色譜法，又稱層析法根據(jù)其分離原理，有吸附色譜分配色譜離子交換色譜與排阻色譜等方法 吸附色譜是利用吸附劑對被分離物質(zhì)的吸附能力不同，用溶劑或氣體洗脫，以使組分分離常用的吸附劑有氧化鋁硅膠聚酰胺等有吸附活性的物質(zhì) 分配色譜是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)不同，以使組分分離其中一相為液體，涂布或使之鍵合在固體載體上，稱固定相；另一相為液體或氣體，稱流動相常用的載體有硅膠硅藻土硅鎂型吸附劑與纖維素粉等 離子交換色譜是利用被分離物質(zhì)在離子交換樹脂上的離子交換勢不同而使組分分離常用的有不同強(qiáng)度的陽陰離子交換樹脂，流動相一般為水或含有有機(jī)溶劑的緩沖液 排阻色譜又稱凝膠色譜或凝膠滲透色譜，是利用被分離物質(zhì)分子量大小的不同和在填料上滲透程度的不同，以使組分分離常用的填料有分子篩葡聚糖凝膠微孔聚合物微孔硅膠或玻璃珠等，可根據(jù)載體和試樣的性質(zhì)，選用水或有機(jī)溶劑為流動相 色譜法的分離方法，有柱色譜法紙色譜法薄層色譜法氣相色譜法GX液相色譜法等色譜所用溶劑應(yīng)與試樣不起化學(xué)反應(yīng)，并應(yīng)用純度較高的溶劑色譜時的溫度，除氣相色譜法或另有規(guī)定外，系指在室溫下操作 分離后各成分的檢出，應(yīng)采用各單體中規(guī)定的方法通常用柱色譜紙色譜或薄層色譜分離有色物質(zhì)時，可根據(jù)其色帶進(jìn)行區(qū)分，對有些無色物質(zhì)，可在245-365nm的紫外燈下檢視紙色譜或薄層色譜也可噴顯色劑使之顯色薄層色譜還可用加有熒光物質(zhì)的薄層硅膠，采用熒光熄滅法檢視用紙色譜進(jìn)行定量測定時，可將色譜斑點部分剪下或挖取，用溶劑溶出該成分，再用分光光度法或比色法測定，也可用色譜掃描儀直接在紙或薄層板上測出，也可用色譜掃描儀直接以紙或薄層板上測出柱色譜氣相色譜和GX液相色譜可用接于色譜柱出口處的各種檢測器檢測柱色譜還可分部收集流出液后用適宜方法測定 柱色譜法 所用色譜管為內(nèi)徑均勻下端縮口的硬質(zhì)玻璃管，下端用棉花或玻璃纖維塞住，管內(nèi)裝有吸附劑色譜柱的大小，吸附劑的品種和用量，以及洗脫時的流速，均按各單體中的規(guī)定吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能保持大小均勻，以保證良好的分離效果，除另有規(guī)定外通常多采用直徑為0.07-0.15mm的顆粒吸附劑的活性或吸附力對分離效果有影響，應(yīng)予注意 吸附劑的填裝 干法：將吸附劑一次加入色譜管，振動管壁使其均勻下沉，然后沿管壁緩緩加入開始層析時使用的流動相，或?qū)⑸V管下端出口加活塞，加入適量的流動相，旋開活使流動相緩緩滴出，然后自管頂緩緩加入吸附劑，使其均勻地潤濕下沉，在管內(nèi)形成松緊適度的吸附層操作過程中應(yīng)保持有充分的流動相留在吸附層的上面濕法：將吸附劑與流動相混合，攪拌以除去空氣泡，徐徐傾入色譜管中，然后再加入流動相，將附著于管壁的吸附劑洗下，使色譜柱表面平整 俟填裝吸附劑所用流動相從色譜柱自然流下，液面將柱表面相平時，即加試樣溶液 試樣的加入 除另有規(guī)定外，將試樣溶于層析時使用的流動相中，再沿色譜管壁緩緩加入注意勿使吸附劑翻起或?qū)⒃嚇尤苡谶m當(dāng)?shù)娜軇┲信c少量吸附劑混勻，再使溶劑揮發(fā)去盡后使呈松散狀；將混有試樣的吸附劑加在已制備好的色譜柱上面如試樣在常用溶劑中不溶解，可將試樣與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻后加入 洗脫 除另有規(guī)定外，通常按流動相洗脫能力大小，遞增變換流動相的品種和比例，分別分部收集流出液，至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時，再改變流動相的品種和比例操作過程中應(yīng)保持有充分的流動相留在吸附層的上面