷害性熱刺激產(chǎn)生反應的神經(jīng)元，作者利用了EGFP表達依賴于內(nèi)源性cFos啟動子的cFos::shEGFP小鼠。當cFos::shEGFP小鼠受到傷害性熱刺激（52℃熱板）時，脊髓背角神經(jīng)元中的shEGFP表達增加，大量的shEGFP+神經(jīng)元位于脊髓背角表層（Ⅰ~Ⅱ?qū)樱@是傷害性感覺信息的接收區(qū)域。單細胞RT-PCR結(jié)果顯示，78%的shEGFP+神經(jīng)元為興奮性神經(jīng)元（Vglut2+），22%的shEGFP+神經(jīng)元為GABA能神經(jīng)元（GAD65/67+）。這與之前的研究結(jié)果一致，即大多數(shù)對傷害性熱刺激產(chǎn)生反應的神經(jīng)元是興奮性神經(jīng)元。然而，shEGFP+神經(jīng)元具有極高的異質(zhì)性，涉及到多種類型的神經(jīng)元，比如，其中膽囊收縮素陽性（Cholecystokinin+, CCK+）和生長激素抑制素陽性（Somatostatin+, SST+）神經(jīng)元分別占18%和14%。值得注意的是，~1/3的shEGFP+神經(jīng)元表達了ErbB4，而ErbB4主要表達于興奮性神經(jīng)元中。這些結(jié)果表明，傷害性熱刺激能夠激活一群ErbB4+興奮性神經(jīng)元。為了驗證這一假設，作者對ErbB4:: CreER;Ai9小鼠進行熱刺激，該小鼠tdTomato的表達依賴于內(nèi)源性的ErbB4啟動子。在脊髓中，ErbB4-tdT+神經(jīng)元主要集中在背角，分布于多層背角和脊髓外側(cè)核（Lateral Spinal Nucleus, LSN）中，然而，熱激活的ErbB4-tdT神經(jīng)元（cFos+）主要位于脊髓背角表層中。ErbB4-tdT神經(jīng)元約占cFos+神經(jīng)元33%。這些結(jié)果確認了脊髓背角表層ErbB4+興奮性神經(jīng)元是一種新型的傷害性熱反應細胞。2. 脊髓ErbB4+，SST+和CCK+神經(jīng)元負責傷害性熱刺激感受接下來，作者通過在ErbB4::CreER;LSL-EYFP（ErbB4-EYFP）小鼠椎管內(nèi)注射AAV-mCherry-DIO-dtA（AAV-dtA）病毒，在ErbB4+細胞中特異性的表達A型白喉毒素（diphtheria toxin subunit A, dtA）來消融脊髓中的ErbB4+神經(jīng)元。與注射對照病毒的小鼠相比，注射AAV-dtA的ErbB4-EYFP小鼠中EYFP+細胞和Nmur2+神經(jīng)元數(shù)目顯著減少。接下來，小鼠接受了一系列的行為測試。與對照小鼠相比，注射AAV-dtA的ErbB4-EYFP小鼠在熱板以及哈格里夫斯實驗中，后爪退縮和舔爪的潛伏期中增加了~40%，表明ErbB4+神經(jīng)元對傷害性熱刺激的感受至關重要。辣椒素能夠激活感覺神經(jīng)元中的TRPV1受體，誘發(fā)自發(fā)性疼痛，與對照組相比，在AAV-dtA注射的ErbB4-EYFP小鼠，辣椒素誘導的小鼠舔足次數(shù)減少了30%。這些結(jié)果表明，ErbB4+神經(jīng)元是傷害性熱刺激的感受所必需的。此外，注射AAV-dtA的ErbB4-EYFP小鼠對機械刺激、冰冷-溫熱、以及癢刺激的反應與對照類似。這表明脊髓ErbB4+神經(jīng)元可能不參與這些刺激的感受。除了ErbB4+神經(jīng)元，SST+和CCK+中間神經(jīng)元也會被傷害性熱刺激激活。為了確定它們對熱刺激感受的貢獻，作者分別消融了這些神經(jīng)元。在熱板以及哈格里夫斯實驗中，消融SST+神經(jīng)元后小鼠的反應潛伏期分別增加了26%和22%，而消融CCK+神經(jīng)元的反應潛伏期則沒有增加。