【概述】

免疫印跡是研究蛋白質(zhì)功能和定位的常用技術(shù)。通常，蛋白質(zhì)樣品可在SDS-PAGE上分離并轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜上，然后用特異性抗體進(jìn)行檢測。與可重復(fù)利用Southern和Northern印跡的核酸技術(shù)不同，免疫印跡很難重復(fù)使用。

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】

通過加熱和去污劑剝離

? 標(biāo)準(zhǔn)印跡或印跡條，在硝酸纖維素或PVDF膜上。

? 封閉液。

? 剝離溶液：100 mM 2-巰基乙醇 (M301574)、2% (w/v) SDS (S108346)、62.5 mM Tris-HCl (T105291), pH 6.7。

? 磷酸鹽緩沖鹽（PBS）：10 mM 磷酸鈉、pH 7.2，0.9%（w/v）NaCl。

? 淺托盤，能容納膜

? 陽性和陰性剝離對照。

【樣品提取】

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】

1.   在通風(fēng)櫥內(nèi)，將印跡放入剝離溶液中，50 °C搖動孵育30分鐘。

2.   將印跡放入緩沖液中，搖動10分鐘。使用新鮮的緩沖液重復(fù)一次。

3.   可選: 重復(fù)初始檢測操作（省略一抗步驟），

4.   以確?？贵w已失活或從膜上剝離。

5.   將印跡放入緩沖液中，搖動10分鐘。

6.   繼續(xù)進(jìn)行封閉步驟，進(jìn)行下一輪的免疫檢測。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】

1.   有利于昂貴或量少或珍稀樣本的多次雜交；

2.   有利于用不同抗體分析單次印跡上的不同蛋白，比如不同亞型的抗體；

3.   有利于對異常結(jié)果進(jìn)行重分析或確認(rèn)；

4.   有利于糾正孵錯的抗體；

5.   節(jié)約試劑成本，并節(jié)約時間。

【儀器/耗材清單】