考馬斯亮蘭法（Bradford法）測(cè)定蛋白濃度 實(shí)驗(yàn)原理 雙縮脲法（Biuret法）和Folin酚試劑法（Lowry法）的明顯缺點(diǎn)和許多限制，促使科學(xué)家們?nèi)ふ腋玫牡鞍踪|(zhì)溶液測(cè)定的方法 1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法（Bradford法），是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計(jì)的這種蛋白質(zhì)測(cè)定法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點(diǎn)，因而正在得到廣泛的應(yīng)用這一方法是目前靈敏度Z高的蛋白質(zhì)測(cè)定法 考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的Zda吸收峰的位置（lmax），由465nm變?yōu)?95nm，溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色經(jīng)研究認(rèn)為，染料主要是與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸（特別是精氨酸）和芳香族氨基酸殘基相結(jié)合 在595nm下測(cè)定的吸光度值A(chǔ)595，與蛋白質(zhì)濃度成正比 Bradford法的突出優(yōu)點(diǎn)是： （1）靈敏度高，據(jù)估計(jì)比Lowry法約高四倍，其Zdi蛋白質(zhì)檢測(cè)量可達(dá)1mg這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大，蛋白質(zhì)－染料復(fù)合物有更高的消光系數(shù)，因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的多 （2）測(cè)定快速簡(jiǎn)便，只需加一種試劑完成一個(gè)樣品的測(cè)定，只需要5分鐘左右由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的過程，大約只要2分鐘即可完成，其顏色可以在1小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定，且在5分鐘至20分鐘之間，顏色的穩(wěn)定性**因而完全不用像Lowry法那樣費(fèi)時(shí)和嚴(yán)格地控制時(shí)間 （3）干擾物質(zhì)少如干擾Lowry法的K+Na+Mg2+離子Tris緩沖液糖和蔗糖甘油巰基乙醇EDTA等均不干擾此測(cè)定法 此法的缺點(diǎn)是： （1）由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白質(zhì)測(cè)定時(shí)有較大的偏差，在制作 標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)通常選用 g球蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，以減少這方面的偏差 （2）仍有一些物質(zhì)干擾此法的測(cè)定，主要的干擾物質(zhì)有：去污劑 Triton X-100十二烷基硫酸鈉（SDS）和0.1N的NaOH（如同0.1N的酸干擾Lowary法一樣） （3）標(biāo)準(zhǔn)曲線也有輕微的非線性，因而不能用Beer定律進(jìn)行計(jì)算，而只能用標(biāo)準(zhǔn)曲線來測(cè)定未知蛋白質(zhì)的濃度