值得注意的是，將ErbB4+、SST+和CCK+三類神經(jīng)元同時消融時，小鼠對傷害性熱刺激感受的抑制作用顯著增加到60% - 80%。這些結(jié)果表明，傷害性熱刺激感受涉及脊髓中的ErbB4+、SST+和CCK+神經(jīng)元。3. ErbB4+神經(jīng)元受TRPV1+痛覺感受器的單突觸神經(jīng)支配，且能被傷害性熱刺激而非機械刺激所激活不同的軀體感覺信息由不同類型的傳入纖維傳入脊髓背角：Aβ纖維主要用于傳遞非傷害性刺激，而Aδ和C纖維用于傳遞傷害性刺激。為了確定ErbB4+神經(jīng)元的信息來源，作者利用帶背根的縱向脊髓切片來記錄背角中ErbB4+神經(jīng)元的興奮性突觸后電流（EPSCs）。對于Aδ和C纖維的刺激傳入，分別有76%和54%的表層ErbB4+神經(jīng)元記錄到了EPSCs，其中67%和46%的ErbB4+神經(jīng)元為單突觸傳入。相比之下，表層中有25%的ErbB4+神經(jīng)元記錄到Aβ纖維信息傳入，只有9.1%是單突觸傳入。此外，在深層ErbB4+神經(jīng)元中，6.7%和5.6%的神經(jīng)元接受Aδ和C纖維的單突觸傳入。這些結(jié)果表明，淺表層的ErbB4+神經(jīng)元主要接受攜帶傷害性信息的C和Aδ纖維的單突觸傳入。為了驗證ErbB4+神經(jīng)元是否被TRPV1+傷害性感受器的突觸支配，作者用到了QX-314（一種細胞內(nèi)鈉通道抑制劑，其細胞進入依賴于TRPV1的激活）。單獨使用QX-314對C纖維傳入的ErbB4+神經(jīng)元EPSC振幅影響不大。然而，在TRPV1激活物辣椒素存在的情況下，QX-314使EPSCs減弱，表明ErbB4+神經(jīng)元接受TRPV1+纖維的支配。與之一致的是，在QX-314和辣椒素的存在下，對C纖維刺激有反應的ErbB4+神經(jīng)元的數(shù)量減少了。這種作用是C纖維特異性的，因為A纖維中TRPV1表達較低，QX-314對刺激A纖維產(chǎn)生的EPSCs的影響不大。這些結(jié)果為表層ErbB4+神經(jīng)元受TRPV1+ C纖維的支配提供了藥理學依據(jù)。為了找到這種神經(jīng)支配的形態(tài)學證據(jù)，作者將AAV-DIO-mCherry注射到TRPV1::Cre;ErbB4::CreER小鼠脊髓腰膨大區(qū)標記ErbB4+神經(jīng)元，并將AAV-DIO-ChR2-EYFP注射到DRG中標記TRPV1+末端。脊髓切片用突觸后標記物Homer進行染色標記。可以看到ErbB4+神經(jīng)元（mCherry+）被TRPV1+末端（即EYFP+）包圍。TRPV1+末端與Homer+突觸以及ErbB4+細胞密切相關。這些結(jié)果進一步表明，脊髓背角表層ErbB4+神經(jīng)元受到DRG中TRPV1+ 傳入纖維的支配。為了證明這些突觸是有功能的，作者利用光遺傳學激活表達視蛋白ChR2的TRPV1+末端。42%的表層ErbB4+神經(jīng)元能夠在光刺激下誘發(fā)EPSCs，這些EPSCs被TTX所抑制，而在TTX和4-AP同時存在的情況下，仍有36%的ErbB4+表層神經(jīng)元能夠被光刺激誘發(fā)EPSCs，這表明它們是由DRG中TRPV1+傳入纖維的單突觸所支配的。綜上所述，脊髓背角表層ErbB4+神經(jīng)元直接受TRPV1+傷害性感受器的單突觸神經(jīng)支配。為了確定ErbB4+神經(jīng)元是否對機械刺激產(chǎn)生反應，作者將AAV-DIO-ChR2-EYFP注射到MrgprD::CreER;ErbB4::CreER小鼠DRG中，讓傳導機械刺激的MrgprD+神經(jīng)元表達ChR2，同時將AAV-DIO-mCherry注射到腰膨大來標記ErbB4+神經(jīng)元。然而，對脊髓切片進行光刺激，大多數(shù)的ErbB4+神經(jīng)元（87%）未能記錄到EPSCs，這表明大多數(shù)ErbB4+神經(jīng)元不接受來自機械刺激感覺神經(jīng)元的傳入。