背 景 介 紹

MDSCs可分為單核型和粒細(xì)胞型MDSCs  (M-MDSCs和PMN-MDSCs)。固有免疫方面，MDSCs可以抑 制NK細(xì)胞功能；誘導(dǎo) Treg擴(kuò)增，促進(jìn)Treg對(duì)免疫的負(fù)調(diào)控作用；在適應(yīng)性免疫方面MDSCs可以抑 制T細(xì)胞免疫應(yīng)答。 

MDSCs通過一系列細(xì)胞因子與其他免疫細(xì)胞相互作用，多種機(jī)制共同作用對(duì)免疫細(xì)胞進(jìn)行調(diào)節(jié)。MDSCs是樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)、巨噬細(xì)胞和（或）粒細(xì)胞的前體，在癌癥、慢性感染、自身免疫病和移植的發(fā)病機(jī)理中起關(guān)鍵作用。以往的研究多聚焦在腫瘤方向。

今天要給大家介紹的一篇文章是第 一個(gè)研究MDSCs在膿毒癥中的積極作用的。由于膿毒癥患者表現(xiàn)出炎癥和免疫抑 制的跡象，因此 MDSCs 可能通過抑 制某些患者的有害炎癥來提供益處。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，此研究測(cè)試了患有肺炎和多器官功能障礙且死亡可能性很高的重癥膿毒癥患者的 MDSCs。

實(shí)驗(yàn)方案

此文中的實(shí)驗(yàn)為一種靶向流式細(xì)胞術(shù)方法，使用DURAClone(Beckman Coulter)的靶向MDSCs的凍干熒光標(biāo)記抗體混合物的試管。

DURAClone方案的優(yōu)勢(shì)：

• 減少樣本處理/標(biāo)記和分析導(dǎo)致的可變性，增加不同研究中心實(shí)驗(yàn)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)化和可比性。

• 預(yù)混合干粉試管，提高實(shí)驗(yàn)效率。

 DURAClone(Beckman Coulter) MDSCs流式方案

M-MDSCs表型為：CD11b+ CD14+ CD15-/low CD16- CD33+ HLA-DR-/low   。

PMN-MDSCs 表型為：CD11b+ CD14- CD15+ CD16+ CD33 low HLA-DR- 。

分析策略：

排除雙連體細(xì)胞和非造血(CD45陰性)細(xì)胞，降維聚類分析。（下圖）

結(jié)果表達(dá)：

根據(jù)生物學(xué)知識(shí)和標(biāo)記表達(dá)合并為8個(gè)細(xì)胞亞群，如 tSNE和熱圖，白細(xì)胞群的t-SNE圖（左）和側(cè)向散射區(qū)（SSC-A）以及表面標(biāo)志物的表達(dá)水平（右）。Lin+：譜系（即CD3，CD19，CD56）陽性;DC：樹突狀細(xì)胞

結(jié) 論

1、膿毒癥患者M(jìn)-MDSCs和PMN-MDSCs表達(dá)情況：

與健康受試者相比，膿毒癥患者中M-MDSCs和PMN-MDSCs都是增加的。但PMN-MDSCs增加與繼發(fā)性感染(p=0.024)和新的敗血癥發(fā)作(p=0.036)相關(guān)(圖2A)。

圖2A ：PMN-MDSCs與繼發(fā)性感染和新的膿毒癥發(fā)作的關(guān)系。

2、PMN-MDSCs：

幸存者和早期和晚期死亡（即≤28天和>28天）表達(dá)了相似水平的PMN-MDSCs（圖3B）。

M-MDSCs：相比之下，幸存者表達(dá)的M-MDSCs是早期死亡的1.64倍（4.6% [2.6-6.7] vs 2.8% [1.5-3.6]，p=0.028），盡管不顯著，但M-MDSCs是晚期死亡的1.55 倍 MDSCs (3.0% [2.3–4.7], p=0.19) (圖3B)。

圖3B：存活者(n = 14)、早期死亡(<28天，n = 23)和晚期死亡(> 28天，n = 12)中的M-MDSCs和PMN-MDCs。箱線圖顯示中位數(shù)、上位數(shù)和下位數(shù)。胡須顯示5到95個(gè)百分點(diǎn)。每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)單獨(dú)的樣本

