藥物分析液相色譜流動(dòng)相應(yīng)用小常識(shí) 一液相色譜流動(dòng)相的性質(zhì)要求 一個(gè)理想的液相色譜流動(dòng)相溶劑應(yīng)具有低粘度與檢測(cè)器兼容性好易于得到純品和低毒性等特征 選好填料（固定相）后，強(qiáng)溶劑使溶質(zhì)在填料表面的吸附減少，相應(yīng)的容量因子k降低；而較弱的溶劑使溶質(zhì)在填料表面吸附增加，相應(yīng)的容量因子k升高因此，k值是流動(dòng)相組成的函數(shù)塔板數(shù)N一般與流動(dòng)相的粘度成反比所以選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)考慮以下幾個(gè)方面： 流動(dòng)相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)低交聯(lián)度的離子交換樹(shù)脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機(jī)相會(huì)溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質(zhì)堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統(tǒng)酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng) 純度色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過(guò)有關(guān)，特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí) 必須與檢測(cè)器匹配使用UV檢測(cè)器時(shí)，所用流動(dòng)相在檢測(cè)波長(zhǎng)下應(yīng)沒(méi)有吸收，或吸收很小當(dāng)使用示差折光檢測(cè)器時(shí)，應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相，以提高靈敏度 粘度要低（應(yīng)<2cp）高粘度溶劑會(huì)影響溶質(zhì)的擴(kuò)散傳質(zhì)，降低柱效，還會(huì)使柱壓降增加，使分離時(shí)間延長(zhǎng)**選擇沸點(diǎn)在100以下的流動(dòng)相 二液相色譜流動(dòng)相的pH值 采用反相色譜法分離弱酸（3pKa7）或弱堿（7pKa8）樣品時(shí)，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，以YZ樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子YZ技術(shù)對(duì)于弱酸，流動(dòng)相的pH值越小，組分的k值越大，當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時(shí)，弱酸主要以分子形式存在；對(duì)弱堿，情況相反分析弱酸樣品時(shí)，通常在流動(dòng)相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱堿樣品時(shí)，通常在流動(dòng)相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液 注：流動(dòng)相中加入有機(jī)胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的相互作用，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象所以在這種情況下有機(jī)胺（如三乙胺）又稱為減尾劑或除尾劑 三液相色譜流動(dòng)相的選擇 在化學(xué)鍵合相色譜法中，溶劑的洗脫能力直接與它的極性相關(guān)在正相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而增加；BR>正相色譜的流動(dòng)相通常采用烷烴加適量極性調(diào)整劑 反相色譜的流動(dòng)相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇乙腈四氫呋喃等極性調(diào)整劑的性質(zhì)及其所占比例對(duì)溶質(zhì)的保留值和分離選擇性有顯著影響一般情況下，甲醇-水系統(tǒng)已能滿足多數(shù)樣品的分離要求，且流動(dòng)相粘度小價(jià)格低，是反相色譜Z常用的流動(dòng)相但Snyder則推薦采用乙腈-水系統(tǒng)做初始實(shí)驗(yàn)，因?yàn)榕c甲醇相比，乙腈的溶劑強(qiáng)度較高且粘度較小，并可滿足在紫外205nm處檢測(cè)的要求，因此，綜合來(lái)看，乙腈-水系統(tǒng)要優(yōu)于甲醇-水系統(tǒng)，但價(jià)格較貴 在分離含極性差別較大的多組分樣品時(shí)，為了使各組分均有合適的k值并分離良好，也需采用梯度洗脫技術(shù) 四液相色譜流動(dòng)相的濾過(guò) 所有溶劑使用前都必須經(jīng)0.45m（或0.22m）濾過(guò)，以除去雜質(zhì)微粒，色譜純?cè)噭┮膊焕猓ǔ窃跇?biāo)簽上標(biāo)明"已濾過(guò)"） 用濾膜過(guò)濾時(shí)，特別要注意分清有機(jī)相（脂溶性）濾膜和水相（水溶性）濾膜有機(jī)相濾膜一般用于過(guò)濾有機(jī)溶劑，過(guò)濾水溶液時(shí)流速低或?yàn)V不動(dòng)水相濾膜只能用于過(guò)濾水溶液，嚴(yán)禁用于有機(jī)溶劑，否則濾膜會(huì)被溶解！溶有濾膜的溶劑不得用于HPLC對(duì)于混合流動(dòng)相，可在混合前分別濾過(guò)，如需混合后濾過(guò)，有機(jī)相濾膜現(xiàn)在已有混合型濾膜出售 五液相色譜流動(dòng)相的脫氣 所用流動(dòng)相必須預(yù)先脫氣，否則容易在系統(tǒng)內(nèi)逸出氣泡，影響泵的工作氣泡還會(huì)影響柱的分離效率，影響檢測(cè)器的靈敏度基線穩(wěn)定性，甚至使無(wú)法檢測(cè)此外，溶解在流動(dòng)相中的氧還可能與樣品流動(dòng)相甚至固定相（如烷基胺）反應(yīng)溶解氣體還會(huì)引起溶劑pH的變化，對(duì)分離或分析結(jié)果帶來(lái)誤差 溶解氧能與某些溶劑（如甲醇四氫呋喃）形成有紫外吸收的絡(luò)合物，此絡(luò)合物會(huì)提高背景吸收（特別是在260nm以下），并導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度的輕微降低，但更重要的是，會(huì)在梯度淋洗時(shí)造成基線漂移在熒光檢測(cè)中，溶解氧在一定條件下還會(huì)引起淬滅現(xiàn)象，特別是對(duì)芳香烴脂肪醛酮等在某些情況下，熒光響應(yīng)可降低達(dá)95%在電化學(xué)檢測(cè)中（特別是還原電化學(xué)法），氧的影響更大 除去流動(dòng)相中的溶解氧將大大提高UV檢測(cè)器的性能，也將改善在一些熒光檢測(cè)應(yīng)用中的靈敏度超聲脫氣比較好，10-20分鐘的超聲處理對(duì)許多有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑/水混合液的脫氣是足夠了，此法不影響溶劑組成超聲時(shí)應(yīng)注意避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸，以免玻璃瓶破裂，容器內(nèi)液面不要高出水面太多 六液相色譜流動(dòng)相的貯存 流動(dòng)相一般貯存于玻璃聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中因許多有機(jī)溶劑如甲醇乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導(dǎo)致溶劑受污染這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低貯存容器一定要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動(dòng)相 磷酸鹽乙酸鹽緩沖液很易長(zhǎng)霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用如確需貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在短期內(nèi)使用完畢