在3個響應ErbB4+神經(jīng)元中，有2個被TTX和4-AP抑制，表明它們接受了多級突觸傳導，只有一個出現(xiàn)了4-AP增強的EPSCs，表明其受到機械感覺神經(jīng)元的單突觸支配。作為對照，作者采用了相同的策略來觀察SST+脊髓神經(jīng)元對機械感覺神經(jīng)元刺激的反應。大多數(shù)記錄的SST+神經(jīng)元（72%）產(chǎn)生了光刺激誘導的EPSCs，表明它們接受MrgprD+機械感覺神經(jīng)元的傳入，且61%為單突觸支配。這些結(jié)果表明，脊髓背角表層ErbB4+神經(jīng)元主要受傷害性熱刺激感受神經(jīng)元的支配，而非機械刺激感覺神經(jīng)元的支配。為了進一步表征在更接近生理條件下ErbB4+神經(jīng)元的敏感性，作者構(gòu)建了半完整的離體檢測范式，通過分離相連的部分脊髓、腰椎根、DRG、隱神經(jīng)和后肢皮膚，來記錄脊髓ErbB4+神經(jīng)元對皮膚刺激的反應。在記錄的16個ErbB4+神經(jīng)元中，有9個（56%）對52℃刺激有反應，有5個（30%）對0℃刺激有反應。對15℃和40℃刺激有反應的神經(jīng)元分別為1個（7%）和2個（13%）。這些結(jié)果表明，表層ErbB4+神經(jīng)元對傷害性熱刺激的反應較好，其次是冰冷刺激，而對涼或溫熱刺激的反應較弱。為了確定ErbB4+神經(jīng)元是否對機械刺激有反應，研究者用Von-Frey絲刺激皮膚。在16個記錄的神經(jīng)元中，有14個無反應。這些結(jié)果表明，脊髓背角表層ErbB4+神經(jīng)元對傷害性熱刺激比機械刺激更敏感。4.抑制ErbB4+神經(jīng)元會減弱動物對傷害性熱刺激的感受，反之則增強動物對熱刺激的感受隨后，作者探討了脊髓ErbB4+神經(jīng)元活性對傷害性熱刺激感受的影響。為了降低ErbB4+神經(jīng)元的活性，作者將AAV-DIO-hM4Di-mCherry（AAV-hM4Di）注射到ErbB4::CreER小鼠的脊髓腰膨大，并通過CNO來抑制ErbB4+神經(jīng)元活性。與對照相比，抑制ErbB4+神經(jīng)元增加了小鼠在熱板和哈格里夫斯實驗中的反應潛伏期，并減少了辣椒素誘導的舔足。抑制SST+而非CCK+神經(jīng)元，小鼠在熱板以及哈格里夫斯實驗中的反應潛伏期增加，但對辣椒素誘導的舔足沒有影響。值得注意的是，當這三類的神經(jīng)元活性同時降低時，小鼠對傷害性熱刺激感受的抑制效果增加60%~80%。這些結(jié)果表明脊髓ErbB4+、SST+和CCK+神經(jīng)元的活動共同參與傷害性熱刺激感受，支持群體編碼模式理論。為了增加脊髓ErbB4+神經(jīng)元的活性，作者將AAV-DIO-hM3Dq-mCherry注射到ErbB4::CreER小鼠的脊髓腰膨大。與對照相比，激活ErbB4+神經(jīng)元降低了小鼠在熱板和哈格里夫斯實驗中的反應潛伏期，且增加了辣椒素誘導的持續(xù)舔足時間。表明， ErbB4+神經(jīng)元激活增強了動物對傷害性熱刺激的感受?？傊?，這些結(jié)果揭示了ErbB4+神經(jīng)元在傷害性熱刺激感受中的關鍵作用。5. 傷害性熱刺激的感受依賴ErbB4激酶的活性ErbB4由生長因子神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1（Neuregulin 1, NRG1）所激活，為了檢測NRG1-ErbB4信號通路是否參與了傷害性熱感受，作者檢測了脊髓背角NRG1和pErbB4的表達。結(jié)果顯示，暴露于52℃熱板的小鼠其脊髓背角NRG1和pErbB4的表達增加，表明傷害性熱刺激可以增強脊髓背角的NRG1-ErbB4信號。