3、將高M(jìn)-MDSC水平與 (APACHE,低值的急性生理和慢性健康評(píng)估) II評(píng)分相結(jié)合可以改善患者分層(M-MDSCshigh/APACHE IIlowvs M-MDSCslow/APACHE IIlow: 90天死亡率為20% vs 80%)。（黃色VS綠色）

4、高水平 M-MDSCs 患者的 90 天死亡率降低（高vs低 MDSCs：47% vs 84% 死亡率，（圖 4A），在多變量分析中，高M(jìn)-MDSCs與低APACHE II評(píng)分患者的生存改善相關(guān)。

圖4 ：M-MDSCs水平高低(<4.3%，白細(xì)胞>4.3%)(A)， MDSCs水平高低與APACHE II評(píng)分高低(<20，> 20)相結(jié)合(B)的Kaplan-Meier 90天生存曲線。采用log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異評(píng)估；縱坐標(biāo)：存活率

5、研究表明M-MDSCs與伴有多器官衰竭的肺炎和敗血癥患者的良好預(yù)后相關(guān)。這些觀察結(jié)果為進(jìn)一步研究MDSCs 在嚴(yán)重膿毒癥和多器官衰竭患者中的作用提供了動(dòng)力，并有助于破譯調(diào)節(jié)細(xì)菌性膿毒癥中 MDSCs 擴(kuò)增和激活的機(jī)制。

文章亮點(diǎn)

1、迄今為止的實(shí)驗(yàn)調(diào)查和所有臨床研究表明，MDSCs在膿毒癥期間是有害的 [2]。入院時(shí)高水平的 MDSCs與手術(shù)感染性休克患者的早期死亡率相關(guān)，而在第 6-8 天高水平的 M-MDSCs 與感染性休克患者的死亡率和繼發(fā)性感染相關(guān)。

2、有趣的是，文章提出MDSCs 在膿毒癥中發(fā)揮著雙重作用。雖然是假設(shè)性的，但這個(gè)假設(shè)是建立在幾個(gè)事實(shí)之上的。首先，MDSCs 是吞噬細(xì)胞，它可以通過攝入和殺死微生物來幫助對(duì)抗感染。其次，MDSCs 可以抑 制由病原體分子模式或內(nèi)源性起源引起的全身或局部炎癥，后者在壓力或組織損傷期間釋放。

討 論

有幾個(gè)因素可以解釋文獻(xiàn)中報(bào)道的差異，例如病原體和感染部位、影響骨 髓生成和 MDSCs 生成的炎癥狀態(tài)、采血和下游治 療的時(shí)間，或MDSC的免疫表型分析 [3]。我們總結(jié)一下文章中提到的在流式實(shí)驗(yàn)中樣品選擇對(duì)結(jié)果影響的幾個(gè)因素：

1、在全血中比在 PBMC 中更容易檢測(cè)到 MDSCs [4]。早期對(duì)MDSCs研究的一個(gè)缺陷是缺乏對(duì)樣品處理的協(xié)調(diào)，Z 終缺乏對(duì) MDSC 亞群的區(qū)分。

2、PMN-MDSCs 而不是 M-MDSCs 對(duì) PBMCs 的冷凍/解凍敏感，而   M-MDSCs 比 PMN-MDSCs 對(duì)延遲血液處理更敏感 [5,6]。

結(jié) 論

本文實(shí)驗(yàn)中為了盡量減少分析變化，使用貝克曼 DURAClone管抽取后立即標(biāo)記全血，用實(shí)例證明貝克曼DURAClone干粉試劑不僅有利于結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化和可比性，還使您的實(shí)驗(yàn)操作變的更簡(jiǎn)單。

另外，精簡(jiǎn)后用單抗搭配的MDSCs方案：

注：可根據(jù)儀器通道選擇相應(yīng)的CD45

M-MDSCs表型為：CD11b + CD33 + CD14 + HLA-DR-/low 。

PMN-MDSCs表型為：CD11b + CD33 low CD14 - HLA-DR- 。

文獻(xiàn)出處

[1]Schrijver, I.T., Karakike, E., Théroude, C. et al. High levels of monocytic myeloid-derived suppressor cells are associated with favorable outcome in patients with pneumonia and sepsis with multi-organ failure. ICMx 10, 5 (2022). https://doi.org/10.1186/s40635-022-00431-0

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