接下來，作者評估了 ErbB4的存在對傷害性熱刺激的感受是否必要，為此，作者構(gòu)建了ErbB4-rKO小鼠（該小鼠在除心臟外的任何組織，包括脊髓中都不表達ErbB4）。值得注意的是，與對照組小鼠相比，ErbB4-rKO小鼠在熱板和哈格里夫斯實驗中的反應潛伏期增加，且辣椒素誘導的舔足次數(shù)減少，表明ErbB4在這些反應中發(fā)揮了作用。隨后，為了消除其它組織中ErbB4突變可能存在的影響，作者通過在ErbB4f/f小鼠脊髓腰膨大注射了AAV-Cre-GFP病毒，來特異性的敲除脊髓背角中的ErbB4。與對照組相比，脊髓背角ErbB4敲除使得小鼠在熱板和哈格里夫斯實驗中的反應潛伏期增加，辣椒素誘導的舔足次數(shù)減少。這些結(jié)果揭示了ErbB4在傷害性熱刺激感受中的必要作用。為了確定熱感受是否涉及ErbB4的激酶活性激活，作者以鞘內(nèi)注射的方式給小鼠注射阿法替尼（一種ErbB激酶抑制劑）。阿法替尼顯著減少了脊髓腰膨大中pErbB4的表達。動物在熱板、哈格里夫斯和辣椒素實驗中的反應也減弱，但對針刺、掐和Von-Frey絲刺激反應的影響不大。這些結(jié)果提示ErbB4激酶活性與傷害性熱刺激感受有關。為了進一步驗證這一點，作者對敲入突變株的T796G小鼠進行了研究，在T796G小鼠中，ErbB4可以被體積較大的抑制劑1NMPP1特異性抑制。鞘內(nèi)注射1NMPP1可降低脊髓腰膨大中pErbB4的表達。在行為反應測試中，1NMPP1顯示了類似阿法替尼的效果?？傊@些結(jié)果表明脊髓中ErbB4的激酶活性與傷害性熱刺激感受有關。6. DRG中的NRG1參與了傷害性熱刺激的感受為了確定傷害性熱刺激感受是否與內(nèi)源性NRG1有關，小鼠被注射了ecto-ErbB4（一種NRG1中和肽）。鞘內(nèi)注射ecto-ErbB4可減少脊髓中的pErbB4表達，并且增加小鼠在熱板和哈格里夫斯實驗中的反應潛伏期，減少辣椒素引起的舔足，但不會影響對針刺、掐和Von-Frey刺激的反應。這些結(jié)果表明，內(nèi)源性NRG1參與了傷害性熱刺激的感受。NRG1在DRG中大量表達，為了確定DRG神經(jīng)元中的NRG1是否參與熱感覺，作者構(gòu)建了advillin-CreER;NRG1f/f小鼠，通過給予他莫西芬，可以誘導小鼠感覺性神經(jīng)節(jié)中NRG1的條件性敲除（cKO）。與對照相比，cKO小鼠脊髓中的NRG1和pErbB4蛋白的表達均減少，NRG1 mRNA的水平在DRG中降低，但在脊髓中沒有顯著變化。cKO小鼠在熱板和哈格里夫斯實驗中的反應潛伏期增加，在辣椒素實驗中的舔足次數(shù)減少。然而，脊髓中的NRG1敲低對熱刺激行為反應或背角中的pErbB4幾乎沒有影響。這些結(jié)果表明DRG中的NRG1信號在傷害性熱刺激的感受中起作用。7. NRG1-ErbB4信號能夠調(diào)控ErbB4+神經(jīng)元谷氨酸的傳遞上述結(jié)果已經(jīng)證明，表層中c-Fos+ ErbB4+神經(jīng)元大部分是興奮性神經(jīng)元。為了確定NRG1和ErbB4是否能夠調(diào)節(jié)谷氨酸的傳遞，作者將AAV-DIO-ChR2-EYFP病毒注射到ErbB4::CreER;Ai9小鼠中，在ErbB4+神經(jīng)元中特異性表達ChR2。在脊髓切片中，通過光刺激激活這些表達ChR2的ErbB4+神經(jīng)元，并在其鄰近的ErbB4-神經(jīng)元中記錄突觸后電流（PSCs）。在記錄的112 個ErbB4-神經(jīng)元中，當膜電位鉗制在-70 mV時，其中31個神經(jīng)元記錄到了光刺激誘發(fā)的內(nèi)向電流；當膜電位為0 mV時，所有神經(jīng)元均未記錄到光刺激誘發(fā)的外向電流，表明這些電流是EPSCs，而不是IPSCs。這些結(jié)果表明，表層的ErbB4+神經(jīng)元通過谷氨酸傳遞與下游神經(jīng)元進行交流。事實上，這些EPSCs能夠被AMPA受體和NMDA受體抑制劑CNQX和AP-5阻斷。根據(jù)這些EPSCs對TTX和4-AP的潛伏期和阻抗，可以確定，半數(shù)下游神經(jīng)元接受ErbB4+神經(jīng)元的單突觸神經(jīng)支配。用生物素標記這些記錄神經(jīng)元的形態(tài)特征也支持這一觀點。接下來，作者確定了ErbB4+神經(jīng)元和靶細胞之間的谷氨酸傳遞是否受到NRG1-ErbB4信號通路的調(diào)控。在給予NRG1后的15分鐘內(nèi)，光刺激誘發(fā)的EPSCs的波幅顯著增加，而這種作用在洗脫后減弱，表明NRG1促進谷氨酸傳遞。此外，給予ErbB4抑制劑阿法替尼降低了EPSC幅值，表明ErbB4激酶活性的參與谷氨酸傳遞?？傊?，這些數(shù)據(jù)證明了NRG1-ErbB4信號通路在脊髓谷氨酸傳遞中的作用。8. NRG1-ErbB4信號通路參與病理性的熱痛過敏在周圍神經(jīng)炎癥或損傷等病理條件下，機體對熱刺激的反應更加敏感。在完全弗氏佐劑（Complete Freund’s Adjuvant, CFA）引起炎癥性疼痛模型中，小鼠患肢在哈格里夫斯實驗中的反應潛伏期顯著降低。以下證據(jù)能夠表明NRG1-ErbB4信號通路在炎癥引起的熱痛過敏中起作用。首先，NRG1和pErbB4在CFA注射小鼠的同側(cè)脊髓腰膨大中的表達增加。第二，在哈格里夫斯實驗中，鞘內(nèi)中和NRG1能夠增加小鼠撤足的潛伏期。第三，阿法替尼能夠抑制野生型小鼠的熱痛過敏，1NMPP1能夠抑制T796G小鼠的熱痛過敏。此外，作者還研究了該通路在慢性壓迫性損傷（Chronic Constriction Injury, CCI）誘導的熱痛過敏反應中的潛在作用。CCI能夠誘導小鼠在哈格里夫斯實驗中的反應潛伏期降低，提示發(fā)生熱痛過敏。與假手術小鼠相比，CCI組小鼠同側(cè)腰膨大中NRG1和pErbB4的表達升高。野生型鞘內(nèi)給予ecto-ErbB4、阿法替尼、或T796G小鼠給予1NMPP1均可降低CCI引起的熱痛過敏。這些結(jié)果支持NRG1-ErbB4信號通路參與病理性的熱過敏的觀點?？偨Y(jié)該研究通過分析熱刺激感受神經(jīng)元，識別出脊髓背角表層ErbB4在傷害性熱刺激的感受中發(fā)揮了關鍵作用。這些ErbB4+神經(jīng)元顯示以下特性。首先，它們主要接收來自攜帶傷害性信息的Aδ和C纖維的單突觸傳入，而不是接受來自攜帶非傷害性信息的Aβ纖維傳入。其次，ErbB4+神經(jīng)元受DRG中TRPV1+傷害性傳入纖維的單突觸支配，對傷害性熱刺激反應較好，而對機械刺激反應較差。第三，消融或抑制ErbB4+神經(jīng)元減弱了動物在熱板、哈格里夫斯以及辣椒素實驗中的反應，表明它們的活動與傷害性熱刺激的感受有關。最后，文章證明了NRG1-ErbB4信號通路在生理條件下的傷害性熱刺激感受和病理條件下的熱痛過敏反應中的作用。亮點研究方法這項工作闡述了脊髓ErbB4+神經(jīng)元在傷害性熱刺激感受中的作用機制。研究用到了動物手術造模、行為學評估、光遺傳學、電生理記錄、組織病理檢測、給藥以及分子檢測等實驗技術。瑞沃德深耕生命科學研究領域20年，一直致力于為客戶提供可信賴的解決方案和服務，可提供該研究中涉及的動物手術造模、行為學評估、光遺傳學、電生理記錄、組織病理檢測、給藥以及分子檢測等實驗的完整解決方案。截至目前，瑞沃德產(chǎn)品及服務覆蓋海內(nèi)外 100 多個國家和地區(qū)，客戶涵蓋700+醫(yī)院，1000+科研院所，6000+高等院校，已助力科研人員發(fā)表SCI文章12000+，獲得行業(yè)廣泛認可。原文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.neuron.2022.04.021